טכניקות ביופסיה בלוטת חלב שור

Summary

מאמר זה מציג ביופסיה בלוטת חלב שור באמצעות כלים ביופסיה הליבה ואת המחט. רקמות שנקטפו יכול לשמש עבור תרבית תאים או להעריך פיזיולוגיה החלב וחילוף החומרים כולל ביטוי גנים, ביטוי חלבונים, חלבונים שינויים, אימונוהיסטוכימיה מטבוליט ריכוזים.

Abstract

עטין פרה ביופסיות לאפשר לחוקרים לאסוף דגימות רקמה ללמוד ביולוגיה של התא כולל ביטוי גנים, ניתוח היסטולוגית, איתות המסלולים, ותרגום חלבונים. מאמר זה מתאר שתי טכניקות לביופסיה של בלוטת חלב פרה (מ ג). שלוש פרות חלב בריא של הולשטיין היו הנושאים. לפני ביופסיות, פרות היו לחלוב, לאחר מכן מאופקים מצנח הבקר. מקבל (flunixin meglumine, 1.1 ל 2.2 mg/kg של משקל גוף) היה מנוהל באמצעות תוך ורידי צוואר [IV] הזרקת 15-20 דקות מראש כדי ביופסיה. עבור לעמוד הרגעה, חריגות השירותים הווטרינריים הידרוכלוריד (0.01-0.05 mg/kg של משקל גוף) הוזרק באמצעות כלי coccygeal 5-10 דקות לפני ההליך. ברגע שלמאחה מטושטשת, הביופסיה היה מוכן גילוח ורחיצה כירורגית, מרדימים באופן מקומי עם 6 מ של לידוקאין 2% הידרוכלוריד באמצעות הזרקה תת עורית. באמצעות הטכניקה aseptic, חתך אנכי של 2-3 ס מ בוצע באמצעות איזמל מספר 10. הליבה וכלים ביופסיה מחט שימשו. הכלי ביופסיה ליבה היה מצורף תרגיל אלחוטיים, מוכנס לתוך הרקמה מ"ג דרך החתך באמצעות פעולת תרגיל clock-wise. הכלי ביופסיה מחט הוכנס באופן ידני הוילונות. מיד לאחר הניתוח, עוזרת הפעילה לחץ באזור הניתוח למשך 20 עד 25 דקות באמצעות מגבת נקיה להשיג את hemostasis. תפרי ניתוח פלדת אל-חלד שימשו להתנגד החתך בעור. במקום היו 10 ימים הוסר post-procedure. היתרונות העיקריים של ביופסיות מחט והליבה הוא שתי הגישות הן הליכים זעיר פולשניים שיכולים להתבצע בבטחה ב פרות בריאות. תפוקת החלב בעקבות הביופסיה לא הושפע. הליכים אלה דורשים זמן החלמה קצרה, התוצאה פחות סיכונים של סיבוכים. מגבלות מסוימות עשויות לכלול דימום אחרי הביופסיה הזיהום על הביופסיה. יישומים של טכניקות אלה כוללים אוסף רקמה עבור אבחון קליני, למטרות מחקר, כגון התרבות התא הראשי.

Introduction

ביופסיה היא הליך לקצור מקטע הליבה של רקמה מתוך מקצועות רפואיים או למטרות מחקר. . זו טכניקת פולשנית והשימוש בהם נפוץ כדי לאסוף את רקמת כחלופה המתת חסד¹ כדי לאפשר ניתוח של תגובות רקמות טיפול או גורמים אחרים של עניין. דגימות של רקמות בלוטת חלב פרה (מ ג) הם חיוניים עבור חלב מחקר ביטוי גנים וחלבונים, היסטולוגיה, ארגון organelles הסלולר איתות המסלולים, תהליכים מטבוליים בתגובה לשינויים בניהול או סביבה. בנוסף, MG רקמות יש צורך לאבחן מחלות זיהומיות מסוימות, כגון שור mastitis הנגרמת על ידי זיהומים חיידקיים²ומחקר.

עטין של בקר מכיל ארבע בלוטות נפרדים, כל בלוטת מכיל מערכת הפרשה חלב עצמאית שנקראו parenchyma. Alveoli, צינורות אוורור, רקמת חיבור נמצאים parenchyma החלב. Alveoli מיקרוסקופיים מבנים כדוריים חלולים המורכבות לתאי האפיתל על גבי המשטח הפנימי (luminal), myoepithelial מיוחדים תאים על משטח חיצוני (הבסיס). Alveoli אחראים סינתזה הפרשת חלב. רקמת חיבור סיבית נוכח parenchyma יכול להפריד בין קבוצת alveoli מקבוצות אחרות של alveoli, כל קבוצה נקרא lobule³. מספר גורמים יכולים להשפיע את ההתפתחות והתפקוד של הרוסים כולל פיזיולוגיה של בעלי חיים, תזונה, ניהול, גנטיקה, סביבה⁴. Mastitis גם הוא גורם קריטי המשפיעה לרעה MG פונקציה וחלב איכות⁵. רעלים שפורסמו על ידי פתוגנים mastitic יכול לגרום לנזק alveoli, זירוז נמק וכתוצאה מכך שינויים ביוכימיים, היסטולוגית ב רקמות מ ג⁶. לפיכך, היסטולוגיה של תהליכי חילוף החומרים של כל alveoli או lobule במ ג עשויה להיות שונה באופן משמעותי מאחרים. ככזה, ביופסיות כי הם מדגמים מייצגים של בלוטת החלב כולו הם רצויים. ביופסיות קטן עשוי ללכוד רק lobule יחיד או בודדים המכתש, הגבלת המידע שיתקבל מדעית או אבחון. למטרות מחקר, זה הכרחי להיות מודע לכך ביופסיה החלב מספק 'תמונה' של מאפייני הרקמה אבל ביופסיה שלמאחה לא יכולה לאפיין את סה כ פונקציה החלב בהיעדרו של הערכות של בלוטת חלב הכולל המוני.

