Gerilim duyarlı Boyalar kullanarak Gine domuzu Enterik Ağları Elektrik Faaliyet Optik Kayıt

Özet

Bu protokol, boyalar, ayarlanabilir bir çözünürlüğe sahip, sağlam sinir ağları gibi kobay enterik sinir sistemi plexuses gibi optik kayıt sağlayan elektriksel aktivitenin ne kadar voltaj duyarlı göstermektedir ki, tek hücrelerden çok ganglion devre arasında değişmektedir.

Özet

Enterik sinir sistemi (ENS) izolasyon karmaşık davranışları gerçekleştirme yeteneğine tespit fonksiyonları ile kendi kendine yeten bir ağdır. Onun nöron (çapı 10-25 mikron), bağırsak duvarı farklı düzlemler ile sınırlı plexuses düzenlenmiştir

Protokol

Bölüm 1: Doku hazırlanması

1. 150-200g (eski 2-3 hafta), izofluran inhalasyonu ve dekapite ile anestezi edilmiştir Hartley kobay ince bağırsak sıralı diseksiyonu submüköz ve myenterik pleksus preparatları izole edilmiştir. Ötenazi sonra, küçük bağırsak eksize ve içeriği, sıcak, oksijenli çözümü ile lümen ateş basması kaldırılır. Biz Orta 199 25 mM HEPES, 37 önceden ısıtılmış olmuştur (7,4, şu andan itibaren, M199-DM olarak anılacaktır) için ayarlanabilir 5 mM NaHCO ₃ ve 2 mM Glutamin ve pH, ° C ile desteklenmiş Ancak, protokolün tüm kalan adımları, oda sıcaklığında gerçekleştirilen olacaktır.
2. Bir intestinal segment uzunluğu 8-10 cm, mezenterik sınırı boyunca açılan M199-DM içeren bir Sylgard çanak transfer ve böcek pimleri kullanarak mukoza yan-bindi. Bu bağlantılarını sonra doku düzenli hizalanmış mukozal villuslar satırları ile dikdörtgen bir şekil sergiler, böylece hatta gerginlik korumak için son derece önemlidir.
3. Neredeyse yatay konumda düz ipuçları ince Dumont forseps kullanarak, kolay hazırlanması bir ucunda villuslar kapma ve doku uzunlamasına ekseni boyunca çekerek mukoza kabuğu. Örnek eşit tutturulmuş, mukoza şeritler submüköz ganglionlar ve submukozal damarsal içeren submukoza açığa bireysel birkaç vuruş ayrılmış olabilir.
4. Plexuses ince diseksiyon için, karanlık alan aydınlatma ile diseksiyon mikroskobu kullanmanızı öneririz. Aslında, bu tür aydınlatma tarafından oluşturulan sözde üç boyutlu etki, enstrüman zararınız böylece önlenmesi veya en aza indirmek, tek tek katmanların ayırt etmek için yardımcı olur.
5. Submukozal hazırlık yapmak için, biz gerektirir Hirst ve McKirdy ⁴ klasik prosedürü izleyin: a) dairesel kas liflerinin yönü takip submukozal katmanda bir kesim, bu (bir Moria gibi çok ince makas kullanarak elde edilebilir MC19 veya eşdeğeri); sirküler kas tabakası, ince makas kullanarak aşağı iterken b), çok ince pens ile hafifçe submukozaya kaldırırken; ayrılması, geri kalanını submukozaya kurtarmak için ilerledikçe c) uzunlamasına kenarlarında kesim Hazırlık; d) submukozal hazırlık son boyutu tanımlamak için ilk bir mesafe dairesel kas lifleri, yönünü takiben ikinci bir kesim yapmak. Sadece 30 - 50 mikron kalınlığında incecik bir görünüme sahiptir sonuçlanan submukozal segment, taze M199-DM, hafifçe tutturulmuş ve gerginlik olmadan içeren başka bir Sylgard çanak aktarılır ve daha sonra kullanmak üzere oksijenli odasında muhafaza edilebilir.
6. Orijinal bağırsak-segment, mukoza ve submukoza yoksun ve sirküler kas maruz kalan, hala bir myenterik pleksus hazırlık verim için kullanılabilir. Myenterik pleksus ortaya çıkarmak için, bir dairesel kas tabakası mümkün olduğu kadar ortadan kaldırmak gerekir. Bu, önceki adımlarda istihdam aynı düz ucu ince forseps kullanılarak elde edilebilir. Liflerini içeren demetler önce birini, sonra hazırlık diğer taraftan, nazikçe uzak çekilmiş olabilir. Maruz myenterik pleksus, kas ve altta yatan seroza longitudinal tabakasının ayrılamaz. Bu nedenle, ne myenterik pleksus hazırlık denir pimleri boyunca kesilebilir segment. Canlı kas içerdiğinden, bu fizyolojik bir deney başlayana kadar oksijenli M199-DM içeren çanak çok gevşek pin tavsiye edilir.
7. Mukoza ana ENS sensörü, ve tüm etkileyiciler da bağırsak duvarına gömülü olduğundan, tüm refleks yollar korumak sağlam yarı hazırlıkları incelemek mümkündür. Bu özel tasarlanmış hazırlıkları 1.3 'de açıklanan adımları kombinasyonları gerektirir. 1,6, izole barsak segmentinin bitişik olan alanlarda uygulanabilir.
8. Birkaç dakika önce gerçek optik deney, seçim hazırlık gerginlik eşit olarak dağıtılmış ve doku Sylgard dibine tamamen düz yatıyor emin yapma, deney odasında monte edilir. Bu doku hasarına maruz kalmadan tüm çevresine yerleştirilmiş olabilir birden çok ince iğneler ile örnek tutarak elde edilir.

