Анилиновое окрашивание в синий цвет для визуализации плазмодесмат в агроинфильтрованных листьях растений с помощью конфокальной микроскопии

Для начала приобретите листья Nicotiana benthamiana, инфильтрированные клетками агробактерии tumefacien, содержащей нужных векторов. Для визуализации плазмодесмат добавьте аликвоту в 200 микролитров 1%-ного анилинового синего на предметное стекло микроскопа. Затем с помощью лезвия вырежьте инфильтрированный участок листа подальше от жилки и перенесите его в раствор анилинового синего на предметное стекло абаксиальной стороной вверх.

Убедитесь, что образец ткани листа полностью погружен в воду, прежде чем накрывать его покровным стеклом. Поместите предметное стекло с образцом в эксикатор, прикрепленный к вакуумному насосу. Эвакуируйтесь в течение двух минут со скоростью менее 0,8 паскаля.

Затем медленно ослабьте давление и выдержите предметное стекло в темноте в течение 30 минут при комнатной температуре. Теперь визуализируйте флуоресцентный сигнал анилинового синего под лазерным сканирующим конфокальным микроскопом.