Культивирование опухолевых фрагментов, обработанных с помощью чоппера, для получения 3D-органоидов глиомы пациента

1 Для начала возьмите опухолевую ткань2 у пациентов и обработайте ее измельчителем. 3 Наклоните чашку Петри, содержащую измельченную опухоль, на 4 градуса вверх до 45 градусов и осторожно удалите 2,5 миллилитров 5 среды H-GPSA. 6 Чтобы промыть кусочки опухоли, добавьте два миллилитра7 буфера для лизиса эритроцитов и инкубируйте в орбитальном шейкере 8 на медленной скорости.

9 Затем полностью выбросьте буфер для лизиса. 10 Затем добавьте четыре миллилитра полученной пациентом органоидной среды 11 к тканевым кусочкам, 12 и перенесите куски ткани в сверхнизкое крепление 13 шестилуночной пластины. 14 Инкубируйте планшет в орбитальном вибростенде 15 в течение двух-четырех недель.

16 Каждые два дня меняйте половину израсходованной среды 17 на предварительно подогретую свежую органоидную среду, полученную от пациента. 18 Для предотвращения гипоксии тканей 19 перенесите полученные от пациента органоиды 20 в стерильную стеклянную чашку Петри 21 и наблюдайте за морфологией тканей под микроскопом. 22 Затем с помощью скальпеля разрежьте клейкую ткань.

23 Органоиды, полученные от пациентов, полученные методом измельчителя, 24 достигли желаемой округлой формы в течение одной недели 25 по сравнению с измельченными вручную органоидами. 26 И количество органоидов, образованных 27, было значительно выше при использовании этого метода.