Bölüm 2: optik kayıt için doku örneklerinin hazırlanması

1. (Isteğe bağlı) artık düz kas ve bağ dokusu için bağlayıcı boya arka floresan önlemek için, her iki izole plexuses kollajenaz VII (≤ 50 U / ml) ve proteaz IX (≤ 0.5 mg içeren M199-DM 30-60 dakika süreyle inkübe olabilir / ml). Bir enzim tedavisi sonrasında hazırlıkları ile yıkanmış olmalıdır, (streptomisin, penisilin, 100U/ml 100 mg / ml) M199-DM artı% 10 hayvan serumu (örneğin, at ya da sığır) ve antibiyotikler, gece boyunca devam kamara wi doymuşth% 95 O ₂ ve% 5 CO _2. Farkedilir optik kayıtları sinyal-gürültü oranı artırır çünkü uzun yıllardır kullanılan bu prosedür, yeni başlayanlar için yararlı olmayabilir ve dikkatli bir şekilde kabul edilmelidir. Gerçekten de, diseksiyon sırasında zarar gören bir hazırlık enzim tedavisi sırasında dağılmakta riskini taşır. Bununla birlikte, enzim tedavisi yokluğunda bile, biz hazırlıkları serum ve antibiyotik M199-DM gecede korunması gerektiğini öneriyoruz. Bu adım, akut diseksiyon hasarı sonrası doku iyileşmesi teşvik ve örnek saydamlığı artırır.
2. Elektriksel aktivite Optik kayıtları kas sözleşme olduğu bir hazırlık elde edilemez. Myenterik pleksus, birkaç dakika önce M199-DM banyo doku 2 mcM nifedipin optik deney kaydederken Bu nedenle, kas kasılması önlemek.

Bölüm 3: di-4-ANEPPDHQ ile Boyama

1. Di-4-ANEPPDHQ liyofilize formu ticari olarak kullanılabilir. Biz, saf etanol içinde eriterek konsantre bir stok solüsyonu [örneğin, 15-20 mg / ml]. Bu stok, -20 ° C'de muhafaza edildiğinde, son derece kararlı. Gerçekten de, laboratuar, biz sadece biz neredeyse 6 yıl önce yapmıştı bu boyanın bir stok solüsyonu son damlasına bitirdi.
2. M199-DM boyama çözüm hazırlanan ve protokol gerektiriyorsa 2 mcM nifedipin içermelidir. Boya final konsantrasyon 5 mg / ml gibi düşük olabilir ve 50 mcg / ml 'den yüksek olmamalıdır. Ancak, hisse senedi konsantrasyon bağlı olarak, belirli bir miktarda etanol boyama çözüm olacak ve dikkate alınmalıdır. Örneğin, 50 mg / ml ile boyama çözüm boya ~% 0.3 etanol içeren stok sadece 5 mg / ml 'lik bir konsantrasyon 15 mg / ml stok olsaydı, ancak% 1 etanol.
3. Boyama için, hazırlama, boya çözüm 10-30 dakika batık. Bu dönemden sonra, boya, taze yıkanıp ve değiştirilmesi. M199-DM oksijenli. Di-4-ANEPPDHQ sadece bir lipid ortamda fluoresces bir membran geçirgenliği olmayan boya olduğundan, lekeli bir enterik hazırlık sağlıklı nöronlar boş balon görünüme sahip olmalıdır.

