Для начала вставьте микропипетку в съемник микропипеток и потяните иглу для микроинъекций. Совместите кончик иглы с делениями микрометра предметного стекла под рассекающим эндоскопом. Используя микрометр в качестве ориентира для измерения, используйте заточенную пару щипцов, чтобы сломать иглу до размера отверстия, немного превышающего диаметр клетки.
С помощью 50-миллилитрового шприца, оснащенного наполнителем для пипетки, полностью заполните иглу минеральным маслом. На аппарате для трансплантации поверните трехсторонний запорный кран так, чтобы его длинная рука была обращена к насосу микрошприца. Нажмите на поршень шприца с резервуаром, чтобы смыть все пузырьки воздуха из гидравлической магистрали.
Поддерживая легкое давление на поршень, поверните трехпозиционный запорный кран так, чтобы длинная рука теперь была обращена к шприцу резервуара. Затем вставьте иглу в держатель, не вводя пузырьков воздуха. Отрегулируйте иглу так, чтобы она была обращена прямо влево под углом от 10 до 15 градусов от горизонтали.
С помощью грубых и тонких микроманипуляторов маневрируйте кончиком иглы под объективом микроскопа, чтобы сфокусировать его. Если жидкость поступает в кончик иглы или выходит из него, отрегулируйте давление с помощью шприцевого насоса до тех пор, пока не будет наблюдаться стабильный мениск между маслом и RPT. Если масляный пузырь остался, переместите иглу вправо, чтобы извлечь ее кончик из RPT, затем обратно влево для изменения положения.
Перемещайте сцену вправо до тех пор, пока животное-донор не появится в поле зрения. Центрируйте и сосредоточьтесь на клетках, подлежащих трансплантации, выровняв иглу с клетками, находящимися непосредственно за пределами животного. Затем введите иглу в донорское животное и при необходимости рестабилизируйте масляный мениск на кончике иглы с помощью микрошприцевого насоса.
Приложите кончик иглы к интересующим клеткам и мягко отсосите с помощью микрошприцевого насоса. После взятия адекватных клеток извлеките иглу у донора и рестабилизируйте материал в кончике иглы. Переместите сцену так, чтобы первое животное-хозяин оказалось в поле зрения/в центре, и сосредоточьтесь на области, в которой должны быть размещены клетки, и выровняйте иглу по этой области, находящейся непосредственно за животным.
Затем введите иглу в животное-хозяина и рестабилизируйте масляный мениск на кончике иглы. Расположите кончик иглы в месте осаждения и слегка надавите микрошприцевым насосом до тех пор, пока из иглы не будет высвобождено нужное количество донорских клеток. Наконец, извлеките иглу из хоста.
Через 12 часов после трансплантации был успешно обнаружен донорский нейрон в передней области моторного ядра блуждающего нерва хозяина, демонстрирующий признаки здоровых нейритных выступов. Через два дня после трансплантации трансплантированный нейрон не только остался правильно расположенным, но и начал протягивать новый аксон к четвертой дуге глотки, что указывает на успешную интеграцию в организм хозяина.
