Получение гигантских униламеллярных везикул (ГУВ) для получения светорегулируемых обратимых белковых структур

Для начала приготовьте 5%-ный раствор поливинилового спирта со 100 миллимолярной сахарозой в ультрачистой воде. Перемешивайте в течение ночи при температуре 80 градусов Цельсия, встряхивая со скоростью 400 об/мин. Затем приготовьте липидный раствор в хлороформе с нужным составом.

Для приготовления ГУВ с помощью наконечника для пипетки намазывают на предметное стекло тонким слоем в 40 микролитров приготовленный раствор поливинилового спирта. Сушите этот слой при температуре 50 градусов Цельсия в течение 30 минут. Затем с помощью иглы нанесите пять микролитров липидного раствора на слой поливинилового спирта, и дайте ему высохнуть при температуре 30 градусов Цельсия в течение одного часа.

Теперь с помощью прокладки и второго предметного стекла соберите камеру на функционализированном предметном стекле, добавьте в камеру один миллилитр регидратационного буфера и инкубируйте в течение часа при комнатной температуре до образования GUV. Затем переверните камеру и аккуратно постучите по стеклянным поверхностям. Осторожно снимите предметное стекло с одной стороны, чтобы открыть встроенную камеру, и соберите GUV с помощью пипетки.

Поместите раствор в пластиковую трубку и дайте GUV отстояться в течение двух часов.