Bölüm 4: Elektrik stimülasyon

1. Uyarım voltaj veya akım tarafından sürülebilir. Biz mevcut stimülasyon, kanal başına 16 mA maksimum çıkış, 4-kanal uyaran jeneratör kontrollü bir bilgisayar tarafından teslim kullanın.
2. Deneysel amacı, belirli bir deneyde kullanılmak üzere elektrot modeli belirlenir. Hedefi belirli bir nöronun uyarılması zaman intrasellüler pipetler veya yama elektrotlar kullanılabilir. Stimülasyon belirli bir ganglion birden fazla nöron aktif hale getirmek için tasarlanmıştır, bir bağ dokunmadan ekstraselüler elektrot kullanılıyor olabilir. Birbirine ganglionlar, büyük, düşük direnç elektrotlar ve / veya çoklu-element elektrod istihdam edilebilir çalışma için; Ancak, genel olarak mevcut stimülasyon kullanırken, çok eleman dizileri tek seçenek haline gelir. Ekstrasellüler elektrotlar, yanı sıra bazı lineer elektrot diziler, birçok model, ticari kaynaklardan temin edilebilir.
3. Elektrotlar farklı türleri mikromanipülatörler kullanarak yerleştirilmiş olabilir. Uzun ve ince varil kaynaklanan titreşim önlemek için, biz küçük mikromanipülatörler deney odasına bitişik yerleştirilmiş olabilir manyetik üsleri kullanarak ve ince fakat çok sert metal çubuklar tungsten elektrotlar esnek varil destekleyen lehine.

Bölüm 5: Perfüzyon

Biz oksijenli çözümler girişi için bir kanal, ve çıkışı için 2 kanal peristaltik pompa kullanırlar. Perfüzyon kaynaklanan mekanik bozuklukları ortadan kaldırmak için, optik veri alımı sırasında pompa açık-kapalı olduğunu.

Bölüm 6: membran potansiyeli birden fazla site optik kayıt için aparat

1. Optik bileşenleri:
   
   Membran potansiyeli birden fazla site optik kayıt için cihaz NeuroCCD-SM kamera (RedShirtImaging) ve dik bir mikroskop trinoküler tüp monte 1:10 demagnifier / röle lens oluşur. Mikroskop, bağımsız, aktif bir titreşim izolasyonu tablosunda üst katı sabit bir sahne XY tercümecisi hareket eder. Havadaki titreşimi en aza indirmek için, tüm cihaz ağır akustik perde ve bir folyo çatı çevrilidir. Epi-ultra-düşük-dalgalanma geribildirim stabilize güç kaynağı tarafından desteklenmektedir 100W tungsten halojen lamba ile aydınlatma sağlanmaktadır. Işık, ısı filtresi, yüksek-Q girişim filtresi (HQ530/50) ve 565 nm (50% iletim) dikroik ayna kullanarak yarı monokromatik yapılır. Floresans emisyon dikroik ayna ve uzun bir geçiş filtresi (HQ572LP) ile ayrılır. Kütüphane olduğu söylenebilirışık sity nötral yoğunluk filtreleri kullanarak ayarlanır. Trans-aydınlatma, hazırlık parlak alan görüntülemek için, 0-55 V, 1-10, özel niteliklere sahip olmak gerekli değildir bir güç kaynağı tarafından tahrik ikinci bir 100 W tungsten halojen lamba ile sağlanır.
   
   
2. Yüksek hızlı kamera özellikleri:
   
   NeuroCCD-SM kamera, elektronik tasarım ve performans özellikleri ^ayrıntılı 3 tarif edilmiştir . Kısaca, (80x80 piksel) Marconi CCD39-01 çip arka aydınlatmalı, arka inceltilmiş kullanan soğutmalı, düşük çözünürlük, hassas, yüksek hızlı bir kamera. Sayısallaştırma 14-bit ve full frame oranı 2 kHz. Bununla birlikte, belirli amaçlar için, bir, çeşitli binning kombinasyonları kullanarak veya fonksiyonel piksel sayısını azaltarak 10 kHz maksimum kare hızı kadar artırabilir. Kamera son derece düşük okuma sesi (1 kHz 9 elektronlar 2 kHz'de 23 elektron) önemli bir avantaja sahiptir. Buna ek olarak, kendi piksel, yüksek kare hızları orta derecede ışık şiddetlerinde izin, göreceli olarak büyük bir kuyu derinliği (215,000 elektron) var.
   
