Для начала приобретите бульон Lysogeny или среду LB и добавьте в среду антибиотики. Разложите пять миллилитров среды в стерильные пробирки с крышками. Инокулируйте среду штаммами Escherichia coli, экспрессирующими плазмиды, взятые из морозильных камер, и инкубируйте культуру в шейкере в течение ночи.
Далее приготовьте 10 миллимолярный раствор тиофена сульфаниламида в ДМСО и вихре тщательно перемешайте. Развести культуры в обратном направлении от 1 до 100 раз в 10 миллилитрах среды, взятой в 15-миллилитровых конических пробирках. Вихрь коротко перемешать.
Добавьте культуры в соответствующие лунки 96-луночного планшета. После смешивания приготовьте серию разведения из рядов А в Е, передавая каждый раз по 50 микролитров раствора. Накройте пластину микропористой лентой и инкубируйте ее.
После снятия ленты, с помощью планшетного ридера, считайте оптическую плотность на 600 нанометрах GFP и mCherry. Наконец, запишите и нанесите на график данные в виде нормированной флуоресценции на клетку. Данные по соединениям 3-тиофена сульфаниламида свидетельствуют о том, что соединения 1A и 3B в разной степени ингибируют LuxR/HapR, в то время как 2B не обладает какой-либо активностью.
