Выделение мозга из личинок дрозофилы и сбор S2 клеток Шнайдера

Для начала поместите личинок дрозофилы в 35-миллиметровую пустую чашку Петри и с помощью щипцов дважды промойте их водой из-под крана, чтобы удалить остатки пищи. Поместите 10 личинок на чашку для вскрытия, содержащую ледяной PBS. Расположите личинку тыльной стороной вверх и приколите каждый конец к тарелке.

Сделайте небольшой разрез на стенке тела заднего конца. С помощью ножниц для микродиссекции разрежьте стенку тела по дорсальной средней линии по направлению к переднему концу. Трижды промойте внутреннюю часть личинки PBS, используя пипетку Пастера, чтобы обнажить мозг.

Найдите и поднимите мозг с помощью щипцов, а также изолируйте мозг с помощью ножниц для микродиссекции. Перенесите препарированные мозги в микроцентрифужную пробирку, наполненную ледяным PBS, и соберите все мозги на льду. Выполните экстракцию РНК с помощью набора для микроподготовки РНК.

Для выделения клеток S2 Schneider добавьте пять миллилитров ледяного PBS в клеточную культуру Schneider. Переложите клетки в пробирку объемом 15 миллилитров, затем центрифугируйте при 1000 G в течение пяти минут при температуре четыре градуса Цельсия, чтобы гранулировать клетки. С помощью пипетки дважды промойте клетки ледяным ПБС и снова центрифугой.

Выполните экстракцию РНК с помощью набора для минипрепа РНК.