Для начала закрепите консольный держатель АСМ на стойке для смены консольного станка. С помощью часовых щипцов закрепите выбранный консоль на держателе. Затяните винт на держателе, чтобы зафиксировать консоль.
Установите и зафиксируйте держатель консольного крепления на головке АСМ, которая лежит на подставке. Используйте функцию шагового двигателя в программном обеспечении АСМ, чтобы вывести головку АСМ в самую высокую точку. и установите эту позицию как 0.0.
Осторожно поднимите головку АСМ с подставки, затем установите ее на предметный столик, поместив ножки в соответствующие слоты. Чтобы откалибровать консоль, используйте функцию шагового двигателя, чтобы приблизить ее к поверхности образца. Затем нажмите на кнопку «Подход» в окне «Контактный режим для спектроскопии».
Опускайте консоль вниз с небольшим шагом 15 микрометров. Нажмите Acquire, чтобы захватить силовую кривую. Затем выберите силовую кривую, откройте ее в окне Менеджера калибровки и выберите Контактный режим в разделе Метод.
Теперь используйте функцию выбора диапазона подгонки и выберите кривую втягивания кантилевера для подгонки линейной кривой. Затем установите флажок Чувствительность, чтобы преобразовать единицу силы из вольта в ньютон. Поднимите консоль на 100–200 микрометров в жидкости и выберите функцию теплового шума Снова нажмите Select Fit Range и подогнайте колоколообразную кривую теплового шума с помощью кривой Лоуренса.
После подгонки кривой выберите коробку Spring Constant K. Убедитесь, что постоянная пружины близка к значению производителя, и запишите его для использования в будущем. Затем поместите образец сосудов сетчатки глаза грызуна или субэндотелиального матрикса на предметное стекло на сцену АСМ и визуализируйте сосуды сетчатки.
Выберите «Контактный режим» для спектроскопии в разделе «Эксперимент». Затем установите заданное значение силы на 0,5 наноньютона и нажмите Подход. С помощью винтов на столике АСМ аккуратно расположите консольный щуп в нужном месте образца.
Нажмите кнопку Подход, чтобы расположить консоль ближе к образцу, а затем нажмите кнопку Захватить, чтобы захватить кривые силы. Наконец, сохраните все силовые кривые для анализа. Кривые приближения и втягивания, полученные из капилляра сетчатки, выделенного у мышей с диабетом, были круче, чем у мышей без диабета.
