Droplets tarafından Başlığı Hücre Kapsülleme

Özet

Özet

Protokol

NIH3T3 hücrelerinin hazırlanması:

Ejeksiyon için A. Hücreler

1. Sonra da hücre, hücre medya ile seyreltilmiş 1:1, ve T75 balonuna 15 ml Falcon tüp transfer Trypsinize
2. Santrifüj edilerek pelet hücreleri aşağı Spin süpernatant aspirat ve hücreleri DPBS ile yıkayın
3. Pelet içine hücreleri tekrar aşağı çevirin ve süpernatant aspirat
4. Medyada yeniden süspanse hücreleri
5. Hemasitometre (~ 200 X 10 ⁴ T75 şişesi başına hücre / ml) ile hücre yoğunluğunu
6. Santrifüj hücre çözümü, supernatant aspirat, medya uygun miktarda ve değişik hücre konsantrasyonları için tekrar süspansiyon

B. Hücre ejeksiyon

1. Çıkarılmaya kullanmadan önce Vortex hücreleri
2. Enjektöre hücre çözümü 200 mcL transfer
3. Darbe jeneratörü uygun modu ayarlama
   1. Çıkarırken, tek damlacıkları ve çoklu damlacıkları (patlamaları), "E. BUR" modunda darbe jeneratör
   2. Sürekli damlacık ejeksiyon için, "NORM" moduna darbe jeneratör
4. Sinyali ayarları değiştirin
   1. 5 V ve LOL 0 V ve emin olun "LIM" LED HIL: yüksek seviye ve düşük seviye çıkış voltajı ayarla
   2. Sinyal kare dalga olarak ayarlayın
   3. Solenoid valf "WID" değerini değiştirerek veya görev döngüsü değişen açık damlacık ejeksiyon zaman miktarını değiştirme ("HİZMET")
   4. "BAŞINA" değerini değiştirerek ejeksiyon frekans değiştir
   5. "BUR" değerini değiştirerek bir patlama çıkarılır damlacıkların sayısını değiştirme
5. Mikroskobu ile görüntüleme için hazırlanmış yüzey üzerine Çıkar hücre çözümü

C. Boyama

1. 0.5 mcL Calcein-AM ve DPBS ml başına 2 mcL ethidium homodimer boya çözüm Makyaj
2. Boya çözüm daldırın hazırlanan substrat
3. İzin örnek 37 az 10 dakika süreyle inkübe ° C görüntüleme önce

Deney Doğrulama

1. Nikon Eclipse TE-2000 U Floresan Mikroskobu
   1. Spot gelişmiş yazılım (Diagnostics, Inc.)
   2. Ölü / Canlı Testi

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fluorescent Microscope		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector				Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank		Coleman	Powermate CT5	Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators		Marsh Bellofram
Pulse Generator			HP8112A	Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage		Newmark Systems		With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3	Cell-line			fibroblasts
Trypsin				0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS	Buffer
T75				Tissue culture flasks
Plastic conical tubes				15 ml, for tissue culture