מספר כלים ביופסיה פותחו במהלך 30 השנים האחרונות לשימוש בבני אדם. כיום, עיבודים של מכשירים אלה זמינים לשימוש עם בעלי חיים. עבור בקר לחלב, דגימות של רקמות MG הושגו באמצעות טכניקות שונות כולל כריתה כירורגית (עמום)⁷, ביופסיה-מחטים-^1,-⁸ו- core ביופסיה מכשירים^9,10. לפיכך, MG טכניקות ביופסיה של פרות חולבות מניקות יש מעבר מיגדרי משגרות באמצעות הרדמה שכיבה עם ניתוח כירורגי באמצעות electrocautery hemostasis ב 1992⁷ לאוסף של הליבה ביופסיות תחת עמידה הרגעה^{9, 10,11,12}. ביופסיה כירורגית היא שיטה פולשנית, אשר יכול להיות יקר יש שכיחות גבוהה יותר של סיבוכים כמו שטף דם, פצע בעיות, הגידול התפשט¹³. כיום, הליבה ביופסיה, ביופסיית-מחט (המכונה גם ביופסיה טרו-קאט) נרחב שאומצו חלופות ביופסיה כירורגית כמו. היתרונות של ביופסיות מחט והליבה בהשוואה ביופסיה כירורגית כוללים: ההליך היא פולשנית; לסיבוכים נדירים; הרדמה כללית לא נדרש; הנוהל הוא relativley מהירה; זמן ההחלמה הוא קצר; יש מינימלית תופעות שליליות על בריאות עטין, וכן השפעות לטווח קצר בלבד על חלב תשואה ו הלחנה^8,9,10; העלות היא ביופסיה כירורגית פחות מ¹³.

הליך הביופסיה ליבה אחד, תיאר בשנת 1996 להשתמש בצינורית פלדת אל-חלד סטרילית, עם להב לשליפה נשלף כדי להסיר כמות נציג של רקמות מן הרוסים שור ללא הרדמה כללית^{9,10,11 ,12}. במהלך ההליך, המכשיר היה מחובר תרגיל אלחוטיים ליצירת על מהירות נמוכה, תנועה סיבובית אשר נקיה ליבה של רקמות כמו הכלי היה מתקדם לתוך הרקמה. היתרון היה גדול יותר רקמה לטעום (70 מ מ x 4 מ מ בקוטר כ- 0.75-1 g) ⁹. מחקר האחרונות¹⁰ הראה כי ההליך ביופסיה מתוארת על ידי פאר נ ג.et al. ⁹ יכול לשמש לביצוע חוזרות אוספים רקמות מ ג ללא השפעה שלילית על בריאות עטין וביצועים של פרות חולבות מניקות. לאחרונה, בוצע מחקר¹⁴ ב פרות חולבות כדי להעריך ביופסיות חוזרות ונשנות של הרוסים באמצעות נקז גדול יותר (31 ס מ קוטר ארוך, החיצוני של 9.5 מ מ, קוטר פנימי של 8 מ"מ) עם ואקום שהוחל בצינורית נירוסטה פנימי כדי לאסוף את הביופסיה . בשיטה זו משתמשים הרגעה (חריגות השירותים הווטרינריים) בהרדמה מקומית (2% לידוקאין הידרוכלוריד).

מחט הביופסיה היא טכניקה אחרת כדי לאסוף את רקמת החלב. מספר מחקרים אימצו שיטה זו. מחקר אחד¹ השתמשו הרגעה (detomidine), הרדמה מקומית (1% לידוקאין) במסגרת ההליך. לאחר הביופסיה, הפרות קיבל טיפול אנטיביוטי מניעתי. בלוטת החלב היה לעסות באופן ידני לפני ואחרי החליבה. הדם בתוך החלב נצפתה עבור עד 84 שעות לאחר הביופסיה. כמות והרכב החלב הושפעו לתקופה קצרה של זמן. לאחרונה, מחקר משמש מחט הביופסיה לביצוע ביופסיות חוזרות MG ב-⁸פרות חלב. הרגעה (1% איזופרומאזין, תוך שרירית), בהרדמה מקומית (הידרוכלוריד לידוקאין 2%, תת עורית) נוהלו החיות. החיות שלא קיבלו תרופות intramammary או אנטיביוטיקה לפני או אחרי הניתוח, לא נמצאו סימנים של זיהום באתר ביופסיה במהלך התקופה לאחר ניתוח. במחקר זה, ביופסיות חוזרות MG שור באמצעות מחט הייתה השפעה שלילית קטין על ייצור חלב ובריאות עטין של פרות חולבות. באופן כללי, ביופסיית-מחט נראה שיטה פחות פולשנית מאשר מכשיר ביופסיה הליבה. עם זאת, כאמור, זה חיוני הטכניקה ביופסיה לקצור במדגם מייצג של הרקמה MG. המגבלה של ביופסיה מחט היא כי כמות קטנה של רקמת MG שור מתקבל (בערך 20-25 מ"ג)^8,15.

כמעט כל המחקרים להשתמש בשילוב של α-2 אגוניסט הרגעה עם הרדמה מקומית^8,9,10, אם הביופסיה הייתה באמצעות מחט או גרעין גדול יותר. במ ג שור, רוב עצביים הקשורים עם העור. העצבוב לרקמת parenchymal היא במידה רבה באמצעות מתיחה רצפטורים מסוג דלילה סיבי עצב לזהות כאב כירורגית חדה. כתוצאה מכך, המנגנונים הפיזיולוגיים של כאב עקב ניתוח מניפולציה של הרוסים היא דרך העור, רקמות תת עוריות³ ורקמות עמוק לא כגון רקמות parenchymal. עבור ביופסיות, לכן רק צורך מקומי עזים ומתנגד העור ורקמות תת עורית, כמו חדירה של הרדמה מקומית לתוך רקמות עמוק לא להפחית באופן משמעותי את הכאב כירורגי. לאחר הכנת המתאים לאזור ביופסיה, אי נוחות בעלי חיים הוא, בעיקר, הקשורים עם איפוק.

