Эта муриновая модель нарушения миокарда позволяет контролировать патологические процессы, происходящие от коронарной окклюзии до поздней стадии сердечной недостаточности в местной сердечной ткани и системного уровня. Этот метод совместим с любым считыванием в настоящее время используется в сердечной биологии и физиологии. Кроме того, она выигрывает от огромного разнообразия генетических моделей мурина.
Приобретение адекватных хирургических навыков может занять некоторое время, чтобы освоить. Эта процедура лучше всего узнать шаг за шагом с опытным исследователем. Визуальная демонстрация этой модели murine позволяет делиться подсказками, которые могут помочь с хирургической процедурой и ускорить процесс обучения.
Используйте электрическую бритву, чтобы быстро брить обезболивающее, 25-30-граммовую, мужскую, C57-Черную/6 мышь на горле и левой стороне грудной клетки. Подтвердите отсутствие ответа на щепотку нося. Нанесите мазь на глаза животного.
Поместите мышь в положение лежа на грелке, и поместите небольшой марлевый компресс под голову, чтобы избежать перегрева глаз. Закрещив конечности клейкой лентой. Перейти петлю 5-0 шелковый шов под верхними резцами, и обеспечить конечности петли на грелку, чтобы держать рот открытым во время канюляции.
Нанесите крем на предварительно выбритые участки и аккуратно массируйте ватным тампоном в течение одной минуты. Удалите избыток меха и сливок марлей и очистите обитаемую кожу каплями 0,9%солевого раствора и марлей. Нанесите кусочки стерильной марли на бритое горло и грудную клетку и замочите марлю иодоповидоном.
Установите вентилятор на приливный объем семь миллилитров на килограмм и скорость вентиляции 140 ударов в минуту. Перемести мышь под стерео микроскоп микрохирургии. Удерживая кожу по центру горла, сделайте 0,5-сантиметровый разрез вдоль хвостовой/цефалической линии и разделте доли слюнной железы.
Используйте изогнутые миппы, чтобы аккуратно отделить фасцию стернохиоидной мышцы до тех пор, пока не будут видны гортань и трахея. Затем закрепьте края отверстия с помощью втягивателей, прикрепленных к резинкам. Затем аккуратно потяните язык в сторону и используйте типсы, чтобы вставить притупленную внутреннюю иглу канюли 16-го калибра в трахею.
Визуализуйте правильное введение в трахею через разрез горла и соедините канюлю с аппаратом искусственной вентиляции легких. Поместите стерильный 0,9% солевой раствор, дополненный пропитанной иодоповидоном марлей, на разрез, чтобы сохранить ткани влажными во время операции. Затем поместите выхлопные трубы в воду.
Наличие пузырьков указывает на успешную итубирование. Для перевязки левой передней нисходящей коронарной артерии, или LAD, осторожно перемести мышь в положение декубита правой стороны, и resecure левой передней конечности в новом положении. Определите линию между левой пекторалис незначительные и основные мышцы, и сделать косой один сантиметр кожи разрез вдоль линии.
Используя тупые рассечения микро ножницы, отделить фасции мышц пекторалис без incising тканей, и использовать втягивающие прилагается к резинкам для поддержания разделения. Установите вентилятор с положительным конечный уровень давления в три сантиметра воды. Используйте тупые типсы, чтобы открыть грудную полость на третьем межреберном пространстве между третьим и четвертым ребрами.
Поместите два ретрактора в грудную клетку, по одному на каждое ребро, и используйте изогнутые тонкие миппы, чтобы тщательно удалить перикард, не нанося вреда сердцу и легким. Найдите LAD как поверхностную ярко-красную линию, бегущую от края левой асикулы к вершине. Используйте держатель иглы, чтобы пройти 7-0 шелковый шов под LAD два-три миллиметра ниже левой атрии.
Тяговая шелк медленно, чтобы избежать разрыва ткани сердца, связать лигатуру с тремя узлами. Нижняя левая часть левого желудочка мгновенно побледнела при перевязки. Теперь отпустите реберные ретракторы, и, держа третье ребро с типсами, сделайте два прохода с 6-0 шелковым швом под третьим и четвертым ребрами.
Поместите три капли 37-градусного Цельсия 0,9% солевого раствора на отверстие, и закрыть выхлопную трубу истечения в течение двух или трех дыхательных циклов, чтобы правильно надуть легкие. Затяните и закрепте шов двумя бросками, и отпустите втягивателей, держащих мышцы, помогая мышцам вернуться к их правильному анатомическому расположению. Затем закройте грудную кожу двумя стежками и двумя бросками 5-0 швов шелка.
Закройте горло кожей одним стежком 5-0 швов шелка и двумя бросками. В конце процедуры снимите ленточных лент с конечностей, аккуратно поверните животное в брюшной декубит на компресс, и поместите компресс на грелку на правой стороне животного. Интраперитонально вводят 0,3 миллилитров 37-градусного Цельсия, разогретого 5%глюкозным раствором.
Остановите аппарат искусственной вентиляции легких. Если мышь спонтанно дышит, осторожно удалите канюлю. Подкожно вводят 0,1 миллиграмма на килограмм бупренорфина.
Поместите мышь в 30-градусную клетку по Цельсию, проветриваемую 100%-ным кислородом в течение по крайней мере одного часа с мониторингом. В течение двух первых дней после операции, обеспечить мышь с мягкой диеты и воды объявление libitum, потепление животных по мере необходимости. Через семь дней после операции ишемические участки остаются незапачканными хлоридом трифенилтетразола, в то время как живые ткани окрашиваются красным цветом из-за наличия дегидрогеназ.
Ишемические области могут быть рассчитаны как процент белой области левого желудочка в программе визуализации программного обеспечения. Западный анализ помарки для альфа-гладкого мышечного актина и фосфорилирования SMAD2, которые, соответственно, являются основными считываниями миофибробластов и трансформирующим фактором роста бета-сигнальной активации, может быть использован для определения степени фиброза в миокардах тканей инфарктных сердец. В режиме реального времени полимеразы цепной реакции анализа преобразования фактора роста бета и его вниз по течению целевой экспрессии мРНК также может быть выполнена для оценки присутствия фиброза миокарда.
Провоспалительные сигнальные пути и экспрессия провоспалительных генов, как правило, активируются в течение первой недели после инфаркта миокарда. также наблюдается экспрессия провоспалительных генов и моноцитов/макрофагов. Высота перевязки будет критически влиять на выживание и должна быть адаптирована к каждому штамму или генотипу, так как ветвление LAD может варьироваться.
Константы в перевязки является ключом к получению воспроизводимых результатов. Эта процедура может быть соединена с любым аналитическим методом и может сопровождаться функциональным анализом, фиксацией тканей, клеточной культурой или любой интересной техникой.
