Разведение рыбок данио, сбор эмбрионов и встраивание личинок в легкоплавкую агарозу для визуализации in vivo

Для начала посадите родительских рыбок данио с желаемыми одиночными трансгенами в стандартные брачные клетки вечером накануне спаривания. Используя разделитель в брачной клетке, держите самцов и самок отдельно до начала спаривания. Уберите разделитель утром следующего дня, чтобы начать случку.

Самое позднее в полдень удалите родительских данио-рерио из аквариумов для разведения. Процедите воду из брачной клетки через сито, чтобы собрать зародыши. Затем поместите эмбрионы в чашку диаметром 100 миллиметров, содержащую среду E3, и держите их в инкубаторе при температуре 28 градусов по Цельсию.

После этого удалите неоплодотворенные яйцеклетки и мертвые эмбрионы из чашки с помощью пластиковой пипетки и стереомикроскопа. С помощью трехмиллилитровой пластиковой пипетки Пастера перенесите четырехдневных личинок после оплодотворения с репортерной экспрессией трансгена в микролуночную чашку со стеклянным дном. С помощью той же пипетки удалите излишки среды Е3.

Теперь возьмите растопленную легкоплавкую агарозу с водяной бани или термоблока. Добавьте в блюдо охлаждающую каплю легкоплавкой агарозы, накрыв стеклянное дно, где располагались личинки. Поместите личинки в нужное боковое положение до того, как агароза застынет.

Как только агароза застынет, добавьте в форму среду E3, содержащую максимум 0,02% MS-222, чтобы избежать высыхания агарозы.