Возрождение культур Sulfolobus acidocaldarius для экспериментов по эволюции температуры

Для начала используйте горелку Бунзена, чтобы осторожно нагреть тупую стальную проволоку. Проткните его в крышку двухмиллилитровой микроцентрифужной пробирки, чтобы создать отверстие шириной в один миллиметр. Поместите проколотые пробирки в автоклавируемый сосуд для стерилизации.

После того, как пробирки будут автоклавированы и охлаждены, заполните их 1,5 миллилитрами предварительно нагретого BBM + теперь используйте наконечник для пипетки, чтобы соскоблить от 50 до 60 миллиграммов культуры Sulfolobus acidocaldarius из глицеринового запаса. Переложите инокулянт в пробирки, заполненные BBM+. Держите неинокулированную пробирку с BBM+ в качестве отрицательного контроля.

Чтобы предотвратить утечку аэрозолей из проколотой крышки трубки, поместите термостойкую газопроницаемую мембрану на верхнюю часть крышки. Поместите инокулированные пробирки в термомиксер для инокуляции. После того как культуры достигнут необходимой оптической плотности, центрифугируют пробирки при 5000 G в течение двух минут при комнатной температуре.

Затем выведите надосадочную жидкость из пипетки, чтобы сбросить ее. Добавьте в гранулу 1,5 миллилитра теплого BBM+ и повторно суспендируйте клеточную гранулу в среде. Было обнаружено, что рост аналогичен при сравнении инкубации с использованием термомиксеров и в обычных инкубаторах.