אוסף של דוגמאות גדול עשוי להגביר היווצרות המטומה ולהגביר את הסיכון לזיהומים בתוך MG parenchyma. לכן, פרי-סוכן פרוטוקולים לעיתים קרובות כוללים ניהול של אנטיביוטיקה parenteral⁷, למרות שזה לא תפיסתה⁸. להשיג את hemostasis הוא גם גורם חשוב להפחתת התחלואה פרה. במחקר הנ ל באמצעות של ליבה גדולה ביופסיה כלי¹⁴, לחץ ידני היה מוחל על הביופסיה, חזייה פרה שימשה כדי להחיל קרח על הפצעים כבר לפחות שעתיים בעקבות ההליך. למרות כמות גדולה של רקמות שנקטפו, הפחתות התשואה צריכת וחלב הזנה קלה בלבד נצפו ולאחר ההליך חזר על עצמו כל שלושה שבועות ללא השפעות שליליות על הבריאות פרה.

חוקרים ביצוע ביופסיה MG שחלתיות בפרות חלב צריך לשקול את איכות האבחון או אנליטיים הביופסיה וכתוצאה מכך, קלות טכניקה, ותחלואה פרה. טכניקות ניתוחיות מדויק ומתוכנן מראש הם הכרחי כדי להשיג מטרות אלה. עד היום, MG ביופסיה מחקרים התמקדו המתאר את תוצאות הביופסיה, בניגוד המתארת את הטכניקה ביופסיה עצמה, ו תיאורים עבור פרות חולבות מניקות חוסר בפרטים מספיק על מנת לאפשר שכפול. לכן, המטרה של עבודה זו היתה לתאר ביופסיית-מחט והטכניקות גדול הליבה ביופסיה בפירוט מספיק כדי לאפשר שכפול הומאני ובטוח של MG ביופסיה של הבקר.

Protocol

כל השיטות המתוארות אושרו על ידי וירג'יניה טק אכפת חיה מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC).

1. סגל

1. יש לפחות שני עוזרים עם ניסיון כירורגי וטיפול פרה.
2. הרכבת כל המסייעים לפחות שלוש פעמים, אם זה אפשרי באמצעות חומר cadaveric, לפני ביצוע הליכים הקשורים עם פרוטוקול זה בבעלי חיים.
   הערה: הכשרה צריך להתנהל ע"י מדריך כי כבר בעבר אימן וביצע את הטכניקה.
3. יש וטרינר חיות גדולות על-יד עבור ניהול סמים, במקרה זה טיפול חירום הופך להיות הכרחי במהלך ההליך. מצבי חירום שעלולות להתרחש במהלך הליך זה כוללים אך אינם מוגבלים: דימום, α-2 אגוניסט יתר, בצקת ריאות, regurgitation, שאיפה של חומר המזון, כאב, התנגדות המטופל לדרוש הרדמה נוספת.

2. הכנה של מכשירי ניתוח, ציוד, מתקן

1. מלאי ולרכוש כל ציוד וחומרי תכשיטנות (ראה טבלה של חומרים).
2. נקי, וילונות כירורגי אוטוקלב ביופסיה מכשירים, מחזיקי אזמל, מגבות כירורגי, מלקחיים.
3. יש לסחוט בגודל תקין המצנח שער כדי לרסן את הפרות.
4. ליצור מרחב עבודה עם שולחן ליד תעלת לסחוט.
5. ודא כי אזור העבודה נקי הגביל פרה דרך תנועה.
6. לארגן ציוד ואספקה במרחב העבודה של לגישה נוחה.
7. יש תאורה מתאימה בתוך מרחב העבודה.

3. הכנה של חיות

1. יום אחד לפני הביופסיה מתוזמנת, לשטוף ולקרצף החיה, במיוחד עטין להסרת זבל והחומרים המלוכלכים.
2. בצע את ההליכים עבור איפוק הומאני ובטוח של הבקר.
3. לפני הביופסיה, שוב בזמן הביופסיה, להעריך את בריאות, מצב גופני וההתנהגות של החיה.
   הערה: בדיקה מינימלית כוללת טמפרטורה, הדופק, ואת המחירים הנשימה, כמו גם בחינת דרמטיטיס באתר כירורגית המוצע או באזורים אחרים של זיהום חיידקי. לאסוף דגימות חלב בכל רבעון ולבדוק mastitis.
4. השתמש רק פרות בריאות.
5. לגמרי לחלוב את הפרה.
6. להעביר את החיה המצנח לסחוט, ממוקם באופן אידיאלי במרחק 2 h החליבה כדי למזער את נוכחות החלב בבלוטות.
7. לרסן את החיה עם שער הראש.

