Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в неврологии, такие как изменения в нейрохимии во время естественной истории неврологических заболеваний. Основным преимуществом предлагаемой методики ЭЭГ микродиализа является то, что такой комбинированный подход позволяет сопряжение изменений в высвобождении нейромедиатора на определенных стадиях развития и прогрессирования заболевания. Начните с переключения усилителя, расположенного за пределами клетки Фарадея.
Откройте программное обеспечение ЭЭГ и начните приобретение ЭЭГ и соблюдайте сигнал ЭЭГ, производимый неподключенными кабелями. Затем соедините животное с привязанной системой записи ЭЭГ, удерживая голову животного между двумя протянутыми пальцами одной руки и привинчивая разъемы к пьедесталу электрода другой свободной рукой. Установите коэффициент усиления на каждом канале усилителя в соответствии с электродом сигнала одного животного, чтобы сигнал ЭЭГ был в масштабе.
Тогда пусть животное исследовать новую клетку, по крайней мере один час под прямым наблюдением исследователя. Отрегулируйте кабель в соответствии с товаром животного и убедитесь, что кабели не мешают движениям животного и лежащей позе. Наконец, проверьте правильное обрамление изображения на видеокамерах, а затем запустите видеозапись ЭЭГ.
Начните с подготовки микродиализа зондов для первого использования в соответствии с руководством пользователя производителя и заполнить их с Ringer's Solution. Затем вырежьте 10-сантиметровые кусочки FEP Tubing и соедините их с канюлями входов и выходов зонда с помощью трубчатых адаптеров разных цветов. Убедитесь, что трубки касаются адаптеров без мертвого пространства во всех соединениях.
Удалите манекен канюли из руководства с помощью пинцета, крепко держа голову животного. Вставьте зонд microdialysis в канюлю направляющий выступ и используйте модельируя глину для того чтобы более далее затять вверх по cannula. Затем подключите животное к привязанной системе записи ЭЭГ.
Затем поместите животное в плексигласовый цилиндр и дайте ему исследовать новую среду. Следуйте бодрствующим и свободно перемещающимся движениям крыс. Затем подключите вход зонда к 2,5 миллилитровому шприцу с притупленной иглой 22 калибра, содержащей решение Ringer's Solution с помощью трубчатых адаптеров.
Нажмите один миллилитр ringer's Solution в зонд за 10 секунд, непрерывно толкая поршень 2,5 миллилитрового шприца. Проверьте падение жидкости, появляющиеся на выходе, чтобы обозначить, когда зонд готов к использованию. Наконец, заполните 2,5 миллилитровые шприцы, подключенные к трубкам FEP, трубя адаптеры с ringer's Solution и смонтировать их на инфузионный насос.
Запустите насос в два микролитров в минуту, и пусть он работает на ночь. После проверки с помощью видеозаписи ЭЭГ записи отсутствия изъятий в течение трех часов, предшествующих сбору образцов, остановить насос проведения FEP трубки каннулированные шприцы заполнены Ringer's Solution. Установите еще один набор из 2,5 миллилитров шприцев, подключенных к трубкам FEP с трубчатыми адаптерами, заполненными модифицированным решением Ringer's Solution, содержащим 100 миллимолейный калийный раствор.
Запустите насос в два микролитера в минуту и дайте ему работать. Проверьте наличие пузырьков воздуха в системе и убедитесь, что трубки касаются адаптеров без мертвого пространства во всех соединениях. Затем проверьте падение жидкости, появившейся на выходе, чтобы обозначить, когда зонд готов к использованию.
Затем соедините трубки FEP шприцев, заполненных раствором Ringer's Solution, с внушевой канюлей зонда в каждом животном и дождийтесь появления жидкой капли на кончике розетки. Подключите розетку зонда к трубе FEP, что приводит к сбору в пробирке. Вставьте трубки FEP в закрытую пробирку 0,2 миллилитров с перфорированной крышкой и убедитесь, что трубка остается на месте, фиксируя ее куском глины для моделирования.
После запуска насоса на двух микролитерах в минуту в течение 60 минут, не собирая образцы для эквивалентности системы, соберите пять последовательных 30-минутных образцов диализа в базовых условиях и храните образцы на льду. Через 10 минут переключите трубку со шприцев, содержащих 100 миллимолянный калий Ringer's Solution, на нормальное решение Ringer's Solution и дайте насосу работать. После сбора пятого после эквилибрации диализа, собирать 20 микролитер диализа фракций каждые 10 минут в течение одного часа.
Затем соберите еще три 30-минутных образца диализа и остановите насос. Наконец, хранить образцы при температуре минус 80 градусов по Цельсию после эксперимента до анализа HPLC. После завершения эксперимента промыть использованные зонды микродиализа дистиллированной водой и хранить их во флаконе, наполненном чистой дистиллированной водой до следующего использования.
Наконец, промыть всю установку микродиализа дистиллированной водой с последующим 70 процентов этанола. Замените этанол воздухом и храните установку в стерильной среде. Это репрезентативные следы ЭЭГ, зафиксированные из гиппокампа контрольных и эпилептических крыс во время хронической фазы заболевания.
Никаких изменений ЭЭГ не наблюдалось у контрольных крыс, в то время как синхронизированная пароксизмальная эпилептическая активность наблюдалась около 500 миллисекунд до и во время поведенческих припадков у эпилептических крыс. Концентрация базального глутамата у хронических эпилептических крыс была значительно выше, чем у контрольных животных. Высокий калий вызвал дополнительный выброс глутамата в течение примерно 30 минут в борьбе крыс и около 60 минут в хронических эпилептических крыс.
При попытке этой процедуры, важно помнить, что животные, имплантированные с устройством склонны потерять его в течение длительного эксперимента, так что используйте свет голову набор и достаточно длинные кабели, чтобы избежать вмешательства в мобильность животных. В зависимости от наличия соответствующего аналитического эссе, метод может быть дополнительно использован для тестирования различных растворимых молекул в головном мозге при использовании записи ЭЭГ в то же время. После его развития, этот метод позволил исследователям в области эпилептологии, чтобы обеспечить понимание изменений в возбуждающей нейротрансмиссии в случае эпилепсии височной доли.
После просмотра этого видео, мы надеемся, вы будете иметь лучшее понимание того, как выполнить микродиализ in vivo вместе с глубиной электрода ЭЭГ записи в свободно движущихся эпилептических крыс.
