Подготовка реагентов и материала тополя для инокуляции листьев in vivo

Начните с добавления экстракта картофеля, декстрозы и шнека в воду, чтобы приготовить картофельный шнек декстрозы или питательную среду PDA для грибковых штаммов. Нагрейте раствор до 100 градусов Цельсия в течение 10 минут до полного растворения компонентов. Бедный КПК средить в 25 миллилитровые пробирки.

Стерилизуйте все пробирки при температуре 121,1 градуса Цельсия в течение 30 минут. Затем охладите стерилизованные пробирки на чистом столе до 50-60 градусов Цельсия. Разлейте среду по культурным пластинам диаметром 9,0 сантиметра и охладите их при комнатной температуре.

Далее разрежьте мицелий грибкового возбудителя, культивируемого в среде КПК при температуре 28 градусов Цельсия в течение семи дней, примерно на 0,5 сантиметра квадратных кубиков. Инокулируйте грибные кубики в центр пластин PDA, следя за тем, чтобы стороны мицелия были обращены к среде. Затем культивируют, инокулируют грибковых возбудителей в термостатическом инкубаторе от семи до 10 дней.

После инкубации нарежьте среду КПК, содержащую грибной мицелий, на квадратные кубики со сторонами длиной от 1,0 до 1,2 сантиметра. Выберите только что созревшие полностью вытянутые листья с верхушки основных ветвей 1-летних клонов тополя, убедитесь, что листья свободны от вредителей, болезней и механических повреждений. Для однолетних ветвей гибридных клонов многолетнего тополя выберите верхние пятый-седьмой листья выбранных ветвей в качестве инокулированного материала.

Опрыскайте выбранные клоны или ветки тополя чистой водой. После высыхания протрите выбранные листья 75%-ным спиртом, либо за час, либо за сутки до проведения инокуляционных манипуляций.