Оптическая когерентная томография широко используется в клинической диагностике различных заболеваний сетчатки, но ее все еще сложно применять на мышиных моделях. Этот протокол описывает, как управлять методом OCT у животных. Эта технология может быть применена к животным с разными размерами глазного яблока.
Он обеспечивает неинвазивную визуализацию поперечного сечения сетчатки с высоким разрешением и в режиме реального времени, а также количественные измерения толщины сетчатки. OCT помогает в диагностике ретинопатии, выявляя особенности поражения, такие как расположение, диапазон, форма и размер поражений, а также все предполагаемые аномалии сетчатки, такие как неоваскуляризация сетчатки. Этот протокол применим к исследованиям на животных или заболеваниям глазного дна, включая и заболевания сетчатки.
Перед началом процедуры будьте готовы и следуйте протоколу шаг за шагом. Проводят эксперимент, когда животное подвергается анестезии. После некоторой практики следует иметь возможность получить изображения OCT хорошего качества.
Для начала включите компьютер и запустите программное обеспечение. Нажмите кнопку тестовой программы, чтобы завершить тестовую программу. Затем включите термостат и разогрейте его до 37 градусов по Цельсию.
После тестирования программы запустите процедуру модуля центр развертывания Office. Создайте новую тему и заполните информацию о мыши. Затем разогрейте электрическое одеяло и накройте его хирургическими полотенцами.
Поместите обезболенную мышь на электрическую платформу одеяла и сразу же покройте оба глаза медицинским гелем гиалуроната натрия. Затем поместите контактную линзу 100D на роговицу мыши с вогнутой стороной, касающейся геля гиалуроната натрия на поверхности роговицы. Затем поместите мышь на маленькую платформу для животных с постоянной температурой устройства cSLO.
Отрегулируйте угол наклона контактной линзы щипцами, чтобы удержать зрачок в центре линзы. Тонкая настройка головы, чтобы сделать лицо глаза прямым впереди. Нажмите кнопку центра развертывания Office, выберите модуль мыши и запустите программу cSLO.
Затем используйте рычаг управления, чтобы медленно переместить предустановленную линзу к контактной линзе. Внесите дополнительные коррективы, чтобы выровнять изображение передне-заднего полюса, центрируя его у головки зрительного нерва. Затем запустите программу центра развертывания Office и щелкните индикатор выполнения вверх и вниз, пока не появится изображение центра развертывания Office.
Отрегулируйте минимальный диапазон от 0 до 20 и максимальный диапазон от 40 до 60. Затем отрегулируйте заданное расстояние объектива и направление позиционирования до тех пор, пока не будет получено идеальное изображение OCT. Выберите положение сканирования, переместив стандартную строку в cSLO.
Затем щелкните среднее значение, чтобы наложить сигнал изображения cSLO и OCT, и нажмите кнопку снимка, чтобы получить изображение центра развертывания Office SLO. После эксперимента снимите контактную линзу 100D и нанесите левофлоксациновый гель для глаз для защиты роговицы. Для коррекции стратификации сетчатки щелкните Проверка нагрузки на интерфейсе центра развертывания Office и вызовите изображения центра развертывания Office из всплывающего окна.
Затем дважды щелкните изображение в контейнере мультимедиа, чтобы отобразить его на экране. Затем нажмите на обнаружение слоя, чтобы завершить автоматическое наслоение на сетчатке. После выбора разделительной линии с обеих сторон слоя, подготовленного для анализа, нажмите кнопку Редактировать слой, чтобы настроить интервал и ограничить диапазон.
Затем измените линию, переместив красный круг. Чтобы измерить толщину ламинирования сетчатки, нажмите кнопку маркера измерения и выберите разделительную линию анализируемого слоя, чтобы отобразить границу слоя на изображении ЦЕНТРА РАЗВЕРТЫВАНИЯ Office. Затем выберите соединиться со слоем и оставайтесь на связи в движении.
Затем выберите область для отображения результатов и щелкните позицию для анализа на изображении центра развертывания Office, чтобы появилась линия измерения. Нажмите на следующий столбец для последующих измерений и отображения предыдущих данных. Чтобы измерить полную толщину сетчатки, выберите первую и седьмую линии в списке в правом верхнем углу.
Затем, от появления структуры сетчатки на краю зрительного сосочки, измеряют четыре значения с интервалом 200 микрометров на горизонтальной линейке. Изображения OCT мышей C57BL/6 показали различные слои сетчатки с четким разграничением. Напротив, нокаутирующие мыши Vldlr показали аномальные гиперрефлексивные поражения.
Изображения OCT показали некоторые средние отражающие полосы на поверхностях сетчатки нокаутирующих мышей Vldlr. Эти полосы прилипали к сосуду сетчатки, что соответствовало ОКТ характеристикам неполной отслойки стекловидного тела. Одно гиперрефлексивное поражение появилось на субретинальном пространстве и распространилось на внешний ядерный слой, но не прорвалось сквозь наружный плексиформный слой.
Появление ОКТ этого поражения соответствовало патологическим находкам. Патологический участок показал, что неоваскуляризация пробила слой пигментного эпителия сетчатки, фоторецепторные внутренне-наружные сегменты и внешнюю ограничивающую мембрану, вторгаясь во внешний ядерный слой, но не во внешний плексиформный слой. Другая полоса гиперрефлексивного поражения, расположенная в субретинальном пространстве, не включала внешний ядерный слой.
В соответствии с патологическими находками, эта субретинальная неоваскуляризация не прорывалась через внешнюю ограничивающую мембрану. Сравнение толщины сетчатки правого глаза в височном, носовом, верхнем и нижнем направлениях заднего полярного между двумя группами показало, что толщина сетчатки у нокаутированных мышей Vldlr была значительно ниже, чем у мышей C57BL/6J. При выполнении протокола правильно поместите контактную линзу 100D на роговицу, затем отрегулируйте положение изображения.
Выберите место сканирования и наложите изображение перед съемкой. После этой процедуры возможен передний сегмент OCT, требующий изменения расстояния между предустановленным хрусталиком и роговицей. Он может показывать роговицу, переднюю камеру, радужную оболочку, цилиарное тело и хрусталик.
Этот метод обеспечивает важный инструмент для исследований ретинопатии на моделях мелких животных, способствуя неинвазивному выявлению и измерению ретинопатии в фундаментальных исследованиях.
