Для начала переложите 20 миллилитров ферментированного образца винограда в стерильную 50-миллилитровую пробирку с завинчивающейся крышкой. Затем добавьте в трубку 10 миллилитров холодной воды и сделайте вихрь для гомогенизации. Центрифугируйте образец при 800 G в течение одной минуты при четырех градусах Цельсия.
Перенесите надосадочную жидкость в новую 50-миллилитровую пробирку и центрифугируйте при 3000 G в течение 20 минут при четырех градусах Цельсия. После сброса надосадочной жидкости повторно суспендируйте гранулу в одном миллилитре PBS. Переложите клеточную суспензию в двухмиллилитровую пробирку с винтовой крышкой и центрифугируйте при 14 000 G в течение двух минут.
Теперь ресуспендируйте гранулу в 978 микролитрах натрий-фосфатного буфера pH 7,4 и 122 микролитрах ДНК-буфера. Сделайте трубку вихревой и поместите ее при температуре четыре градуса Цельсия на срок от 45 минут до одного часа. Переложите один миллилитр образца в раствор для лизиса одну пробирку и закрутите крышку.
Трижды гомогенизируйте образец в кофемолке для бисера в течение 60 секунд каждый. Затем центрифугируйте в пробирке лизирующей матрицы Е в течение одной минуты при 16 800 G. Переложите супернант в чистую микропробирку и добавьте в пробирку 250 микролитров раствора для осаждения белка. Встряхните тюбик 10 раз, чтобы перемешать содержимое.
Центрифугируйте образец в течение пяти минут при 16 800 G и переложите надосадочную жидкость в стерильную пробирку объемом 15 миллилитров. Затем добавьте в надосадочную жидкость один миллилитр связующей матричной суспензии и перемешайте, перевернув пробирки в течение двух минут, прежде чем поместить их в штатив на три минуты. После удаления одного миллилитра надосадочной жидкости повторно суспендируйте матрицу в оставшейся надосадочной жидкости.
Перелейте 600 микролитров смеси в пробирку с фильтром и центрифугу. Затем сцедите поток и добавьте 500 микролитров промывочного раствора в трубку отстойного фильтра. Снимите спиновой фильтр и поместите его в свежую пробирку на пять минут.
После высыхания добавьте 50 микролитров теплой воды без ДНКазы на мембрану фильтра и аккуратно перемешайте матрицу наконечником для пипетки. Центрифугируйте при 14, 500 G в течение одной минуты для элюирования ДНК. Загрузите образец на агарозный гель.
Наконец, измерьте концентрацию ДНК.