4. שיכוך כאבים וטשטוש

1. במקום מחבל התלייה חבל על ראשו של הפרה כדי למנוע אחורה וקדימה התנועה.
2. להוציא את הראש של החיה לצד אחד, אקשור את החבל המצנח לסחוט באמצעות קשר שחרור מהיר כדי להחזיק את הראש במקום.
3. לנקות את האזור של הזרקת עם מקלון אלכוהול איזופרופיל 70%, לנהל flunixin meglumine (1.1 ל 2.2 mg/kg של משקל גוף) דרך הווריד באמצעות עורק הצוואר 15-20 דקות מראש את הביופסיה.
   הערה: בפרוטוקולים מסוימים, תכשירים מנוהלים לאחר הביופסיה אם תרופות אנטי דלקתיות לא תשפיע על תוצאות המחקר.
   1. אתר ומוחלף.
   2. להעלות ומוחלף על ידי הפעלת לחץ בבסיס של החריץ צוואר.
   3. בדוק כדי לוודא שאין אין בועות במזרק.
   4. להכניס את המחט, ומוחלף מוגבה על צייר 0.5 מ של דם לתוך המזרק פעמיים ומערבבים עם התוכן. אם אין דם מראה במזרק, להעביר את המחט. אם המחט הוא תושב בווריד, להזריק את התוכן.
   5. הסר בעדינות את המחט.
   6. חלות גזה עם לחץ עדין על ההזרקה כדי למנוע דימום.
4. ניהול חריגות השירותים הווטרינריים הידרוכלוריד לווריד (0.01 עד 0.05 mg/kg של משקל גוף) בתוך הכלי coccygeal כ 5-10 דקות לפני ביופסיה כדי לאפשר מספיק זמן עבור הקמת הרגעה.
   התראה: בדוק את החיה סימנים של בצקת ריאות. סימנים קליניים של בצקת ריאות כוללים מצוקה נשימתית, קוצר נשימה חמורות, קשיי נשימה, שיעול, ברוק הלאגר ו כחול הלשון. אם הם נצפו סימנים של בצקת ריאות, מומלץ להשתמש tolazine (2-4 mg/kg של משקל גוף) את ההשפעה חריגות השירותים הווטרינריים.
   1. הרימי את רגליה ולנקות את האזור של הזרקת עם מקלון אלכוהול איזופרופיל 70%.
   2. בדוק כדי לוודא שאין אין בועות במזרק.
   3. את המחט לתוך כלי הזנב, לצייר 0.2 מ"ל של דם לתוך המזרק ומערבבים עם התוכן על מנת להבטיח שהמחט הוא תושב בתוך הכלי. אם המחט הוא תושב בתוך הכלי, להזריק את תוכן המזרק.
   4. הסר בעדינות את המחט.
   5. חלות גזה עם לחץ עדין על ההזרקה.

5. הכנת הביופסיה

1. יש עוזרת לקשור את הזנב עבור ההליך.
2. בחר את אתר ביופסיה על עטין (בדרך כלל באזור העליון כדי למזער את אוסף של רקמת חיבור וכדי למנוע חדירה לתוך בלוטת בור המים, איור 1), ולהסיר כל חומר המלוכלכת או זבל מאתר שנבחרו ביופסיה.

איור 1 . התמונה של עטין פרה הממחישות את הביופסיה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת. 

3. לצפות, ימשש העור עם תשומת לב מיוחדת כדי לזהות כל כלי דם תת עורי גדול על מנת להימנע אלו כלי במהלך הביופסיה.
4. קליפ על השיער מאזור 15 ס"מ על 15 ס"מ סביב האתר ביופסיה.
5. הכינו את האזור ביופסיה עם povidone-יוד (0.75% יוד זמין) או chlorhexidine gluconate סקראב. לסירוגין עם אלכוהול איזופרופיל 70% לפחות שלוש פעמים כדי להסיר את כל פסולת גלויים ובלתי נראה. החל את הפתרון סקראב aseptic איזופרופנול בתנועה סיבובית בגישה הפוכה. ודא כי הפתרון סקראב חיטוי נותר במגע עם העור למשך 5 דקות לפחות.
6. השתמש עם אינפוזיה פרפר סט עם מחט 18 גרם כדי להפקיד 6 מ של 2% לידוקאין הידרוכלוריד subcutaneously מקום החתך כדי ליצור קו-בלוק. לא לחדור לרקמות עמוקות יותר.
   הערה: המינון של לידוקאין משתנה בין 3 עד 8 מ.
7. לאפשר הרדמה מקומית על להתפשט עבור 3 עד 5 דקות לבצע חזרה נוספת על פתרון סקראב ואלכוהול לפני החתך. תוך כדי המתנה, להכין את כלי הנגינה ביופסיה.

6. נוהל ביופסיה

1. להשתמש טכניקות aseptic בעת טיפול בכלי ביופסיה ועבור את החתך.
2. לשטוף את הידיים כדי להסיר את כל זיהום גלוי ולהחיל כפפות כירורגי סטרילי.
3. לארגן את מכשירי ניתוח באזור סטרילי לפי סדר השימוש. יש אזמל מספר 10, גזה סטרילית, מכשיר ביופסיה התאספו, מגבת סטרילי hemostasis.
   הערה: בצע נוהל 1 לביצוע ביופסיה ליבה או פרוצדורה 2 לבצע ביופסיה מחט.

איור 2 . ייצוג סכמטי של הרכבה וההתקנה של הכלי ביופסיה הליבה מתוארת על ידי נ ג פאר, et al. ⁹ בר בקנה מידה הוא 1 ס מ. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

