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Il est rapporté ici un protocole pour la quantification des particules virales infectieuses en utilisant la surveillance en temps réel de l’impédance électrique des cellules infectées. Une application pratique de cette méthode est présentée en quantifiant la désintégration du virus de la grippe A sous différents paramètres physicochimiques imitant les conditions environnementales.
Les méthodes de quantification des particules virales représentent un aspect essentiel de nombreuses études virologiques. Bien qu’il existe plusieurs techniques fiables, elles prennent beaucoup de temps ou sont incapables de détecter de petites variations. Présenté ici est un protocole pour la quantification précise du titre viral en analysant les variations d’impédance électrique des cellules infectées en temps réel. L’impédance cellulaire est mesurée à l’aide de biocapteurs à microélectrodes d’or situés sous les cellules dans des microplaques, dont l’ampleur dépend du nombre de cellules ainsi que de leur taille et de leur forme. Ce protocole permet une analyse en temps réel de la prolifération, de la viabilité, de la morphologie et de la migration cellulaires avec une sensibilité accrue. Un exemple d’application pratique est également fourni en quantifiant la désintégration du virus de la grippe A (VAI) soumise à divers paramètres physicochimiques affectant l’infectiosité virale au fil du temps (c.-à-d. température, salinité et pH). Pour de telles applications, le protocole réduit la charge de travail nécessaire tout en générant des données de quantification précises des particules virales infectieuses. Il permet de comparer les pentes d’inactivation entre différents IAV, ce qui reflète leur capacité à persister dans un environnement donné. Ce protocole est facile à réaliser, est hautement reproductible et peut être appliqué à tout virus produisant des effets cytopathiques en culture cellulaire.
La transmission d’un virus repose sur la combinaison de plusieurs facteurs. Pour un virus sécrété dans l’environnement, sa transmission dépend également de sa capacité à persister dans des conditions extérieures à l’hôte. L’étude de l’inactivation virale en général est donc une étape cruciale pour aider les autorités sanitaires nationales et les décideurs politiques à mettre en œuvre des mesures de contrôle et de biosécurité.
Les connaissances sur la persistance du virus dans les milieux naturels et de laboratoire ont considérablement augmenté au cours de la dernière décennie. Dans le cas des virus de la grippe A (IAV), leurs voies de trans....
Manipuler tous les virus de la grippe selon les exigences appropriées en matière de niveau de biosécurité (BSL-2 ou plus selon le sous-type). Utilisez des souches IAV avec un faible historique de passage (moins de 5x sur les cellules MDCK) pour assurer une faible variation entre les expériences.
1. Préparation des réactifs et des matières premières
Les données brutes obtenues après 120 h avec différentes concentrations de cellules MDCK, de 15 000 à 120 000 cellules par puits, sont présentées à la figure 1. Après 24 h, les mesures de l’IC montrent que les cellules dans les puits ensemencés avec 30 000 cellules étaient encore dans la phase exponentielle de croissance, et cette concentration cellulaire a été utilisée pour d’autres expériences. La figure 2 illustre la corrélation linéaire e.......
RtCA est une technologie basée sur l’impédance qui est de plus en plus utilisée pour la surveillance en temps réel des propriétés cellulaires, telles que l’adhérence cellulaire, la prolifération, la migration et la cytotoxicité. Dans cette étude, la capacité de cette technologie à évaluer la survie de la VAI à l’extérieur de l’hôte est démontrée en mesurant la pente d’inactivation du virus. Les techniques fastidieuses telles que TCID50 et les tests de plaque sont remplacées par une.......
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.25%Trypsin | ThermoFisher | 25200056 | |
75 cm2 tissue culture flask | Falcon | 430641U | |
E-Plate 16 (6 plates) | ACEA Biosciences, Inc | 5469830001 | E-plates are avalible in different packaging |
FCS | Life technologies (gibco) | 10270-106 | |
MEM 1X | Life technologies (gibco) | 31095029 | |
PBS 1X | Life technologies (gibco) | 14040091 | |
Penicillin-Streptomycin | Life technologies (gibco) | 11548876 | |
TPCK-Trypsin | Worthington | LS003740 | |
xCELLigence Real-Time Cell Analysis Instrument S16 | ACEA Biosciences, Inc | 380601310 | The xCELLigence RTCA S16 instruments are available in different formats (16-well, 96-well, single or multi-plate) |
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