Isolering, fixering och immunofluorescens avbildning av mus binjurarna

Immunofluorescens är en väl etablerad teknik för detektion av antigen i vävnader med anställning av fluorokrom-konjugerade antikroppar och har ett brett spektrum av applikationer. Påvisande av antigen tillåter för karakterisering och identifiering av flera celltyper. Ovanför njurarna och inkapslade av ett lager av mesenkymala celler, är binjuren ett endokrina organ som består av två olika vävnader med olika embryologiska ursprung, mesonephric intermediate mesoderm-derived yttre cortex och den neurala Crest-derived inre medulla. Binjurebarken utsöndrar steroider (dvs mineralkortikoider, glukokortikoider, könshormoner), medan binjuremärgen producerar katekolaminer (dvs, adrenalin, noradrenalin). Samtidigt bedriva adrenal forskning, är det viktigt att kunna skilja mellan unika celler med olika funktioner. Här tillhandahåller vi ett protokoll som utvecklats i vårt laboratorium som beskriver en serie sekventiella steg krävs för att få immunofluorescens färgning att karakterisera celltyper i binjuren. Vi fokuserar först på dissektion av mus binjurarna, mikroskopiska borttagande av periadrenal fett följt av fixering, bearbetning och paraffin inbäddning av vävnad. Sedan beskriver vi snittning av vävnad blocken med en roterande mikrotom. Slutligen, detalj vi ett protokoll för Immunofluorescerande färgning av binjurarna som vi har utvecklat för att minimera både icke-specifik antikropp bindande och autofluorescens för att uppnå en optimal signal.