Для начала определите самок мышей с иммунодефицитом NSG, страдающих лептоменингеальной болезнью или ЛМД. Положите мышь под наркозом на операционный стол. Расположите нос мыши в модифицированном L-образном конусе стереотаксического аппарата, следя за тем, чтобы ноздри оставались беспрепятственными.
Осторожно потянув кожу вперед по брюшным поверхностям обеих ушных раковин, затем закрепите ее на носовом конусе с помощью скотча. Направьте кончики хирургических ножниц вниз от ушных раковин через затылочную кость. Сделайте небольшой разрез по средней линии размером от пяти до семи миллиметров прямо над пальпированной вогнутостью.
С помощью пары щипцов с тупыми наконечниками и наконечниками от одного до двух миллиметров аккуратно надавите на большую цистерну. Введите кончики в закрытое положение и откройте их, оказывая давление на твердую мозговую оболочку вниз. Продолжайте выполнять тупое рассечение до тех пор, пока твердая мозговая оболочка не станет четко различимой, а связанные с ней кровеносные сосуды не станут видны в зоне воздействия.
Теперь держите щипцы открытыми, чтобы втянуть окружающую мускулатуру. Затем прикрепите иглу 27-29 калибра к одномиллилитровому шприцу. Вставьте шприц под твердую мозговую оболочку, чтобы визуализировать скос.
Постепенно втягивайте поршень шприца, чтобы собрать как можно больше спинномозговой жидкости. Переложите жидкость в микроцентрифужную пробирку. Сразу же положите его на лед.
Центрифугируйте образец при 257 г в течение пяти минут при четырех градусах Цельсия. После аспирации надосадочной жидкости пипеткой подайте 500 микролитров стерильного PBS в клеточную гранулу. Центрифугируйте гранулу при 257 г в течение пяти минут при комнатной температуре.
Выбросьте надосадочную жидкость, затем переложите гранулу в 96-луночный планшет, содержащий кондиционированную среду HMC.