   
3. Veri Toplama ve Analiz Yazılımı:
   
   Optik deney Neuroplex, IDL platformu (Interactive Data Language) içinde bir uygulama olarak çalışır ve birden fazla, optik veri toplama, ekran ve analizi için gerekli özellikleri içerir RedShirtImaging, bir yazılım paketi tarafından kontrol edilir.
   
   
4. Ek kamera:
   
   Cihazın ayrılmaz bir parçası, bir çerçeve kapmak bağlı ikinci bir yüksek çözünürlüklü CCD kamera üzerine mikroskop röleleri hazırlanması bir görüntü trinoküler kafasına bir ışın ayırıcı. Global Lab Image / 2 yazılımı kullanılarak elde edilen ve depolanan görüntü, mekansal kökenli NeuroCCD-SM kamera tarafından yakalanan optik sinyalleri doğru bir harita oluşturmak için zamana bağımlı alt-milisaniye görüntü üzerine bindirilmiş optik gerilim sinyalleri kaydedildi. Bizim laboratuvarda, bu kamera için frame grabber fonksiyonel veri toplama sorumlu farklı bir bilgisayarda bulunan. Bu nedenle, görüntü dosyasını bir bilgisayardan diğerine aktarılacak, ve yüksek çözünürlüklü bir görüntü boyutu ve konumu küçük ayarlamalar önce iki kamera mükemmel bir kayıt elde gereklidir.

Bölüm 7: Optik deneyleri

1. Her fonksiyonel kayıt önce, biz (6.4 'de gösterildiği gibi) optik yoluyla elektriksel aktivite kayıt planladığınız bölgenin yüksek çözünürlüklü siyah beyaz bir görüntü kazanır. Yüksek hızlı kamera piksel haritası üzerine bindirilmiş Bu görüntü, optik sinyallerin kaynağı yapılarını belirlemeye yardımcı olur.
2. Uygun sistem konfigürasyonu, Neuroplex (6.3 'e bakınız) da deklanşöre kontrolleri, elektrik stimülasyonu tetikler. Yüksek hızlı veri toplama önemli bir bilgisayarın güç gerektirdiğinden, büyük miktarda ve yüksek kapasiteli sabit disk ile bellek adanmış bir bilgisayar kullanmak için, eğer mümkünse, tavsiye edilir. Ancak, önemsiz değildir. Kendi sistemi, örneğin, zaten birkaç yıldır eski, state-of-the-art bilgisayarlarda sığmayacak kadar büyük veri toplama kurulları kullanmaktadır. Bir uzlaşma olarak kabul edilen ve 500 GB sabit disk ve 4 GB RAM ile donatılmış bir Dell Precision 390 optik sistem adamıştır. Bu bilgisayar hala deneyler çalıştırmak için yeterli güç sağlarken, A / D ve D / A panoları, eski, ancak yeterli tutmak için izin verdi.
3. En kısa sürede satın alma olarak, Neuroplex çok tamamlayıcı formatları bunlardan bazıları aşağıda ayrıntılı sonuçları görüntüleyebilirsiniz:
   1. Ekranın bir alanda, sayfa ekran, ayrı bir çerçeve olarak 80X80 yüksek hızlı kamera tarafından yakalanan hazırlama ham görüntüyü gösterir. Ilgi alanları belirlemek için ikinci bir kamera (6.4 ve 7.1 'de açıklandığı gibi) ile elde edilen yüksek çözünürlüklü görüntü bu piksel haritası üzerine Süperpozisyon operatör yeteneği geliştirir.
   2. Bu sayfayı görüntülemek piksel fare kontrolü altında seçildiğinde, Neuroplex zamanın bir fonksiyonu olarak bu piksel kayıtlı optik değişimin büyüklüğünü gösteren izleri otomatik olarak optik çıkış dönüştürür. (Örneğin, mesafe kadar taşınmış / F vs zaman). Operatör bu izleri tek tek piksel çıktı, ya da daha doğrusu, hazırlık belirli bir bölge üzerinde birden fazla lokusların uzay-ortalamalı çıktı yansıtacak karar verebilirsiniz.
   3. Film formatında veriler de gösterilebilir.
      