4. מכשיר ביופסיה הליבה (פאר ואח⁹)
   1. להרכיב את המכשיר ביופסיה הליבה תוך שימוש בכפפות סטריליות (איור 2).
      1. מניחים את חתיכות סטרילי 7 על תלוי סטרילי (איור 2 א).
      2. הכנס את הלהב (חלק 1) לתוך מערכת עגינה על היצירה 2 (איור 2B ).
         התראה: אין למקם את האצבעות ישירות בקו להב.
      3. להוסיף קטע 3 על גבי פיסת 2 (איור 2C) להבטיח כי תחנת העגינה תיישר.
         הערה: שימו לב מערכת עגינה בקיר הפנימי של היצירה 4 (איור דו-ממדי).
      4. לעסוק הקצה הסופי של הלהב (חלק 1) לתוך מערכת עגינה של פיסת 4 (איור דו-ממדי).
      5. לדחוף קדימה חתיכת 4 ולבחון אם היצירה 4 נמצא ליד חלק 3 (2E איור).
      6. להוסיף חתיכת 5 על המכשיר (להב + קטע 2) (איור 2F).
      7. להבטיח כי מיושרים בתחנת העגינה (איור 2G).
      8. להכניס חתיכה 6 פסגת היצירה 2 (בצד הנגדי של הלהב) (איור 2 H)
      9. להבטיח כי מיושרים בתחנת העגינה (איור 2 H).
      10. הכנס את בורג הנעילה (חלק 7) בתחנת העגינה (איור 2I).
      11. לדחוף קדימה חתיכת 3 (שחור) כדי לכסות את בורג הנעילה.
          התראה: אין למקם את האצבעות על יציאת להב.
      12. להפעיל את הכלי דוחף קדימה חתיכת 4 ולבחון את הלהב מחוץ הכלי.
      13. . תחזיר את היצירה 4 כדי לבטל את הלהב לתוך הכלי (מוכן לשימוש)
          הערה: הלהב להיות מופעלים רק כאשר הכלי שחדר את המרחק הרצוי בתוך הרקמה להיות ביופסיה.
   2. ודא הפרה מספיק מורדמת הביופסיה. מספיק הוא מורדם. צובטים את העור כדי להבטיח שום תגובה.
   3. עושים חתך אנכי 2-3 ס מ דרך העור ורקמות תת עורית של proximal כדי דיסטלי באמצעות איזמל מספר 10.
   4. לצרף את המכשיר ביופסיה תרגיל אלחוטיים בטכניקה סטרילי.
   5. למקם את המקדחה נגד הכלי ביופסיה ולבדוק אם הכלי מחובר היטב ל התרגיל.
   6. להבטיח ריסון הולם על-ידי הפרט לרומם את הזנב במהלך כל ההליך.
   7. הפעל את התרגיל באמצעות סיבוב עם כיוון השעון, מהירות נמוכה.
      הערה: הנוהל אינו סטרילי, המפעיל לא נותר סטרילי בעת שימוש את התרגיל.
   8. לקדם את הכלי ביופסיה כולו (כ- 7.5 ס"מ) לתוך עטין דרך החתך בזמן התרגיל לסובב את האגרה.
   9. לבטל את הנוהל ולהרחיב באופן ידני את היצירה 4 של הכלי.
   10. הפעל את התרגיל באמצעות סיבוב עם כיוון השעון, מהירות נמוכה.
   11. הסר את כלי המכיל רקמות הליבה של עטין.
   12. הפעילו לחץ חזק מיד על הפצע באמצעות מגבת נקיה של 20 דקות לפחות.
       הערה: יש עוזרת לבצע פעולה זו באמצעות האגרוף שלהם כדי להבטיח לחץ נאותה.
   13. להסיר את הרקמה ביופסיה כלי באמצעות פינצטה.
   14. לשמור את הדגימה מלוחים פוספט x 1 buffered ולהעריך את כמות הרקמה.
   15. לקחת סימנים חיוניים של הפרה כל 10 דקות לאחר הביופסיה במשך לפחות 30 דקות.
   16. בדוק אם יש דימום לאחר 20 דקות של הלחץ על הביופסיה. אם ישנן טיפות של דם להמשיך להפעיל לחץ למשך דקות נוספות 5-10.
   17. סגור את החתכים באמצעות מהדקים פלדת אל-חלד במרווחים של 5 מ מ אחרי כל הדימום הפסיק. השתמש בין 5 ו 8 סטייפלס.
   18. חלות על תחבושת תרסיס האזור ביופסיה.
   19. להתבונן החיה למשך 50 דקות לאחר ההליך.
5. מכשיר ביופסיה מחט
   1. בצע הוראות היצרן של ההתקן.
   2. הסר את מחט הביופסיה החבילה באמצעות טכניקות סטרילי.
   3. למחוק את המחט, אם נזק נצפית.
   4. לצרף את המחט למכשיר.
   5. סגור את המכסה, דורך את המכשיר.
   6. ודא הפרה מספיק מורדמת הביופסיה. מספיק הוא מורדם. צובטים את העור כדי להבטיח שום תגובה.
   7. עושים חתך אנכי 1 עד 2 ס מ דרך העור ורקמות תת עורית של proximal כדי דיסטלי באמצעות איזמל מספר 10.
      הערה: חתך המכשיר מחט הביופסיה ניתן קטנים (1-2 ס מ) מזה עבור כלי ביופסיה הליבה.
   8. הכנס את מחט הביופסיה לתוך מקום החתך (בסביבות 10 עד 13 ס מ עור).
   9. הפעל את ההתקן מחט ביופסיה כדי לאסוף את הרקמה.
   10. הסר את המחט עטין.
   11. הפעילו לחץ מיידית, חזקה על הפצע באמצעות מגבת נקיה של 20 דקות לפחות.
   12. הסר את רקמת מחט ביופסיה באמצעות פינצטה.
   13. לשמור את הדגימה מלוחים פוספט x 1 buffered ולהעריך את כמות הרקמה.
   14. לקחת סימנים חיוניים בכל 10 דקות לאחר הביופסיה במשך לפחות 30 דקות.
   15. בדוק אם יש דימום לאחר 20 דקות של הלחץ על הביופסיה.
   16. סגור את החתכים באמצעות מהדקים פלדת אל-חלד אחרי כל הדימום הפסיק.
   17. חלות על תחבושת תרסיס האזור ביופסיה.
   18. להתבונן החיה למשך 50 דקות לאחר ההליך.

