Измельчение и гомогенизация замороженных образцов межмышечной жировой ткани человека для выделения ядер

Для начала наполните канистру жидким азотом, поместите на рабочую площадку ступки, пестики, микросовки, шпатель, стеклянные пухи, пестик из нержавеющей стали, а также автоматический пуховик. Предварительно охладите стеклянные вниз в стакане, наполненном льдом. Наполните две ступки, содержащие пестик и шпатель, жидким азотом, чтобы охладить инструменты.

Тем временем добавьте в стеклянные пухи один миллилитр гомогенизационного буфера. Заполните обе ступки жидким азотом и вылейте в одну из ступок 50 миллиграммов образца межмышечной жировой ткани человека. Для измельчения нужно аккуратно надавить пестиком на кусок ткани, чтобы разломать его на мелкие кусочки.

Как только ткань измельчается, остается от одной четверти до половины раствора жидкого азота. Наклоните раствор, собирая измельченную ткань в губе раствора. Как только жидкий азот испарится, зачерпните измельченную ткань в стеклянные пухи, содержащие гомогенизационный буфер.

На автоматическом понижателе. Переместите стакан вниз и вверх пестиком из нержавеющей стали на 10 ударов в прямом направлении, а затем на 10 ударов в обратном направлении. Как только раствор помутнеет и освободится от каких-либо видимых фрагментов ткани, переложите его в предварительно охлажденную 1,7-миллилитровую пробирку с низким связыванием на льду.

Промойте пух 400 микролитрами гомогенизационного буфера и переложите его в пробирку с низким связыванием.