Приобретение патотипа листьев и оценка устойчивости тополя к болезням стеблевого рака в лабораторных условиях

Для начала возьмите привитые листья тополя, которые хранятся в полиэтиленовых пакетах. Осторожно снимите с листьев пластиковые защитные пленки и аккуратно удалите иннокулянты мицелия с поверхности листьев. Наблюдайте и определяйте патотипы листьев каждого клона тополя, изучая форму и цвет некротических пятен.

Затем поместите листья в линейку на черном фоне. Сфотографируйте нижнюю поверхность листьев с помощью фотоаппарата, или отсканируйте их с помощью сканера, чтобы получить изображения с разрешением более 300 точек на дюйм. Откройте изображения больных листьев в программе ImageJ, 1.54G.

Установите масштаб в ImageJ в соответствии с линейкой, видимой на изображениях листьев. Затем с помощью инструмента «Палочка» на ImageJ определите поражения на листьях и измерьте площадь каждого некротического пятна. После измерения всех некротических пятен запишите значения площади и экспортируйте эти значения в виде таблицы для дальнейшего анализа.

Если поражения вокруг участков, покрытых мицелием, значительно больше, чем вокруг участков, покрытых ОАП, классифицируйте их как участки заболевания. Если на участках, покрытых мицелием, наблюдаются такие изменения, как цвет поражения, гифоподобные структуры, пикниды и конидии, определите их как участки заболевания. Рассчитайте среднюю площадь эффективных пятен поражения ОАП для каждого гибридного клона тополя.

Разделите инокулированные участки мицелия на две категории: начальные и неначавшиеся. Затем рассчитайте частоту заболеваемости тестируемыми клонами тополей. Рассчитайте среднюю площадь больных пятен на листьях.

Основываясь на средних площадях пораженных пятен по всем протестированным клонам тополя, установите пятиуровневый стандарт классификации заболеваний. Рассчитайте индекс заболеваемости каждого клона тополя, используя пятиуровневый стандарт классификации болезней. Затем, используя тест Шапиро-Уилка, проверьте нормальное распределение количества клонов тополя по разным уровням устойчивости.

Основываясь на индексе заболеваемости, классифицируйте все протестированные клоны тополя на пять или семь групп устойчивости. Очень высокая резистентность, высокая резистентность, резистентность, отсутствие резистентности и отсутствие восприимчивости, восприимчивость, высокая восприимчивость и очень высокая восприимчивость. Инокуляция возбудителя стеблевого рака индуцировала некротические поражения и даже пикнидоподобные структуры на листьях тополя.

Кроме того, положение листьев и условия освещенности листьев влияют на тяжесть заболевания листьев.