Такой подход позволяет количественно оценить известные ПФАС и обнаружение новых веществ в одних и тех же образцах по сравнению с целевыми подходами, которые не позволяют создавать новые соединения, вызывающие озабоченность. Этот протокол нацелен на более широкий спектр соединений ПФАС, которые являются репрезентативными для новейших новых химических веществ. Если шаг концентрации адаптирован для соединений, методы измерения, используемые здесь, могут быть применены к любому классу химических веществ.
Чтобы собрать образец с поля, носите нитриле перчатки и собирать от 500 до 1000 миллилитров воды из поля месте в чистой, высокой плотности полиэтилена, HDPE, или полипропилен бутылку. Добавьте пять миллилитров консерванта 35%nitric кислоты в бутылку образца и в поле пустой, и транспортировать образцы обратно в лабораторию. Налейте каждый образец в отдельные, предварительно очищенные, один литр, высокой плотности полипропилена окончил цилиндров, и записывать точный объем образцов.
Добавьте 10 миллилитров метанола в каждую очищенную бутылку образца перед укупоркой и встряхиванием энергично, чтобы промыть впитанные в них вещества, или ПФАС, из интерьеров бутылок. Затем верните измеренный образец воды в промытую бутылку с метанолическим полоскать. Чтобы получить стандартную кривую для количественной оценки, заполните восемь пустых, однолитровых образцовых бутылок с деионизированной водой без ПФАС, и обозначите бутылки восемью равномерно размекретыми концентрациями, охватывающими желаемый диапазон количественной оценки.
Затем добавьте количество родной смеси ПФАС в каждую бутылку, чтобы дать соответствующие концентрации ПФАС, и добавьте внутреннюю стандартную смесь ПФАС к каждому образцу в концентрации, приближенной к средней точке кривой калибровки. Затем фильтруйте образцы через стекловолокно А фильтры под нежным вакуумом в отдельные, предварительно очищенные, однолитровые полипропиленные вакуумные колбы высокой плотности. Если твердые частицы остаются в бутылке, промойте дополнительную деионизированную воду и профильтруйте стирку в колбу.
Для извлечения твердой фазы, вернуть фильтрованную воду в бутылку образца, и состояние слабого анионные обмена, или WAX, картридж с 25 миллилитров метанола и дополнительные 25 миллилитров деионизированной воды. Распоить насос рисовать трубки в фильтрованных бутылок образца, и этикетки твердой фазы извлечения, или SPE, картриджи с соответствующими названиями образцов. Насос 500 миллилитров каждого образца через каждый картридж с постоянной скоростью потока 10 миллилитров в минуту, отбрасывая поток через.
Удалите картриджи WAX SPE из поршневых насосов и перенесите картридж SPE в вакуумный многообразный, оснащенный внешними стеклянными резервуарами. Промыть каждый картридж SPE с четырьмя миллилитров 25-миллимолярный, рН четыре ацетата натрия буфера под нежный вакуум, а затем четыре миллилитров нейтрального метанола мыть. В конце стирки поместите 15-миллилитровую полипропиленовую центрифугу под каждый картридж SPE для сбора элюента и уберите образцы с четырьмя миллилитров 0,1%аммония гидроксида в метаноле.
Затем удалите трубки элюции и уменьшите объем элуата до 500-1000 микролитров путем испарения под сухим потоком азота в водяной бане при 40 градусах Цельсия. Для целенаправленной жидкой хроматографии с тандемной масс-спектрометрией разбавляйте 100 микролитров экстракта образца 300 микролитров двухмимолярного ацетата ацетата аммония в флаконе образца высокой нагрузки, а также подготовите аналитический рабочий список, состоящий из стандартной кривой, образцов и дополнительной репликации стандартной кривой для оценки инструментального дрейфа по ходу. Проанализируйте образцы с помощью стандартной жидкой хроматографии и методов масс-спектрометрии, установленных для целевых соединений, представляющих интерес.