7. ביופסיה שלאחר טיפול בבעלי חיים

1. לתעד את כל התרופות מנוהל על בעלי חיים.
   הערה: חלב אבדו במהלך תקופה של 36 שעות לאחר ההליך; בשר הנסיגה היה 4 תקופות גמילה ד עבור בשר בחלב עשויים להשתנות בהתאם למדינה או שיפוט, תרופות המשמשות. בדוק את החוקים המקומיים.
2. לבדוק הנוכחות של דם פנימה את החלב במשך 7-10 d לאחר הביופסיה.
3. יד קרישי דם רצועת מהעיר ביופסיה ב בחליבת הארס הבאים ולהבטיח את החלב המלא להסרת מתרחשת.
   הערה: נוכחות של קרישי דם מן העיר ביופסיה עבור 1-3 בחליבת הארס בעקבות ההליך צפוי. דם בכוס החלב עלולים להיות שנצפו עבור 1 עד 6 d לאחר הביופסיה.
4. להתבונן חלב תשואות, במידת האפשר, היומון בודדים להאכיל צריכת עד תפרי ניתוח הוסרו.
5. לפקח על החיה פעמיים ביום, טמפרטורת הגוף, הנשימה, הלב, ובאישיות עד תפרי ניתוח הוסרו.
6. בדיקת הביופסיה פעמיים ביום על נפיחות, רגישות, סימנים של ניקוז עד תפרי ניתוח הוסרו. אם אלה הם נצפו, להתייעץ עם וטרינר.
   הערה: לשמור את הביופסיה נקי והחלה את התחבושת תרסיס כל אחד עד שלושה ימים לפי הצורך.
7. הסר במקום החתך ד' 10-14 לאחר הביופסיה, בהתאם קצב הריפוי.
8. להתייעץ עם וטרינר אם הם נצפו סימנים של זיהום מקומי או סיסטמי.

תוצאות

בפרוטוקול הנוכחי, הטכניקה ביופסיה הליבה הפיק דגימת הרקמות של 200 עד 600 מ"ג בעוד ביופסיית-מחט הפיק דגימות של 10-30 מ"ג לכל ביופסיה. החיות נצפו פעמיים ביום למשך 10 d לאחר ההליך. אין סיבוכים אירעה במהלך ההליך או בתקופה שלאחר הניתוח, עם פרמטרים חיוניים של הפרות נותרת בגבולות הנורמה (קצב הנשימה ממוצע = ± 31.4 הגנה 7.04 (SD) נשימות לכל מין, קצב הלב ממוצע = 75.9 פעימות ± 8.9 דקות, וממוצע טמפרטורה רקטלית = ± 38.2 0.68 ° C, איור 3).

בעקבות לחץ ידני על האזור ביופסיה להשיג את hemostasis (כ- 25 דקות), הפצע פתוח הראה דימום מינימלי (איור 4). הפרות קיבלו את הדיאטה באותו ad libitum, החיות הוחזקו במתקן דיור אותו במהלך התקופה שלאחר הניתוח. החיות לא הראה סימנים של זיהום באתר ביופסיה; היה ללא כאב, דימום, נפיחות, ניקוז או טמפרטורות גבוהות (איור 5). הפצע החלים בתוך 8 עד 10 ד' של הביופסיה (איור 5C).

חיה אחת פיתחה גירוי בעור קטין עקב פצע שפשוף על יום 8 לאחר ההליך. את הפרה טופל על-ידי ניקוי הביופסיה באמצעות פתרון povidone יוד ואלכוהול איזופרופיל 70%. סיכות פלדה אל חלד הוסרו כדי לאפשר ניקוז, povidone יוד משחה (1%) היה מוחל פעמיים ביום דרך האתר ביופסיה d 2-3. גירוי העור נעלמה 2 d לאחר החלת משחה povidone יוד, הפצע נרפא עם אין סיבוכים נוספים.

קרישי דם הוסרו בידי חסינותו של חלב מהעיר ביופסיה לפני מכונת חליבה. בפרוטוקול הנוכחי, הנוכחות של קרישי דם בתוך החלב נצפתה עבור עד שלושה בחליבת הארס (בערך 36 שעות) לאחר הביופסיה. זיהום בדם של חלב נצפתה עבור עד 48 שעות לאחר הביופסיה. היו אין ההבדלים החזותיים שנצפה בין ביופסיות מחט והליבה יחסית כמות הדם בתוך החלב. החיות לא הראה על ירידה משמעותית בתנובת חלב לאחר ההליך (איור 6). הרכב החלב הממוצע היה 4.37% שומן,  3.34% חלבון ו 4.64% לקטוז. ספירת תאים סומטיים של חלב ממוצע (SCC) היה פחות מ-200,000 תאים לכל mL.

הרקמה MG שהושג יכול לשמש למטרות מחקריות שונות כגון תרביות תאים הראשי (איור 7).

איור 3 . הערכה של אינדיקטורים בעלי חיים בריאות לאחר ביופסיה בלוטת חלב פרה- אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת. 

איור 4 . ביופסיה מראה האתר לאחר לחץ ידני היה מוחל על האזור ביופסיה להשיג את hemostasis. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 5 . ביופסיה באתר הצילומים. ביופסיה (א) אתר בתלת-ממד לאחר ההליך. ביופסיה (B) באתר 6 d לאחר ההליך. ביופסיה (C) האתר 10 d לאחר ההליך הממחישות הפצע נרפא במידה מספקת. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 6 . ייצור החלב היומית לפני ואחרי ביופסיה בלוטת חלב פרה (n = 3 פרות). מודל לינארי העריך כי 10 ימים לפני הביופסיה החיות המיוצר 23.35 ק ג של חלב ביום. התשואה חלב לא השתנה באופן משמעותי (P > 0.05) מ- 10 ימים לפני כעשרה ימים לאחר הביופסיה למרות עלייה קלה של חלב התשואה נצפתה (עלייה של 0.0005 kg/d של חלב עבור כל יום מ- 10 ימים לפני הביופסיה). שלוש חיות שהיו בשימוש פרוטוקול זה; חיה אחת היה ביופסיה פעמיים (חיה 1: ליבה ביופסיה בצד שמאל של עטין, מחט ביופסיה בצד ימין של עטין) והיו שתי חיות ביופסיה פעם (חיה 2 ו- 3: רק על הצד הימני של עטין באמצעות ההליך ליבה או מחט). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 7 . להחליפן בתמונות של תרבות ראשי שור בתאי אפיתל החלב. סולם בר הוא 100 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Discussion

