Для начала с помощью предварительно охлажденного шпателя добавьте 100 мг порошка растительных тканей в многоярусную полипропиленовую микроцентрифужную пробирку. Затем сразу же добавьте в тюбик один миллилитр 20%-ного метанола. Поместите закрытую трубку на качалку на три часа при комнатной температуре.
Затем центрифугируйте пробирку при 9, 464 G в течение 10 минут и соберите надосадочную жидкость в флакон автосамплера LC-MS. Установите прибор LC-MS с источником ионизации электрораспылением и колонкой ВЭЖХ с обратной фазой. Для ВЭЖХ используйте 0,1% муравьиной кислоты в воде в качестве растворителя А и 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле в качестве растворителя В. Отрегулируйте температуру колонной печи до 45 градусов Цельсия и скорость потока до 0,5 миллилитров в минуту.
Уравновесьте столбик с 99% А и 1% В. Установите 30-минутный градиент для увеличения концентрации растворителя В с 1% до 50% в течение 26 минут, затем быстро вернитесь к 1% В через 26,01 минуты и держите в течение четырех минут. Настройте рабочие параметры масс-спектрометра.
Установите напряжение на границе раздела на четыре киловольта, расход распыляющего газа на три литра в минуту, а расход отопительного газа на 10 литров в минуту. Отрегулируйте температуру линии десольватации на 250 градусов Цельсия, температуру теплового блока на 400 градусов Цельсия и температуру границы раздела на 300 градусов Цельсия. Установите расход осушающего газа на 10 литров в минуту и давление диссоциационного газа, вызванного столкновением, на 17 килПа газа.
Метод построения МС в положительном режиме источника ионизации электрораспылением, включающий сканирования Q3 и Q1, охватывающие диапазон масс от 100 до 1 000 дальтон, при этом сканирование Q1 служит в качестве события обследования с автоматическим исключением изотопов. Добавьте ссылку ионного сканирования продукта к сканированию Q1 с массовым окном от 50 до 1 000 дальтон, энергией ячейки столкновения минус 20 вольт и временем события менее 0,2 секунды. Затем отрегулируйте метод MS, чтобы добавить сканирование ионов-предшественников в положительном режиме, равное длине метода LC с энергиями столкновений ячеек минус 20 вольт и временем событий 0,75 секунды.
Убедитесь, что во всех случаях включены функции автоматического исключения изотопов или деизотопирования. Установите значения основного заряда для монозамещенных, дизамещенных и тризамещенных фрагментов тропанового алкалоида. Затем к методу MS-MS добавим сканирование нейтральных потерь в положительной моде, равное длине метода LC с энергиями ячеек столкновений минус 20 вольт и временем события 0,75 секунды.
Убедитесь, что во всех случаях включены функции автоматического исключения изотопов или деизотопирования. Установите представляющие интерес нейтральные массы потерь для сложных эфиров на тропановых алкалоидах для сложных эфиров, полученных из тиглиевой кислоты, ацетильных групп и сложных эфиров фенилмолочной или тропной кислоты. Загрузите метод LC-MS и создайте файлы данных для интересующих образцов.
Как только колонка ВЭЖХ уравновесится при температуре 45 градусов Цельсия, введите от 10 до 20 микролитров образца.