      Ancak, bireysel deneysel çalıştırır yer alan tüm bilgiler tamamen ayıklanır sağlamak için optik veri off-line analiz lehine. Bu analiz Temsilcisi sonuçlar mevcuttur.

Bölüm 8: optik bir deneyde teknik kalitesi elde etmek için nasıl

The optik bir deney teknik başarı kayıtları sinyal-gürültü oranı, sonuçta ölçülür. Ayrıca, iyi bir sinyal-gürültü oranı, bir vahiy değil ama bir yolculuğa kaynaklanmaktadır. Bir opera performans olarak, nihai sonucu sinerjik etkileşim faktörlerin çokluğu ile belirlenir. Böylece, teknik açıdan sağlam bir optik deney ulaşmak için, bağımsız, optik aparat ve protokolün her bir adım için gerekli becerileri rafine esastır. Aşağıda potansiyel sorun alanlarının bir listesini ve her zaman ⁵ beklenen sorunları önlemek için bazı öneriler:

1. Gürültü kaynakları
   
   Her zaman fizyolojik tepkileri yansıtan kesirli değişikliği (mesafe kadar taşınmış / F) (<% 10 / bağırsak kayıtların çoğu 100 mV) nispeten küçük olması nedeniyle, voltaj duyarlı boya ile elektriksel aktivite kayıt ve gürültülü bir iz Mekanik ve optik istikrar çok önemli kötü bir sonuca işaret değildir. Bu nedenle, sinyal-gürültü oranını optimize etmek için, onu ortadan kaldırmak için zorunludur, ya da en azından en aza indirmek için, en kötü iki suçluların katkıları: a) mekanik titreşimler, ve b) ışık kaynağı dalgalanma.
   
   
   1. Mekanik titreşimler kurulum yapılandırma, istikrar, motorlu ekipmanları, hava akımları, akustik gürültü, akıcı hareketler, ya da banyo çözüm yüzen parçacıklar yakınlığı gibi çok farklı olarak çeşitli kaynaklar tarafından oluşturulur. Iyi bir titreşim izolasyon sistemi ve aşırı durumlarda (örneğin, 5.1 açıklamasına bakın) için akustik perdeleri, büyük bir fark yaratabilir ve maliyet değerdir. Buna ek olarak, deney, ya da kurulum, küçük, hareketli parçalar için manyetik üslerin kullanımı kullanılan çözümler filtrasyon gibi sağduyu yaklaşımlar, oldukça etkili.
   2. Işık kaynakları, yarı-maksimum yoğunluğu en istikrarlı. Bu nedenle, bir güç kaynağı için akım sınırı ayarlamak gerektiğini ve gerektiğinde gerilimi azaltarak ışık yolu yerine nötr yoğunluk filtreleri takarak ışık yoğunluğunu azaltmak. Ark lambaları özünde gürültülü. Tungsten-halojen ampul veya ışık yayan diyotlar çok daha istikrarlı ve tercih ⁶ olmalıdır.
      
      
2. Hayvan yaş
   
   Yaşla birlikte bağırsak sertleştirdi içinde bağ dokusu gibi, afferent ve efferent süreçleri iki plexuses nöronlar üzerinde büyük hasara maruz kalmadan bireysel doku katmanlarına ayırmak için daha zor hale gelir, çünkü diseksiyonlarının genç hayvanların bağırsak kullanılarak yapılmalıdır çapraz katmanlı sınırları ve / veya gut uzunlamasına ekseni boyunca oldukça mesafe proje. Bu danışma, içi gangliyonik bağlantıları çalışılırken göz ardı edilebilir, deneysel amacı, inter-ganglion refleks yollarının devreleri ya da aktivasyon analizi büyük önem taşımaktadır.
   
   
3. Boya içselleştirilmesi
   
   Mümkün olduğunca düşük bir boya konsantrasyonu olarak kullanmak ve gereksiz ışık maruziyeti en aza indirmek için önemlidir. Hazırlanması sağlığı bozulur gibi, di-4-ANEPPDHQ diğer boyalar daha az fototoksik olduğu kanıtlanmış olmasına rağmen, sonunda, içselleştirilmiş alacak. Boya içselleştirilmesi, dramatik bir ^eşiğe 3 artırarak sinyal-gürültü oranı azalır .
   
