Стимуляция и инкубация образцов цельной крови для антиген-специфического анализа иммунитета хозяина к грибковым и вирусным патогенам

Для начала приготовьте пробирки для сбора крови объемом 2,7 миллилитра без антикоагулянта, с антигенами и костимулирующими антителами в стерильных условиях. Добавьте анти-CD28 и анти-CD49d в каждую пробирку, включая отрицательный контроль. Если вы заморожены, разморозьте готовые к использованию стимулирующие трубки при комнатной температуре примерно за 30-60 минут до стимуляции цельной кровью.

Забор венозной крови у донора или пациента осуществляется с помощью пробирок для забора крови с антикоагулянтом на основе гепарина лития. Пипеткой наберите необходимое количество гепаринизированной цельной крови в пробирки для стимуляции под стерильным верстаком. Осторожно переверните трубки примерно от 5 до 10 раз.

Затем поместите пробирки в инкубатор при температуре 37 градусов Цельсия. После четырех часов инкубации приготовьте один миллиграмм на миллилитр раствора брефельдина А в среде RPMI. На стерильном рабочем столе откройте пробирки, используемые для проточного цитометрического анализа.

Затем перенесите 1% объема образца раствора брефельдина А в пробирку для стимуляции. Инкубируйте закрытые пробирки при температуре 37 градусов Цельсия еще от 16 до 18 часов.