Для начала поместите свежеприготовленную предварительно подогретую среду для клеток Sf1Ep и размороженные клетки Sf1Ep в криопробирку на рабочую платформу. Добавьте один миллилитр клеточной среды Sf1Ep в криопробирку и аккуратно перемешайте. Переложите смесь в стерильную коническую центрифужную пробирку объемом 15 миллилитров, содержащую пять миллилитров клеточной среды Sf1Ep, и аккуратно перемешайте.
Центрифугируйте клеточную суспензию при 100 G в течение семи минут и выбросьте надосадочную жидкость перед тем, как снова суспендировать гранулу в 15 миллилитрах свежей клеточной среды Sf1Ep. Перенесите клеточную суспензию в колбу для культуры тканей T75 и поместите ее в стандартный инкубатор для влажной культуры тканей на одну неделю. После инкубации аспирируйте среду из колбы и промойте слой клеток пятью миллилитрами стерильного PBS.
После аспирации PBS добавьте в колбу 2,5 миллилитра трипсина-ЭДТА и закройте крышку. Выдерживайте колбу при температуре 37 градусов Цельсия в течение пяти минут. Осторожно постучите по колбе, чтобы выбить клетки, и наблюдайте под перевернутым микроскопом, чтобы убедиться в рассеивании клеток.
Добавьте пять миллилитров питательной среды Sf1Ep и раскачайте колбу, чтобы смешать с трипсином-ЭДТА. Перенесите клеточную суспензию в коническую трубку и количественно определите количество клеток с помощью гемоцитометра или автоматического счетчика клеток. Чтобы заморозить клетки Sf1Ep, вращайте клетки при 100 G в течение семи минут и повторно суспендируйте гранулу в среде Sf1Ep с добавлением 10% ДМСО.
Распределите по одному миллилитру клеточной суспензии в каждый криофлакон и заморозьте на ночь при температуре от минус 70 до минус 80 градусов по Цельсию.
