В данном исследовании описывается настраиваемый метод создания модели функции миокарда в Miro путем прецизионного перевязки левой передней нисходящей коронарной артерии с помощью микроманипуляций. Этот протокол сокращает продолжительность процедуры, обеспечивает контролируемый размер инфаркта и улучшает выживаемость мышей. Используйте прямоугольный OT с грелкой, предварительно нагретой до 37 градусов Цельсия на протяжении всей хирургической процедуры.
Перед процедурой продезинфицируйте доску ультрафиолетом и 70%-ным спиртом. Начните с того, что положите мышь на ОТ в положение лежа на спине, подложив под голову марлю, чтобы избежать перегрева глаз. Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы предотвратить их пересыхание.
Нанесите крем для удаления шерсти на грудную клетку и равномерно помассируйте стерильным ватным тампоном в течение одной минуты. Протрите лишнюю шерсть марлей. Используйте повидон-йод, а затем 70%-ный спирт, чтобы очистить эту область, и накройте грудную клетку марлей.
Используйте шов 4-O под верхними резцами и закрепите его в точке крепления, чтобы рот оставался слегка открытым и облегчал канюлю. Потяните за хвост, чтобы тело держалось прямо, и закрепите его к ОТ с помощью скотча. Закрепите четыре конечности скотчем и затяните их на опорных точках.
Не перенапрягайте передние конечности, чтобы избежать нарушения дыхания. Используйте щипцы, чтобы открыть челюсть и приподнять язык. Затем с помощью осветителя визуализируйте горло и голосовую щель.
Осторожно введите канюлю 22 калибра с тупой усеченной иглой через рот в трахею примерно на один сантиметр ниже горла. Одной рукой придерживайте язык и слегка двигайте его вверх тупыми щипцами. Одновременно другой рукой аккуратно введите трубку в трахею.
Будьте осторожны, чтобы не ввести трубку в пищевод. Аккуратно извлеките иглу. Перед подключением к аппарату искусственной вентиляции легких проверьте интубацию, поместив трубку в воду для образования пузырьков.
Подключите эндотрахеальную трубку к аппарату искусственной вентиляции легких, настроенному на 120 в минуту, и дыхательному объему, отрегулированному до 250 микролитров. Проверьте интубацию, проверив двустороннее симметричное расширение грудной клетки. Затем закрепите соединение с ОТ скотчем, чтобы избежать его отвала.
Поместите электроды ЭКГ на лапы и подключите их к регистратору ЭКГ. Контролируйте электрофизиологию сердца на протяжении всей процедуры. Снимите марлю с грудной клетки.
Продезинфицируйте область разреза с помощью трех циклов скрабирования с 70% спиртом. Чтобы уменьшить загрязнение операционного поля, накройте мышь стерильной хирургической простыней с отверстием над операционным полем. Сделав скальпелем косой разрез кожи, обнажают ребра, проводя тупое рассечение подкожных тканей.
Будьте осторожны, чтобы не повредить сосуды, ребра и легкие. Используйте стерильные ватные аппликаторы, чтобы остановить кровотечение. Определите третье межреберье и сделайте разрез около шести-восьми миллиметров.
Затем вскрывают грудную полость, проводя тупое рассечение тканей в межреберье. Будьте осторожны, чтобы не травмировать внутреннюю грудную артерию. Протяните межреберье с помощью щипцов.
Вставьте предварительно стерилизованные самодельные ретракторы в грудную клетку и потяните назад, чтобы расширить разрез примерно до шести миллиметров в ширину. Прикрепите втягивающие устройства к ОТ с помощью резинок. Осторожно удалите окружающие ткани, чтобы полностью обнажить сердце.
Аккуратно оттяните перикард изогнутыми щипцами, не травмируя сердце. Используйте препарирующий микроскоп и направляйте сфокусированный и подходящий свет для визуализации LAD. Осторожно надавите на участок под выбранным положением лигирования, чтобы временно увеличить LAD, а затем повторно проверьте LAD.
Под препарирующим микроскопом используйте коническую иглу, чтобы пропустить 8-0 шелковая лигатура под LAD. Убедитесь, что игла находится недостаточно глубоко, чтобы войти в левый желудочек, и не слишком глубоко, чтобы не повредить LAD. Завяжите лигатуру свободным двойным узлом.
Поместите двух-трехмиллиметровую трубку из ПЭ-10 в петлю, параллельную артерии. Осторожно затяните лигатурную петлю, пока она не окажется вокруг артерии и трубки. Затем закрепите петлю скользящим узлом.
Следите за тем, чтобы не повредить стенку миокарда чрезмерным стягивающим давлением. Бледная окраска передней стенки левого желудочка после перевязки подтверждает прекращение кровотока в ЛАД. Если требуется постоянная перевязка, действуйте, как описано в текстовой рукописи.
Извлеките втягивающие устройства из разреза. Затем временно закройте рану бульдожьим зажимом. Убедитесь, что мышь по-прежнему подключена к аппарату искусственной вентиляции легких.
Когда период ишемии закончится, снимите бульдожий зажим и вставьте ретракторы, чтобы открыть разрез и обнажить сердце и место перевязки. Развяжите скользящий узел и снимите трубку ПЭ-10. Изменение бледной окраски на розово-красную свидетельствует о восстановлении кровотока.
Одновременно, чтобы обнаружить реперфузию, наблюдают ЭКГ на предмет потенциального растворения подъема сегмента ST. Оставьте 8-0 лигатуру in situ при последующем окрашивании в синий цвет Эванса и TTC. В противном случае снимите шов на этом этапе.
Снимите ретракторы и закройте разрез, зашив третье и четвертое ребра шелковым шовным швом 4-O. Будьте осторожны, чтобы не повредить легкое. Осторожно надавите на грудную клетку, завязывая шовные узлы, чтобы вытолкнуть воздух, который может попасть в грудную полость.
Закройте мышечные слои непрерывными шелковыми швами 4-O. Стандартные изображения экспериментального процесса были получены от эндотрахеальной интубации, разреза кожи, торакотомии, идентификации и перевязки LAD до реперфузии. Репрезентативные изображения ЭКГ верифицировали ишемию миокарда и реперфузию со значительным повышением сегмента ST после перевязки.
И растворение подъема ST после того, как узел скольжения был развязан. Перед торакотомией очень важно держать дыхательные пути открытыми, и самое главное – убедиться, что LAD прочно перевязан и избежать повреждений. За этой процедурой последует эхокардиография для оценки сердечной функции, а также ТТС для оценки повреждения миокарда.
