Для начала положите на лед коллаген, гидроксид натрия, стерильную сверхчистую воду, 10 раз PBS, одну микроцентрифужную пробирку, метакрилированную гиалуроновую кислоту и фотоинициатор. Затем поместите вкладыши для культуры тканей в пластину и промаркируйте ее. Чтобы приготовить три миллиграмма на миллилитр коллагенового раствора, смешайте коллаген высокой концентрации, один обычный гидроксид натрия, сверхчистую воду и 10 раз PBS.
Добавьте компоненты в микроцентрифужную пробирку и держите наконечник пипетки погруженным в воду при смешивании, чтобы предотвратить образование пузырьков. После этого центрифугируйте ячейки при 200 G в течение пяти минут при комнатной температуре. Затем аккуратно удалите излишки среды с верхней части каждого раствора для кондиционирования клеток, оставляя объем среды, необходимый для состояния.
Поместите эти растворы на лед. Добавьте рассчитанный объем раствора коллагена к каждому раствору для кондиции клеток. Далее добавьте расчетный объем 1% метакрилированной гиалуроновой кислоты, а затем 17 миллиграммов на миллилитр LAP в каждом растворе для клеточного состояния.
Перемешивайте каждую кондиционную пробирку по одной, держа наконечник пипетки погруженным в воду, чтобы избежать образования пузырьков, и добавляйте от 100 до 150 микролитров в каждую вставку для культуры тканей. Теперь включите ультрафиолетовую лампу с яркостью 385 нанометров при постоянном токе. Чтобы сфотографировать каждый гель, подвергните каждую лунку воздействию ультрафиолета в течение 45 секунд, по одному.
Затем поместите пластину при температуре 37 градусов Цельсия на 30-45 минут, чтобы сшить коллаген. Используя астральную базальную среду с содержанием 0,5% и два объема по объему и 1% по объему B27 без витамина А, нанесите жидкость под давлением в гели. Добавляйте фильтрующий материал в луночный планшет и вкладыши для культивирования тканей для нулевого потока.
Поместите тарелку при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа не менее чем на 18 часов или на срок до пяти дней.