הליבה ושיטות ביופסיה מחט תוארו ב^9,זה פרוטוקול¹⁶. הערכה מפורטת של בעלי חיים בריאות, השכיחות של mastitis¹⁴ לפני הביופסיה נדרשת עבור שני הליכים. למטרות מחקר, ביצוע הטכניקה בבעלי חיים עם סימנים ברורים של דלקת או מחלות זיהומיות להימנע. פעולה זו תקטין את הסיכון לסיבוכים במהלך ולאחר ביופסיה. כל ביופסיה והתקניהם צריך להיות נקי מחוטא, מעוקר כדי למנוע זיהום של הביופסיה. לפני ההליך, זה הכרחי למזער את האתר כירורגית זיהומים (. SSI). באופן כללי, SSI מזוהה עם תחלואה בעלי חיים אבודים ודרכי עלויות ייצור גבוהות יותר לפרות חלב. מחקרים דיווח בעבר שיטות למניעת SSI עקב הביופסיה כולל חיתוך השיער סביב באזור הניתוח, שטיפת האזור ביופסיה כדי להסיר זיהום^9,14, באמצעות סוכנים חיטוי (70% אלכוהול, יוד כירורגי לשפשף⁹, 2% chlorhexidine אצטט פתרון¹⁴, 10% povidone יוד⁸) להכנת העור. במחקרים מסוימים, הניהול של אנטיביוטיקה אומצה במהלך⁷ או מיד לאחר ביופסיה⁹; עם זאת, טיפול אנטיביוטי מונע לא שימש בשנת העבודה הנוכחית, אין זיהומים של הביופסיה נצפו. כדי למנוע זיהום של הביופסיה פצע, הזנב צריך להיות מאובטח כדי למנוע מגע עם הביופסיה עד התחבושת תרסיס הוחל. ב פרוטוקול זה, סיכות יוסרו כ 10 עד 14 d לאחר הביופסיה.

לפני ביופסיה הליבה, חשוב כמו שצריך להגדיר את הכלי ולחבר אותו הנוהל; בחר מהירות סיבוב איטי, בחר את סיבוב קדימה ולאחר אל תשתמש מצב הפוך של התרגיל. במהלך ההליך, חשוב להשתמש לחץ דיגיטלי משני צידי החתך כדי להפריד את הקצוות העור ויש חתך ארוך מספיק כדי לאפשר כניסה כלי ללא קשר עם העור או רקמת חיבור. אם הליך זה לא נעשה, שאכטה בקצוות החתך במהלך הסיבוב של המכשיר ביופסיה הליבה עלול להתרחש ולגרום טראומת רקמות עור נוספות אשר יגביר את הסיכון של זיהום, עלולה לעכב את ריפוי הפצע. ביופסיה נוכח בהליכים המתוארים תחת פרוטוקול זה בוצעו על ידי מנתח מוסמך בעלי חיים גדולים. ההליכים בוצעו בהצלחה (איור 5). בשתי הטכניקות הן יחסית קל ומהיר לביצוע לעומת הליך כריתה כירורגית.

דימום מאזור הביופסיה נפוצים לאחר ביופסיה MG פרות חולבות^8,9,10,14. בפרוטוקול הנוכחי, הדימום ציין היה מינימלי (איור 4), אשר ייתכן עקב יישום של נאותה (חזקה) לחץ על הפצע מיד לאחר הניתוח. לחץ חזק על פחות 20 דקות נדרש, זה ייתכן שתידרש עבור יותר מ 30 דקות במקרים מסוימים. אם בינוני עד דימום חמור הוא ציין לאחר יישום של הלחץ על הביופסיה, מומלץ להמשיך בלחץ, פנו מיד וטרינר.

כמו hemostasis הוא גורם חשוב להפחתת התחלואה פרה, מחקר אחד ארוז רפידות hemostatic לתוך האתר ביופסיה כדי לשלוט הדימום⁹. אולם, השימוש רפידות hemostatic באופן כזה יש פוטנציאל סיכון גבוה עבור מיקרוביולוגית מזהמים בסביבה רפת. מחקר אחר¹⁴ חלה לחץ ידני על הביופסיה בין ביופסיות חוזרות ונשנות, לאחר סגירת ביופסיה של העור, והיא חלים קרח על האתר כבר לפחות שעתיים לאחר הביופסיה. בפרוטוקול הנוכחי, לחץ חזק מוחל על הביופסיה למשך 20 עד 25 דקות היה הולם לשליטה בדימום.

טכניקה מוצלחת ביופסיה צריך לגרום מינימום בדם החלב אשר נמשכת לתקופה קצרה של זמן לאחר ההליך. כדי למנוע הפרעה של הפרשת חלב במהלך זיהומים אכזבה ודלקת חלב, יש להסיר קרישי דם intramammary ביד בנוכחות אחר מתוך^10,רבע ביופסיה¹⁴. בפרוטוקול הנוכחי, נצפתה הדם פנימה את החלב עד 48 שעות לאחר הביופסיה. עם זאת, במחקר בשימוש מספר גדול יותר של בעלי חיים, דם בכוס החלב נצפתה ברוב המכריע של פרות פחות מ- 6 ימים. בעלי חיים מעטים הראו דם החלב לאחר 6 ימים⁸. מסיבה זו, התבוננות יומי של חלב המראה הוא הכרחי עבור 6 d לאחר ההליך. חיות לא לא להפגין סימני דלקת mastitis כאשר דגימת רקמה גדול הושג¹⁴. עם זאת, מחקרים קודמים אשר ביצעו ביופסיות חוזרות על אותה חיה באמצעות מחט נמצא שכי שכיחות הזיהום mastitis היה בכ-12% בעקבות הליך⁸. בפרוטוקול הנוכחי, גם בעלי חיים היו סימנים חזותיים של mastitis קליניים זיהום לאחר הניתוח. יש גם בעיה קטנה סיכוי כי מקום החתך יכול להידבק לאחר הביופסיה.

