Этот протокол обеспечивает надежную модель животного спинного мозга боковой гемизекции, которая имитирует синдром Брауна-Секварда у людей, и новую комбинированную шкалу поведения для оценки асимметричного дефицита поведения. Эта модель hemisection мыши может более далее наше вникание неврологических нарушений которые происходят в синдроме Brown-Sequard в людях. В отличие от ваших упомянутых оценок, наша новая комбинированная шкала поведения может быть применена к любой форме, которая требует оценки асимметричной, локомотивной и лабораторной дефицита.
Использование этой, последовательной, естественной модели геми-раздела может облегчить сравнение экспериментального результата между фундаментальными и переводческих исследований. Использование последовательного результата с этой моделью может быть трудным для начинающих. Критическим шагом является размещение иглы вертикально в средней линии, в качестве руководства для индуцирования травмы.
После просмотра этого видео, вы должны иметь хорошее понимание того, как выполнять как хирургические и поведенческие процедуры. В день процедуры очистите хирургический стол 70%-ным этанолом и поместите на стол предварительно разогретую грелку. После покрытия хирургической области с стерильной хирургической драпировки, подтвердить отсутствие реакции на щипец-щепотку в анестезированной крысы.
Нанесите мазь на глаза животного, чтобы предотвратить высыхание роговицы, и побрить волосы, перелив грудные позвонки. Затем очистите обимению кожи тремя чередующимися скрабами на основе йода и этанола. Когда животное будет готово, найдите тринадцатое ребро и следуйте за ребром, чтобы определить его связь с позвонком Т-13.
Подсчитайте, чтобы определить T-9 позвонка, и использовать число пятнадцать скальпель лезвие, чтобы сделать три-четыре сантиметра средней линии кожи разрез в течение восьми до одиннадцатого позвонков спинных процессов. Переместите крысу под хирургическим микроскопом, и прямо вскрыть и отделить параспинаальные мышцы боковой от спинных процессов к граням Т-9 и Т-10 позвонков с обеих сторон. Disablise позвоночника с измененным стабилизирующим держателем, сделать щель по обе стороны боковой кости позвонка, и слайд нержавеющей стали руки держателя под подвергаются поперечных аспектов процесса.
Затяните винты, чтобы обеспечить держатель, и использовать protractor подвергать T-8 до 11 позвонков laminae и спинных процессов. Используя rongeur, отрезать T-9 спинной процесс, и удалить небольшую часть ламины, слева от средней линии и всей правой части ламины, как можно зже. Затем вставьте ronguer осторожно под ламина, и резать один маленький кусочек кости в то время, пока желаемая область ламинэктомии завершена.
Далее, определить спинной средней линии спинного аккорда, и вставить 30-го калибра иглы вертикально через середину, в спинномозговой аккорд, вся путь к брюшной стенке позвоночного канала, с скошенной лицом вправо. Остановить кровотечение с небольшим куском стерильной пены гель, и вставить один кончик пары iridectomy микрохирургии ножницы через середину иглы трек, а другой кончик вдоль боковой поверхности правого hemichord, чтобы сделать полный разрез на правом hemichord. Используйте боковой край той же иглы, как нож, чтобы прорезать разрыв поражения, чтобы подтвердить полную правую подмигивание.
И визуализировать дно позвоночного канала, чтобы проверить полноту правильной гемизекции. Используйте цементную смесь для строительства узкого моста над губкой, а также спинных процессов Т-8 и Т-10. Затем, шов мышцы и слои кожи отдельно с 4/0 шелковой нити, и вводить 0,9% стерильных солевой подкожно для поддержания гидратации.
Нажатие мочевого пузыря два-три раза в день в течение первой недели, и один-два раза в течение следующих недель, пока спонтанное нарушение мочевого пузыря возвращается. В соответствующее экспериментальное время указывает после процедуры, поместите взрослую крысу в открытое поле эксперимента, и изучить движение животного в течение четырех минут. Используя таблицу, назначьте значение 1 для yes'and 0 для no'for каждой категории поведения, и суммировать общую стоимость, чтобы дать окончательный односторонний балл шага hemisection 0-8.
Для анализа соединения ворот завехайте экспериментальное животное, гуляющее по узкому устройству взлетно-посадочной полосы, и назначьте оценку 0 для no'1 для regular'and/or clumsy'and 2 для normal'for каждой категории соединения. Для оценки контактного размещения удерживайте животное в вертикальном положении, чтобы обе задние конечности были доступны для ответа на размещение, и чистите спинную поверхность одной задней конечности слегка вперед к краю поверхности. Наблюдайте размещение ноги на поверхность, и назначьте контакт задней конечности помещая счет 0 для никакого placement'and 1 для placement'For grid-walking оценки, поместите крысу на повышенном тридцать шесть на тридцать восемь сантиметров пластиковой сетки сетки проволочной сетки с 3 см в квадрате отверстия, и видеозапись крысы ходить свободно через платформу в течение 30 шагов, чтобы позволить количественное определение числа ног промахов для каждого
Амино флуоресцентное окрашивание поперечного сечения в эпицентре травмы показывает полную потерю правого гемикхорда. И сохранение левой гемихорд контралатеральной травмы. Оценки индивидуальных показателей оценки ворот могут быть проанализированы отдельно, или они могут быть объединены в составное комбинированное поведение после оценки гемизекции.
В первые три дня после травмы, крысы теряют способность к шагу, с шагом, как движения начинают появляться на ipsilesional стороны на 7 10 дней после травмы. И с большинством шагов спинной шаги. Через 28 дней после hemisection Т-9, крысы могут принимать подошвеные шаги с практически нормальной координации.
Для сравнения, противная задняя конечность меньше прерывается с односторонним оценка подлготовки снижается в течение первых пяти дней после травмы, и возвращение к исходной линии на 10 день, после травмы. Для общего теста соединения ворот, как стабильность и адаптивность координации после подмиговорки, заметно снижается в течение первых пяти дней после травмы. Контактное размещение и сетка ходьба из ипсилатеральной задней конечности также страдают, как правило, восстанавливается, когда животное начинает принимать подошвевые шаги.
Это может быть трудно производить чистый вырезать травмы. Размещение иглы в середине может быть полезным ориентиром для страхования полного разделения ткани.
