Этот протокол идеально подходит для оценки способности микроциркуляции головного мозга регулировать собственный кровоток во время изменения артериального давления при нормальных и патологических условиях. LDF обеспечивает относительно неинвазивный метод для непрерывного мониторинга мозгового кровотока в различных условиях, что невозможно с другими методами. Лазерная доплеровая тектерметрия может быть использована для неинвазивной оценки кровотока.
Например, оценить влияние высокосолевой диеты на нарушение регуляции кровотока у здоровых молодых женщин. LDF позволяет легко контролировать кровоток во многих различных сосудистых кроватях людей и животных, и может быть использован в самых разнообразных исследованиях. Демонстрацией процедуры с Адриенн Аллен будет Меган Стампф, мой научный технолог и руководитель лаборатории.
Перед началом процедуры поместите крысу на циркулирующее водное одеяло при 37 градусах по Цельсию и подтвердите отсутствие реакции на педаль рефлекса у обезболивающей экспериментальной крысы. Нанесите мазь на глаза животных и побрить верхнюю часть черепа, область брюшной шеи и бедренные треугольники. Удалите любые потери волос от открытой кожи.
И дезинфицировать кожу спиртом. Переместите крысу на грелку с циркулирующим тепло водяным насосом. И использовать медицинскую ленту, чтобы временно обеспечить крысу в положении на спине.
Заполните две канюли PE 50 с одной единицей на мл гепарина в растворе изотонического хлорида натрия. И скошен открытый конец катетеров с хирургическими ножницами для облегчения вставки в артерии. После тщательного отделения бедренных артерий от окружающих тканей под рассечением микроскопа, ligate дистальный конец изолированных бедренной артерии сегмента и место двух дополнительных швов вокруг среднего и проксимального конца артерии без затягивания узлов.
Вставьте V-образный провод, вылепленный из замядлой зажима под артерией, чтобы окклюдить сосуд до тех пор, пока канюля не будет защищена. Затем используйте ножницы vannas, чтобы сделать небольшой разрез в бедренной артерии вблизи дистальной перевязки. Вставьте скошенный конец канюли в разрез и заранее канюли в бедренную артерию.
Удалите зажим. Затяните узел в средней лигатуре над канюлей, чтобы закрепить канюлю на месте. Сьте напряжение на подъемную лигатуру, затем затяните проксимальную лигатуру и закройте разрез.
Сразу после того, как канюли на месте, поместите животное в кормовое положение. И закрести голову в стереотаксисе, заботясь о том, чтобы не выбить катетеры. Сделайте эллиптические разрезы в коже, покрывающие череп.
И использовать ватный тампон, чтобы удалить любые соединительной ткани, гарантируя, что череп чистый и сухой. Поместите небольшой, свернутый удлиненный кусок бумаги ткани вокруг разреза на кожу головы, чтобы остановить кровотечение и под рассечением микроскопа, используйте соответствующий размер сверла с 2,15 мм сверла бит тонкой 0,5 до 1 см области кости в теменной области над левой или правой соматосенсной коры, в зависимости от размера крысы. Тонкие кости медленно и осторожно, чтобы избежать проникновения черепа.
При выполнении этого шага, солевой раствор должен быть применен либерально, чтобы предотвратить область от чрезмерного нагрева. Когда область имеет розовый вид и / или кровеносные сосуды могут быть визуализированы, покрыть истонченные кости с минеральным маслом. И использовать микроманипулятор для позиционирования лазерного доплеровского зонда над открытой микроциркуляцией головного мозга, чтобы кончик зонда просто касался верхней части бассейна минерального масла.
Для первоначального размещения зонда, лучше всего начать с сигнала около 150 единиц, чтобы убедиться, что зонд расположен над микро циркуляции. Когда лазерный доплеровский зонд flowmetry находится на месте, дайте животному отдохнуть в течение 30-45 минут периода эквилибриции, прежде чем снять 1,5 мл крови из соответствующей канюли бедренной артерии в течение 30 секунд. Чтобы сохранить патент на катетер, влить 100 единиц на мл гепарина в изотоническом солевом растворе в канюлю после каждого анализа крови.
Разрешить крысы восстановить в течение двух минут, а затем измерить LDF и кровяное давление каждые 30 секунд в течение двух минут. После измерения артериального давления и LDF, повторяйте вывод объема крови каждые две минуты, пока животное не достигнет среднего артериального давления около 20 мм/г. В этих репрезентативных экспериментов, средний лазерный мозговой кровоток 10 Sprague-Dawley крыс кормили стандартной лаборатории чау поддерживается в пределах 20% от доморрагивания значение после первых трех снятия объема крови, пока среднее артериальное давление достигло нижнего предела ауторегуляции.
Последующие снятия объема крови при давлении ниже нижнего предела ауторегуляции, вызвало постепенное сокращение лазерного мозгового кровотока, демонстрируя, что мозговое кровообращение уже не в состоянии производить достаточный уровень вазодилатации для поддержания мозгового кровотока постоянной при более низком давлении изобилия. При давлении на уровне или выше нижнего предела ауторегляции не было существенной корреляции между лазерным мозговым кровотоком и артериальным давлением, что указывает на то, что лазерный мозговой кровоток не зависит от артериального давления в диапазоне плато автоматической кривой. Ниже нижнего предела ауторегуляции, лазерный мозговой кровоток артериального давления отношения имели отрицательный наклон.
А лазерный мозговой кровоток значительно коррелировал с артериальным давлением. Наиболее важные вещи, чтобы помнить, чтобы разжижать череп очень тщательно и убедиться, что зонд LDF остается твердо закреплены над той же области ткани. Эта процедура может быть использована для проверки реактивности микроциркуляции различных агентов после ретроградного вливания через сонную артерию, или для оценки функциональной гиперемии и нервно-сосудистых совок в мозговой циркуляции.
Этот метод позволил изукоризвести влияние различных препаратов и анестезии на мозговое кровообращение и изменения в церебральной ауторегуляции в моделях заболеваний, таких как гипертония.
