В этом протоколе подробно фотобиореактор оборудования адаптации, необходимые для выращивания микровододонах с коррозионными газами и обсуждает безопасную работу и выборку фотобиореактора. Фотобиореакторы обеспечивают необходимый контроль для надежных и воспроизводимых микробальных экспериментов. Эта система скамейки масштаба может быть использована для изучения характеристик и производительности микроводочий культивируется с смоделированными выбросами сгорания.
Этот метод может быть использован с другими тщательно адаптированными биореакторами или для выращивания других фотоавтотрофных микроорганизмов. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку он представляет собой сложный протокол, который предотвращает воздействие на человека токсичных смоделированных выбросов сгорания, используемых для выращивания микроводоемок. Для начала смоять возможную скопимую концентрацию токсичных газов в помещении, если капот дыма потерпит неудачу.
Используйте таблицу математического моделирования IH Mod Американской ассоциации промышленной гигиены для каждого газа. От строительства обслуживающего персонала HVAC или технического специалиста HVAC, получить q, поставку номера или скорость выхлопа воздуха в кубических метрах в минуту. Рассчитайте объем, V, лаборатории в кубических метрах.
Рассчитайте скорость выбросов загрязняющих веществ, G, каждого типа токсичного газа в миллиграммах в минуту, используя уравнение, адаптированное из идеального закона газа, где P является фракцией давления, оказываемого токсичным газом в одном банкомате, газ - это скорость потока газа в литрах в минуту, R является универсальной газовой константой, T - температурой в Кельвине , и MW является gas'molecular вес в граммах на моль. Используйте значения для V, q и G для каждого газа в хорошо смешанной модели комнаты с возможностью прекращения генерации и алгоритма очистки комнаты в электронной таблице IH Mod для расчета накопленных концентраций газа в помещениях для каждого газа в течение 24-часового периода моделирования. Сравните эти значения с ограничениями экспозиции.
Настройка системы мониторинга токсичных газов с датчиками для каждого из токсичных газов в использовании. Калибруйте датчики в соответствии с инструкциями производителя. Bump тест часто.
Найдите газовый монитор за пределами капота дыма. Перед началом эксперимента убедитесь, что весь персонал проинструктирован соответствующими ответными мерами на сигнал тревоги о токсичном газе. Теперь, подготовить 100 миллилитров каждый из одного нормального гидроксида натрия и один нормальный соляной кислоты в двух 250 миллилитров входного раствора бутылки.
Храните дозированные входные растворы в автоклавируемых бутылках с крышкой, оборудованных трубочками для погружения и вентиляционной трубкой со стерильным в линии воздушным фильтром. Подключите трубы погружения к двум из четырех входных портов фотобиореактора с помощью автоклавных труб. Вставьте и винт закрыть холодный палец и выхлопных конденсатор на фотобиореактор головной пластины.
Вставьте порт прививки и винт плотно на месте. Добавьте длину автоклавных труб в секцию прививоченного порта над головной пластиной фотобиореактора. Перед автоклавом биореактора зажим зажим закрыл трубку автоматическим зажимом для хозяина.
Прикрепите трубки, увенчанные стерильными фильтрами, к любым неиспользованным фотобиореакторным портам. Добавьте 1,5 литра культурной среды. Автоклав реактора и связанные с ним входные решения в течение 30-45 минут при 121 градусе по Цельсию.
Пройдите 1,6 миллиметра внутри диаметра автоклавных труб между входными растворами и их портами через отдельные перистальтические насосы. Прикрепите двигатель импеллера к шахте импеллера и затяните фитинг. Упорядочить светодиодные световые панели симметрично вне биореактора в соответствии с требованиями освещения.
Прикрепите соответствующие регуляторы, способные 20 PSI розетки давление на газовые баллоны. Прикрепите шесть миллиметров внутри диаметра устойчивых к давлению труб к регулятору розетки шланг колючка и обеспечить с шлангом зажима. Прикрепите другой конец устойчивых к давлению труб к газорегулирующему входу газа башни с помощью шланга колючка на шестимиллиметровый стебель быстро подключить установку обеспеченных шлангом зажима.
Подключите 3,2 миллиметра внутри диаметра труб к газорегулирующей розетке башни газа с помощью шести миллиметров быстро подключить установку и подключить другой конец розетки трубы к шпаже кольцо порта на фотобиореактор головной пластины. Установите давление розетки до 20 PSI на каждом газовом регуляторе. На интерфейсе биореактора установите экспериментальные темпы потока газа.
Используйте функцию STIRR, чтобы установить скорость вращения импеллера, которая достаточно быстра для среды культуры, чтобы усвоить спаренные пузырьки газа. После автоклавирования, собрать фотобиореактор и газовые баллоны в ходить в дым капот. Поместите фотобиореактор на стол внутри вторичного контейнера и поместите газовые баллоны в автономные цилиндры или цилиндрический шкаф.
После инициирования потока газа, используйте стиральную бутылку, наполненную 1:100 разбавления мыла блюдо в воду, чтобы покрыть связи между газовыми баллонами и биореактор с небольшим потоком мыльного раствора. Проверьте наличие утечек газа, указанных восходящей. При инициировании микроводопала экспериментов, начать размежевания газа, а затем настроить рН до прививки.
Прививать фотобиореактор, аспирируя подготовленный микроводохозяйку в стерильный шприц, подгоняя шприц к трубе, прикрепленной к порту прививки, открывая зажим для инкуляции и угнетая шприц. Проверьте газовый монитор, давление газовых баллонов и фотобиореактор два раза в день на повышенный уровень токсичного газа или указание утечек. Ограничьте отверстие капота дыма до ширины, которая позволяет биореактору и регулятору газовых баллонов быть достигнуто.
При отборе проб поверните регуляторы газовых баллонов в закрытое положение, чтобы остановить поток газа в реактор. Закройте пояс капота дыма и позвольте пять минут для капота, чтобы эвакуировать коррозионные газы. Образец в дымовой капот либо путем открытия головной пластины порта и с помощью стерильных серологических пипетки или рисунок культуры в шприц через прививку или выборки порта.
В этом исследовании была установлена кривая калибровки зеленых микроводоходов Scenedesmus obliquus, собранных в экспоненциальной фазе с измерениями OD750 и сушеными концентрациями биомассы. Концентрации биомассы были рассчитаны на основе кривой калибровки, а затем смоделированы с логистической кривой, где L является максимальной концентрацией биомассы, k является относительной крутизной экспоненциальной фазы, x0 - временем средней точки кривой, а x - временем. Многообещающее предварительное испытание с смоделированным газом дымохода достигло максимальной производительности микроводолетов биомассы на уровне 690 миллиграммов на литр в день, что было больше, чем у 12%углекислого газа и ультра-нулевого воздуха на 510 миллиграммов на литр в день.
Правильная сборка системы является наиболее важной для процедуры выращивания микроводокалывания и для безопасности человека. Систему необходимо постоянно контролировать с помощью газовых датчиков. Трансферные линии должны быть плотно газ и дым капот должен быть использован надлежащим образом.
Под давлением цилиндры, содержащие токсичные газы являются опасными. Всегда убедитесь, что цилиндры защищены и используются только внутри капота дыма после создания системы мониторинга токсичного газа.
