Reproduzierbarkeit und Harmonisierung in der Forschung mit biologischen Standards: Das Beispiel des Thrombozytenagonisten-Kollagen-verwandten Peptids

Metrologie - die Wissenschaft des Messens - ist ein Thema, über das nur wenige Biowissenschaftler in ihrer Ausbildung unterrichtet werden, zu ihrem Nachteil; Die Anwendung einfacher Standardisierungsprozesse auf die tägliche Arbeitspraxis schafft Vertrauen in Daten und Reproduzierbarkeit über Distanz und Zeit.

Diese Methode zeigt, wie ein Kernlaborexperiment standardisiert werden kann, das in der Hämostaseforschung und in der klinischen Praxis weit verbreitet ist, insbesondere die Messung der Reaktionen auf das Thrombozyten-Kollagenrezeptor (Glykoprotein [GP]VI)-Agonisten-Kollagen-verwandte Peptid, vernetzt (CRP-XL) durch Lichttransmissionsaggregometrie (LTA). Die Verwendung dieses Ansatzes gewährleistet die Reproduzierbarkeit innerhalb des Labors und die Harmonisierung zwischen den Laboren, unabhängig vom Agonistenbestand oder dem Lieferanten. Wichtig ist, dass diese Methode auf andere Thrombozytenagonisten und in der Tat auf viele andere biologische Moleküle und Bioassays anwendbar ist.

Der unten beschriebene Prozess beinhaltet die Erstellung einer 6-8-Punkt-Verdünnungsreihe des "Standards" und des "Tests" (das Material, das Sie überprüfen) und deren Gegenüberstellung in einem ausgewählten Assay (in diesem Fall LTA). CRP-XL wird bei Masse-/Volumenkonzentrationen verwendet, aber nicht jedes Material weist bei einer bestimmten Konzentration die gleiche biologische Aktivität auf, so dass eine Verdünnungsreihe erstellt wird, um das Standard- und Testmaterial zu vergleichen und zu bestimmen, welche Konzentration erforderlich ist, um eine gleichwertige Aktivität zu erzielen. Die Verdünnungsreihe muss eine Aggregation von 0 bis 100 % umfassen. Die Daten werden mit Hilfe der nichtlinearen Regression aufgetragen, und der EC_50-Wert jeder Probe (Standard und Test) wird bestimmt. Um die Aktivität zuzuordnen, dividieren Sie den EC_50-Wert des Standards durch den Wert des Tests, um zu bestimmen, wie viel mehr oder weniger wirksam er ist, und passen Sie die Konzentration entsprechend an. Dieser Ansatz stellt sicher, dass dem Assay immer wieder die gleiche biologische "Aktivität" hinzugefügt wird.