Обнаружение экспрессии нейротрофических и транскрипционных факторов в наносекундных импульсных электрических полях (нПЭФ) стимулированных клетками RSC96

Для начала возьмите электростимулированные клетки RSC96 в чашках для культур. Затем с помощью гистологической ручки нарисуйте круги в местах, где клетки равномерно распределены на покровном листе. Добавьте в клетки от 50 до 100 микролитров пермеабилизационного рабочего раствора и инкубируйте при комнатной температуре в течение 20 минут.

Затем промойте клетки трижды PBS по пять минут каждая. Затем добавьте 3% BSA в круги, чтобы равномерно покрыть ткань, и инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 минут. После этого аккуратно удалите блокирующий раствор и добавьте в клетки соответствующим образом разведенное первичное антитело.

Поместите планшет для клеточной культуры во влажную коробку и инкубируйте в течение ночи при температуре четыре градуса Цельсия. Затем промойте клетки три раза PBS в течение пяти минут каждая, постоянно встряхивая. Добавьте соответствующее вторичное антитело и инкубируйте при комнатной температуре в течение 50 минут.

В конце инкубации поместите крышку в PBS и промойте ее три раза, встряхивая по пять минут каждый. Затем дайте предметному стеклу высохнуть и добавьте раствор для окрашивания DAPI на высохшее предметное стекло. Наконец, запечатайте высохшее защитное стекло с помощью антивыцветающей монтажной среды для флуоресценции.

Получение изображений с использованием определенных длин волн возбуждения и излучения для Alexa Fluor 488, SCI3 и SCI5. Микроскопический анализ показал рассеянные цитоплазматические бета-позитивные клетки S-100 красного цвета во всех группах, а повышенная интегральная оптическая плотность бета-флуоресценции S-100 наблюдалась в группе 5 киловольт на сантиметр по сравнению с контрольной группой и группой 10 киловольт на сантиметр. GFAP и Sox10-положительные клетки с рассеянной цитоплазмой наблюдались во всех группах во время сканирования клеток.

Тем не менее, экспрессия GFAP была значительно ниже в группе 5 киловольт на сантиметр по сравнению с контрольной группой и группой 10 киловольт на сантиметр. Клетки RSC96 в группе с температурой 5 киловольт на сантиметр показали значительно более высокое среднее значение экспрессии Sox10 в сером, что свидетельствует об усиленной экспрессии Sox10.