Экстракция общей РНК из мозга личинок дрозофилы и клеток S2 Шнайдера

Для начала удалите PBS из препарированного мозга дрозофилы с помощью короткого центрифугирования. Затем добавьте в образец 600 микролитров буфера для лизиса РНК и гомогенизируйте 10 раз пластиковым пестиком. Осмотрите пробирку под стереомикроскопом на предмет полного лизиса.

Центрифуга при 1000 G в течение 5 минут при температуре 4 градуса Цельсия для удаления остатков ткани. Перелейте очищенную надосадочную жидкость в новую пробирку для микроцентрифуги. Изолируйте РНК с помощью набора для микроподготовки РНК в соответствии с инструкциями производителя.

Для клеток S2 удалите PBS и изолируйте РНК. Определите чистоту и количество РНК, измерив отношение оптической плотности на 260 и 280 нанометров. Чтобы подготовить образец для электрофореза, разбавьте образец РНК до 40 нанограмм на микролитр и добавьте краситель, загружающий РНК.

Нагрейте образцы при температуре 70 градусов Цельсия в течение 5 минут. В агарозный гель загружают РНК-лестницу и образцы. Выполните электрофорез в буфере MOPS при напряжении 100 вольт в течение 60 минут и визуализируйте гель на УФ-трансиллюминаторе.

Визуализация изолированных РНК из мозга личинок дрозофилы методом агарозного электрофореза показала наличие одной полосы РНК около 600 нуклеотидов, что указывает на интактный препарат РНК.