   
4. Elektrot bakım
   
   
   1. Elektrotlar her bir deney sonrasında dikkatle ve iyice yıkanmalıdır. Organik mevduat tungsten elektrot ucunda elektrot direnci artırmak ve stimülasyon önlemek.
   2. Piyasada bulunan tungsten elektrot yalıtım çok hassas ve hasar eğilimli. Stimülasyon etkinliğini yalıtımında bir kaçak akım şönt uzlaşma ve deneyin başarısı tehlikeye.
      
      
5. Perfüzyon tehlikeleri
   
   Perfüzyon açıkken set-up yalnız bırakmayın. Akış ve peristaltik pompa akış düzgün dengeli değilse, iki katastrofik olaylar yer alabilir:
   1. Bir sel mikroskop geri dönüşümsüz hasara neden olabilir.
   2. Hazırlanması, deney sırasında kurumasına neden olabilir.
      
      
6. Yazılım sorunlarını
   
   Bu satın alma gibi iyi analiz kontrol yazılımı ile kendini tanımak için çok önemlidir. Hızlı veri edinme ve / veya çok büyük dosyaları oluşturma sistemi arıza eşiğine sürücü eğilimindedir ve sınır koşulları saygı sürece oldukça affetmez Neuroplex, acımasızca çökmesine sebep olacaktır. Analizi ilgi sınırlı bölgelerde sınırlı zaman kolayca cevapsız kayıtları içinde incelikleri, kendilerini sık sık veri film görüntüler ortaya koymaktadır.

Tartışmalar

Bu protokol, iki gol düşünülerek yazılmıştır. Bunlardan birincisi, son on yılda pek çok teknolojik gelişmeler, voltaj duyarlı boyalar kullanılarak elektriksel aktivite optik kayıt sayesinde sağlam nöron ağları eğitim için en güçlü, güvenilir ve uygun fiyatlı yöntemler biri haline gelmiştir ki, diğer araştırmacılar ikna etmeye; gerçekten kolayca mütevazı kaynaklara sahip bir laboratuvarda bile uygulanan olabilir. Ikinci golü, moleküler ve hücresel olayların iki nöronal plexuses ve b...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Medium 199	Sigma-Aldrich	M3769	With Earle’s salts Without L-Glutamine, Phenol Red and Sodium Bicarbonate
Sylgard	Dow Corning	184 silicone elastomer kit
Insect pins used for dissection	F.S.T.	26001-30
Dumont forceps	F.S.T.	11203-23 or 11200-33
Moria MC19/B Pascheff-Wolff Spring Scissors	F.S.T.	15371-92
Pins to hold the tissue during the experiment	Seirin Corp.	Seirin Spinex
Collagenase VII	Sigma-Aldrich	C0773
Protease IX	Sigma-Aldrich	P6141
Fetal Bovine Serum	Invitrogen	10439-016
PenStrep	GIBCO, by Life Technologies	15140
L-Glutamine 100X	GIBCO, by Life Technologies	25030
Nifedipine	Sigma-Aldrich
Di-4-ANEPPDHQ	Molecular Probes, Life Technologies	D36802
4-Channel Stimulus Generator	Multi Channel System MCS GmbH	2000 Series
Peristaltic pump	Rainin	2-channel Dinamax RP-1
High-speed camera	RedShirtImaging, LLC	NeuroCCD-SM
1:10 demagnifier / relay lens	Optem, Qioptiq Inc.
Upright microscope	Olympus Corporation	BX61TRF
Gibraltar fixed stage with motorized X-Y translator	Gibraltar, Burleigh Instruments, EXFO, Quebec, Canada	PSSG--BX2
Linear matrix electrodes	FHC, Inc.	Custom made
Active vibration-isolation table	Halcyonics,Inc., Menlo Park, CA	Micro 60
Ultra-low-ripple feedback stabilized power supply	Kepco, Flushing, NY	ATE 75-15M
Heat filter	Schott AG	KG-1
High-Q interference filter	Chroma Inc.	HQ530/50
Dichroic mirror	Chroma Inc.	565 nm (50% transmission)
Long-pass filter	Chroma Inc.	HQ572LP
Acoustic curtains	Acoustical Surfaces, Inc.	BSC-25
Neuroplex	RedShirtImaging, LLC
IDL	ITT Visual Information Solutions
High-resolution CCD camera, with its own camera controller	Hamamatsu Corp.
Frame-grabber for high-resolution camera	Data Translation	DT3120K-1
Imaging software for high-resolution camera	Data Translation	Global Lab Image/2