Этот протокол использует несовершеннолетних американских омаров в качестве модели, чтобы продемонстрировать использование импульсной пневмографии для оценки физиологических показателей во время теплового стресса. Этот метод проходит небольшой колеблющийся электрический ток через два электрода имплантированных по обе стороны от сердца и измеряет изменение напряжения, как мышцы контрактов и расслабляется. Это напряжение может быть легко преобразовано в удары в минуту, чтобы построить пульс по всему температурный диапазон оценивается для определения тепловой производительности окон.
Этот метод является минимально инвазивным и позволяет в режиме реального времени сбора данных в поздней стадии организмов, в которых это может быть трудно непосредственно визуально наблюдать сердечной производительности. Этот метод также фокусируется на расчете температуры разрыва Arrhenius или ABT и использует это как нелетальную конечную точку для определения тепловых пределов. Оберните четкие податливые трубки вокруг себя, чтобы создать теплообмесяцев катушки, которая составляет примерно от восьми до 10 сантиметров в диаметре и имеет расширения, которые от 40 до 70 сантиметров в длину.
Закрету катушку с помощью электрической ленты. Прикрепите катушку обмена тепла к внешнему снабжению и верните фитинги циркулирующей водяной бани. Убедитесь, что соединение безопасно с помощью шланговых зажимов.
Заполните колодец циркулирующей водяной бани водой обратного осмоса и подключите шнур питания к розетке. Включите водяную баню и убедитесь, что нет утечек в ее связи с катушкой обмена тепла. Настройка преобразователя impedance путем подключения черного кабеля BNC к выходу переменного тока на блоке и подключения его к регистратору данных лаборатории питания с помощью порта первого канала.
Подключите термистор в стручок типа T затем подключите стручок типа T в порт канала два регистратора данных лаборатории питания. Подключите шнур питания регистратора данных лаборатории питания в источник питания и подключите регистратор данных к компьютеру ПК с помощью разъема USB-кабеля. Заполните акклимативную камеру на экспериментальной арене 7,5 литрами искусственной морской воды.
Поместите омаров на пластиковую сетку. Тщательно закрейте когти омаров и живот к пластиковой сетке, используя небольшие кабельные связи. Высушите карапас бумажным полотенцем и очистите его ватным тампоном, пропитанным 70%этанолом.
Тщательно ручная дрель два небольших отверстия почти через карапас по обе стороны перикардия. Закончите каждое отверстие, аккуратно вставив стерильную вскрытую иглу. Соскречьте небольшой бит изоляции проводов с помощью лезвия бритвы.
Тщательно согните кончик каждого провода с помощью типсов и вставьте по одному в каждое из недавно просверленных отверстий. Защитите каждый провод свинца с помощью небольшой капли суперклея и дайте ему высохнуть в течение пяти до 10 минут. Как только клей высохнет, прикрепите провод к преобразовательу и включите его.
Поместите омаров в акклимативную камеру и дайте ему акклиматизироваться к имплантированным электродам в течение 15-20 минут. Включите силовую лабораторию и откройте программное обеспечение лабораторной диаграммы на компьютере. Нажмите Новый эксперимент и оставьте экран просмотра диаграммы открытым.
В представлении диаграммы найдите меню функции канала для Первого канала. Выберите усилитель ввода из меню и выберите соединение переменного тока. На преобразователь impedance, отрегулируйте увеличение и баланс до тех пор пока сильный сигнал не наблюдаться на выходе лаборатории силы, aiming для того чтобы держать баланс около zero.
На канале два выберите T-тип стручка для записи данных о температуре в режиме реального времени. Нажмите кнопку «Пуск», и силовая лаборатория начнет регистрацию данных. Поместите пластиковую сетку с прикрепленным омаром тщательно на экспериментальную арену и установите катушки обмена тепла на верхней части сетки.
