Для начала возьмите совместно культивируемые клетки MSC-Mito-GFP и ARPE19-Mito-RFP и удалите среду из 24-луночных планшетов. Промойте все ячейки один раз 500 микролитрами на лунку 4%-ного полиформальдегида. Добавьте 500 микролитров свежего 4%-ного полиформальдегида и зафиксируйте образцы на 20 минут.
Затем снимите фиксатор и промойте образцы три раза по 10 минут каждый с DPBS. После удаления PBS добавьте 500 микролитров на лунку блокирующего раствора и выдержите в течение одного часа при комнатной температуре. Затем удалите блокирующий раствор.
Чтобы приготовить раствор для окрашивания фаллоидином, разбавьте накопительный раствор 400x до 1x с PBS. Добавьте в каждую лунку по 200 микролитров раствора для окрашивания фаллоидина и выдержите в течение часа при комнатной температуре. Затем восстановите окрашивающий раствор и промойте образцы в течение 10 минут с помощью DPBS.
После снятия PBS выберите покровное стекло иглой для шприца и дайте ему высохнуть на воздухе. Нанесите небольшое количество монтажного материала на предметное стекло и осторожно переверните защитное стекло на предметном стекле, чтобы убедиться, что средство равномерно покрывает всю поверхность. Заклейте края лаком для ногтей.
Наблюдались туннельные нанотрубки или тротиловые структуры, устанавливающие межклеточные связи между похожими и разными типами клеток. Митохондриальный перенос наблюдался в клетках ARPE-19, содержащих зеленую точечную флуоресценцию от МСК, и в МСК, содержащих красную точечную флуоресценцию от клеток ARPE-19. Визуализация со сверхвысоким разрешением подтвердила образование ТНТ и детальный перенос митохондрий через ТНТ.
Количественное определение показало, что МСК были значительно более способны к донорству митохондрий по сравнению с клетками ARPE-19.