Tolazoline הידרוכלוריד, סם מבטל את ההשפעות של הרגעה, צריכה להיות זמינה במקרה של מנת יתר של חריגות השירותים הווטרינריים. מנה מופרזת של חריגות השירותים הווטרינריים עלול לגרום לבצקת ריאות. סימנים קליניים של בצקת ריאות כוללים מצוקה נשימתית חמורה קוצר נשימה, קשיי נשימה, שיעול, sputum הלאגר. אם הם נצפו סימנים של בצקת ריאות, מומלץ להשתמש tolazine (2-4 mg/kg של משקל גוף) את ההשפעה חריגות השירותים הווטרינריים.

בפרוטוקול הנוכחי מתאר את הטכניקה לבצע ביופסיית-מחט והן הליבה ביופסיה. באופן כללי, היתרון של ביופסיה הליבה לעומת ביופסיית-מחט הוא גדול יותר רקמת מדגם (0.75-1 גרם)⁹ עם מינימום השפעה שלילית על בריאות עטין. מחט הביופסיה היא שיטה פחות פולשנית מאשר מכשיר ביופסיה הליבה. עם זאת, ביופסיה מרובים מנסה להשיג כמות גדולה של רקמות באמצעות שהליך ביופסיה מחט עלולה להגביר את הסיכון של דימום העיקריים לאחר ההליך, וכן קרישי דם בתוך החלב. בשתי הטכניקות גרם תחלואה מינימלית פרה, הושגו בקלות עם הכשרה מינימלית של צוות כירורגי. שינוי לטווח קצר חלב מדי יום התשואה (8-10% ירידה), קומפוזיציה⁹ והאטרקציות הפחתת צריכת הזנות¹⁴ צפוי לאחר הליבה ואת המחט ביופסיות, בהתאמה. מגבלות של ההליך ביופסיה מחט הן נפח קטן של הרקמה המוסרת עם המחט. המכשיר צריך להיות מופעל רק כאשר המחט בתוך רקמת להיות ביופסיה ניסיונות מרובים לעיתים קרובות נחוצים לקבל כמות מספקת של רקמות, אשר מגביר את הסיכון של דם חלב, mastitis לאחר ההליך. מגבלות של הביופסיה הליבה כוללים סיכון גבוה יותר של דימום לאחר ההליך אם כמות גדולה של רקמות (> 200 מ ג) מתקבל. בנוסף, הכלי הביופסיה קשה יותר לאסוף. הדורש הכשרה נאותה לפני השימוש.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
70% Isopropyl alcohol	Walmart	565106257	1 L
Aerosol spray to kill and repel flies	MWI	14339	1 bottle (if necessary)
Biopsy needles, 12 G × 16 cm	C. R. Bard	MN1216	2
Butterfly infusion set (18 G needle)	Fisher	22-258087	1
Cell culture dishes	Fisher	08-772E	4
Cordless drill (low speed)	Hitachi	DS10DFL	1
Core biopsy instrument, Farr et al. (1996)			2, custom metal fabrication. To request the tool contact the authors.
Cows			cattle healthy
Flunixin meglumine	MWI/VetOne	501018	1.1 to 2.2 mg/kg of body weight
Folding table	Amazon		1
Forceps	Fisher	09-753-50	1
Gloves non-sterile	Fisher	17-200-845	9, size dependent
Hard brush	Sullivan Supply	18270	1, to wash the cows
Head gate			1, customized for dairy cows
Lidocaine hydrochloride 2% injectable	MWI/VetOne	510212	6 mL was used,  from 3 to 8 mL
Livestock body wash	eZall Technologies	39384	1, to wash the cows
Needle 18 G  (1 to 1/5“)	Fisher	14-821-15A	6
Needle 20 G (1 to 1/5“)	Fisher	14-815-526	6
Phosphate buffered saline (0.9%)	Fisher	20-012-043	1 L
Povidone Iodine ointment	Jeffers	#VED1A	500 g (if necessary)
Povidone iodine scrub solution (0.75% iodine)	MWI/VetOne	510094	1 L
Reusable biopsy instrument	C. R. Bard	MG1522	1
Rope halter	Nasco farm and ranch	C10852	2, cow size
Scalpel blades (#10)	MWI	033870	2
Scalpel holders (#3)	MWI	602008	1
Self seal autoclave pouch 10 x 5.5 in.	Fisher	19-130-0038	1 case of 800
Sterile cotton gauze sponges	Fisher	22-037-986	4
Sterile gauze pads	Fisher	19-090-735	4
Sterile surgical gloves	Surgical gloves	19-166-679	3,  size dependent
Sterile surgical towels	Fisher	50-118-0339	6
Stethoscope	Littmann Master Classic II	1392	1
Surgical clipper	Oster A5	078005-010-003	1, preparation of the animal for biopsy
Surgical clipper blades (#40 )	Oster	78919-016	1, preparation of the animal for biopsy
Surgical staple remover	MWI	541	1
Surgical stapler pre-loaded	MWI	17713	5
Syringes of 10 mL	Fisher	14-823-224	3
Syringes of 2 mL	Fisher	22-028854	3
Syringes of 20 mL	Fisher	22-034507	3
Syringes of 5 mL	Fisher	22-028855	3
Thermometer	Agri-Pro Enterprises Inc	72000	1
Tolazine hydrochloride	Akorn Animal Health	61311-486-10	2 to 4 mg/kg of body weight (if necessary)
Tweezer	Fisher	14-955-025	1, for handle the tissue sample
Water hose	Miracle-Gro, Walmart	554990501	1, to wash the cows
Water-resistant aerosol bandage (aluminum powder 40 mg)	MWI	010728	1 bottle
Xylazine hydrochloride	MWI/VetOne	510650	0.01 to 0.05 mg/kg of body weight