Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области фармацевтических наук о интраназальной администрации и фармакокинетики и фармакологии препаратов, представляющих интерес. Основным преимуществом этого метода является то, что его можно использовать для количественной оценки кандидатов препарата от носа до мозга и ингаляционной анестезии с минимальным стрессом для животных. Последствия этого метода распространяется на терапию заболеваний центральной нервной системы, поскольку она способствует развитию технологий доставки лекарств через нос к мозгу маршрута.
Демонстрацией процедуры будет Мицуёси Фукуда, аспирант из моей лаборатории. Для интраназальной доставки через микропипют в изолированном радиоизотопном объекте. Лента и анестезировать мышь к пробковой доске в положении на спине, и управлять 25 микролитров углерода-14 инулиновый раствор в одной-двух дозах микролитера, в качестве альтернативы, в правую и левую ноздри животного.
Для обратной канюляции доставки со стороны дыхательных путей через пищевод, поместите анестезировал мышь под рассечение микроскопа, и сделать 1,5 сантиметра разреза кожи над горлом. Используйте типсы, чтобы расширить разрез до тех пор, пока трахея подвергается, и сделать один миллиметр разрез в открытой трахеи. Вставьте канюлю на 1,2 сантиметра в предварительно обозначенную позицию в разрез и прикрепите противоположный конец канюлы к внутренней стороне ингаляционной маски.
После этого используйте типсы, чтобы разоблачить пищевод из-под трахеи. Используйте ножницы, чтобы сделать один миллиметровый разрез в пищеводе и вставить вторую канюлю 1,4 сантиметра в предварительно обозначенном положении к задней части носовой полости. Важно вставить канюлю на соответствующую длину в зависимости от веса экспериментального животного и настроить длину канюлы в других.
Ligate пищеводной канюли и прикрепить 27-калиберной иглы на один миллилитр шприц заполнены административным решением, подключенным к программируемой микросирингой насоса. Затем поставить 25 микролитров инулина углерода-14 при постоянной пятиминерной скорости в минуту до тех пор, пока весь объем раствора не будет введен. Медленная, но постоянная скорость диффузии имеет важное значение для удержания как можно большего лекарственного раствора в полости носа.
Для количественной оценки количества инулина углерода-14, который пересек гематоэнцейный барьер через 30 минут после введения инулина, используйте ножницы, чтобы тщательно открыть череп каждого экспериментально обработанного животного со стороны медуллы продолговатой, и используйте микроспатулу, чтобы тщательно вычерпыть мозг. Поместите каждый мозг на кусок солевой увлажненной фильтровальной бумаги в чашку Петри на льду во время сбора урожая. И использовать солевой ватный тампон, чтобы очистить любую кровь от поверхности каждого мозга.
Далее, быстро, но осторожно, вскрыть мозг в обонятельные лампы, головной мозг, и medulla продолговатый, а также понс разделов. И поместите образцы мозга в ткани solubilizer в течение одного часа при 50 градусах по Цельсию, а затем добавление 10 микролитров жидкого коктейля сцинтилляции. Чтобы определить радиоактивность применяемого раствора, перенесите 25 микролитров алицита административного раствора, растворенного в сцинтилляционном коктейле, в сцинтилляционный флакон и измерьте распады в минуту радиоактивности углерода-14 в образце мозга и применяемом растворе в жидком счетчике сцинтилляции.
Под ингаляционной анестезией не наблюдается экспериментальных межи индивидуальных вариаций среди интраназально-лекарственных животных. При использовании метода введения пищевода обратной каннулы носовой полости используется значительно более высокие уровни инулина углерода-14 в обонятельной луковице, мозге и медулле продолговатой, чем при доставке микропайпта. Кроме того, более высокий уровень углерода-14 инулин обнаруживается в обонятельной лампы и медулла продолговатый, оба из которых заметно-превратилась в нос к мозгу пути, чем в мозге.
После своего развития, этот метод проложил путь для исследователей в области доставки носа к мозгу, чтобы исследовать биоактивность крупных молекул терапевтических агентов в центральной нервной системе.
