Подготовка и сбор эмбрионов дрозофилы для трансгенеза

Для начала намочите тряпочку растирающим раствором. Закрепите ткань на иглошлифовальной машине, затем подсоедините иглу к ножному воздушному насосу с помощью силиконовой капиллярной трубки. Установите иглу на иглодержатель кофемолки.

Отрегулируйте угол наклона иглы таким образом, чтобы она была согнута на 35 градусов к шлифовальной пластине. С помощью ручки грубого управления под микроскопом отрегулируйте положение кончика иглы до тех пор, пока он не окажется прямо над шлифовальной поверхностью. Затем используйте ножной воздушный насос, чтобы поддерживать внутреннее давление иглы на уровне 40 фунтов на квадратный дюйм.

Затем с помощью ручки тонкого управления кончик иглы коснется шлифовальной пластины. После шлифовки в течение трех-пяти секунд разрядите иглу, когда пузырьки воздуха начнут выходить из наконечника. Далее нагрейте пипетку объемом 200 микролитров внешним пламенем спиртовой горелки.

Когда кончик пипетки начнет плавиться, растяните его. Отрежьте ножницами запечатанный конец наконечника пипетки. Чтобы дехлорировать эмбрионы дрозофилы, удалите мух из виноградного сока агаровыми пластинами с помощью щетки.

Собранные эмбрионы промойте в клеточном ситечке с дважды дистиллированной водой. Высушите клеточное ситечко папиросной бумагой. Затем поместите высушенное ситечко в чашку Петри, содержащую 30% отбеливателя.

Вручную перемешайте сетчатое фильтр, чтобы обеспечить равномерное перемешивание. Промойте эмбрионы в воде двойной дистилляции в течение двух минут, прежде чем выбрать плавающие эмбрионы кистью, чтобы составить линию для дальнейшего трансгенеза.