Поместите термистор рядом с омаром, прежде чем поместить крышку на экспериментальной арене, чтобы уменьшить визуальную нагрузку на тест-объект. При необходимости отрегулируйте баланс и поместите комментарий к результату, в котором говорится, что судебное разбирательство началось. Выход должен периодически сохраняются на протяжении всего эксперимента.
Нажмите Файл и выберите Сохранить Как первоначально сохранить выход на компьютер. Увеличьте температуру воды экспериментальной арены со скоростью около 1,5 градуса по Цельсию каждые 15 минут, чтобы достичь рампы от 12 до 30 градусов по Цельсию в течение двух часов и 30 минут, регулируя температуру циркулирующей водяной ванны. Когда пандус будет завершен, удалить омаров из экспериментальной арене и поместить его в ванну восстановления в течение примерно 20 минут.
Через 20 минут нажать кнопку остановки на выходе лаборатории питания и сохранить файл. Аккуратно снимите электроды и перережьте кабельные связи, прежде чем вернуть испытательный предмет в его удерживаемый бак. Откройте площадку данных, нажав на меню окна и выбрав площадку данных.
Установите столбец А, чтобы быть временем, дважды нажав на столбец А и нажав на выбор и active Point, выберите время и закройте окно, нажав OK. Установите столбец B, чтобы быть средней температурой над выбранной частью данных, дважды нажав на столбец B и выбрав Статистику. Выберите среднее с правой стороны меню и канал два в качестве источника расчета в нижней части окна меню. Дважды нажмите на столбец C и выберите выбор и активную точку.
Выберите продолжительность выбора, нажмите OK, чтобы закрыть окно. Дважды нажмите на столбец D и выберите циклические измерения. Выберите количество событий, выберите первый канал в качестве источника расчета, нажмите OK, чтобы закрыть окно.
Это позволит подсчитать пики данных для определения сердечного ритма по выбранной части данных. Дважды нажмите на столбец E и выберите циклические измерения. Выберите среднюю циклическую скорость и канал один в качестве источника расчета в нижней части окна меню.
Нажмите OK, чтобы закрыть окно, и это обеспечивает окончательную оценку сердечного ритма, как удары в минуту в течение выбранной части данных. Вернитесь к файлу данных и выделите нужные разделы вывода. Выберите команды и несколько добавьте к колодке данных.
Выберите время и тяните данные каждые 30 секунд, проверяя каждую коробку и вводя 30 под меню Select. Нажмите текущий выбор и нажмите Add. Вернуться к экрану колодки данных и выбрать файл и сохранить Как сохранить выход в качестве файла Excel.
Откройте файл данных в Excel. Преобразование температуры от градусов по Цельсию к обратной стороне Кельвина. Возьмите естественный журнал сердечного ритма, создать участок Аррениуса, замышляя сердечный ритм в качестве функции температуры.
Приготовь эти данные к регрессии по частям и определите точку пересечения. Это температура тормоза Arrhenius или ABT. Это пример ожидаемого вывода с использованием регистратора данных лаборатории питания.
Напряжение показано красным цветом, а температура арены синим цветом. Эти данные показывают ожидаемое распределение сердечного ритма в течение температурного пандуса. Наконец, эта панель показывает ожидаемый участок Аррениуса от экспериментального животного.
Fit с по частям регрессии, красная звезда подчеркивает их пересечения, который Arrhenius перерыв температуры. При использовании этого метода, важно, чтобы ваш испытуемый надлежащего аккламации и восстановления периоды времени, чтобы убедиться, что вы точно записи сердечной производительности. Важно также определить соответствующую скорость потепления для вашего эксперимента до запуска этого на испытуемый.
Хотя мы сосредоточены исключительно на температуре в этом видео, этот метод может быть широко применен для понимания воздействия на окружающую среду на физиологию организма путем предварительного подвергая испытуемых дополнительных стрессоров, таких как подкисление океана, или снижение доступности кислорода до запуска их через температуру рампы.