В конце анализа создайте стандартную кривую из стандартных образцов, используя пиковое соотношение области аналита к внутреннему стандарту по сравнению с концентрацией анализатора, и создайте четырехугольную формулу регрессии с формулой 1 над x весом для прогнозирования концентрации. Количествейте целевые анализы в каждом образце, используя подготовленные стандартные кривые и соотношение площади для каждого измерения. Если концентрация превышает диапазон калибровки, разбавьте исходный образец с деионизированной водой с соответствующей внутренней стандартной концентрацией и повторно извлекайте, чтобы довести концентрацию до соответствующего диапазона.
Для нецелитарной жидкой хроматографии с тандемной масс-спектрометрией разбавляйте 100 микролитров экстракта образца 300 микролитров двухмимолярного ацетата ацетата аммония в флакон жидкой хроматографии высокого давления. После установки рабочего списка, как это было продемонстрировано, используйте программное обеспечение прибора для сбора жидких хроматографических-массовых данных спектрометрии с широким сканированием в зависимом от данных режиме. Для не целевой обработки данных откройте соответствующий пакет программного обеспечения для извлечения молекулярных функций, а также выберите Add/Remove Sample Files и Add Files, а также выберите необработанные данные из неконгетного эксперимента.
Нажмите OK и выберите пакет рекурсивного извлечения функций и открытый метод для загрузки заранее установленного метода или для ручного редактирования настроек программного обеспечения. Для каждой функции, оставшейся после фильтрации, создать прогнозируемые химические формулы из точной массы и композитного спектра массы, и открыть Агентство по охране окружающей среды CompTox химических веществ Dashboard Batch Search инструмент. Для поиска прогнозируемых химических формул или нейтральных масс против, чтобы вернуть потенциальные химические структуры, выберите тип идентификатора, и вставить список идентификаторов в идентификатор поле.
Выберите Скачать химические данные и любые физические, химические или токсикологические данные, желаемые для потенциальных совпадений из выпадают меню. Затем подтвердите структуры, используя имеющиеся стандарты и/или целевую тандемную масс-спектрометрию высокого разрешения, сопоставляя фрагменты со спектрами из баз данных, в силико-теоретических спектрах или ручном кураторстве. Количественная жидкая хроматография с тандемными результатами масс-спектрометрии представлена в виде ионных хроматограмм для общей ионной хроматограммы и извлеченных ионных хроматограмм специфических химических переходов для измеренных химических веществ.
Интегрированная пиковая область химического перехода связана с изобилием соединения и может быть использована для расчета точной концентрации с помощью кривой калибровки, нормализованной до внутреннего стандарта. Неконкурсный анализ с использованием полного сканирования MS дает полную ионную хроматограмму для образцов, что позволяет специальное поколение извлеченных ионных хроматограмм для отдельных ионов. Соединения ПФАС имеют отрицательные дефекты массы из-за преобладания атомов фтора, а полифторированные соединения имеют положительные, но значительно меньшие массовые дефекты, чем гомологичные органические материалы.
Второй шаг фильтрации метода заключается в выявлении гомологичной серии, содержащей повторяющиеся единицы, общие для видов ПФАС, используя соответствующий пакет программного обеспечения. Из данных о MS высокого разрешения одна или несколько химических формул с высоким разрешением могут быть сопоставиты с изотопными отпечатками пальцев массового спектра и забиты. Химические формулы могут быть дополнительно подтверждены, и некоторая структурная информация может быть получена из данных тандемной масс-спектрометрии.
Дальнейшие эксперименты по масс-спектрометрии могут быть использованы для подтверждения идентичности новых соединений, а сравнение образцов может дать информацию о распространенности и относительном количестве химических веществ. Очень важно иметь соответствующие пробелы и образцы контроля качества для матрицы для проверки количественных и не целевых измерений. Показанные стратегии стали новым подходом к экологическому скринингу ПФАС, позволив найти неизвестных и предсказать их личность.
