Kelvin Probe Kuvvet Mikroskobu kullanılarak Bakterilerin Yüzey Potansiyel Ölçümü

Özet

Here, we present a protocol explaining the use of Kelvin probe force microscopy as a tool for generating high resolution nano-scale surface potential maps. This tool was applied to assess the role of surface potential on the binding capacity of microorganisms to substrate surfaces.

Özet

Yüzey potansiyel yüzeyleri alt tabakaya mikroorganizmaların yapışmasında bir rol oynayan bir yaygın olarak gözardı edilen fiziksel özelliğidir. Kelvin prob kuvvet mikroskobu (KPFM) nano-ölçekte yüzeyler arasındaki temas potansiyeli farkı ölçen atomik kuvvet mikroskobu (AFM) bir modül. AFM ile KPFM kombinasyonu yüzey potansiyeli ve örneğin bakteriyel hücreler gibi biyolojik örneklerin topografik haritaları aynı anda oluşturulmasına izin verir. Burada, biz böyle paslanmaz çelik ve altın gibi tıbben ilgili yüzeylere yapışma mikrobiyal yüzey potansiyelinin etkilerini incelemek için KPFM istihdam. Yüzey potansiyel haritalar farklı malzeme yüzeylere mikrobiyal membranların yüzey potansiyeli ortaya çıkmıştır. Bir adım yükseklik grafiği substrat yüzeyi ve mikroorganizmalar arasındaki sınır bölgede yüzey potansiyeli farkı göstermek için üretildi. Hücre zarı yüzeyi potansiyelindeki değişim değişim ile bağlantılı olmuşturhücre metabolizması ve hareketlilik s. Bu nedenle, KPFM çeşitli alt-tabaka yüzeyine yapışmasından sonra mikrobiyal zar yüzeyi potansiyeli değişiklikleri incelemek için kullanılabilir güçlü bir araç oluşturmaktadır. Bu çalışmada, KPFM kullanılması ile paslanmaz çelikten ve altın bireysel metisilin dirençli Staphylococcus aureus USA100 hücre yüzey potansiyelini karakterize etmek için prosedürü gösterir.

Giriş

Biyofilm kaldırılması için inatçı ve hastalık bulaşma ve antimikrobiyal direnç oranlarının artışı yol gibi ekipman yüzeylerinde ve deri yaraları üretilen Biyofilmler medikal sektörü için bir sorun mevcut. Ek biyofilm oluşumunda ilk adım olduğunu ve onun tersinirliği ^1-3 dolayı en kritik adımdır. Yüzey yüzey özellikleri mikrobiyal eki çok önemli bir rol oynamaktadır. Bu tür yüzey sertliği, gözeneklilik, pürüzlülük ve hidrofobiklik gibi faktörler mikrobiyal ek gerçekleştirilmesi gösterilmiştir; Ancak, mikrobiyal yapışma üzerinde yüzey yüzey potansiyeli (SP) rolünü inceleyen çok az araştırma ^4,5 yapılmıştır. Negatif yüklü yüzeyleri mika, silikon, ve altın ⁶ Bacillus thuringiensis sporlarının bağlanmasını önledikleri varsayılır. Hücre zarı potansiyelinde değişiklikler hücre bağlanması ve hareket kabiliyeti ^5,7 değişim göstergesidir. Bu elektrik Hom gözlemlenmiştirogeneous yüzeyler daha kolay bir şekilde mikrobiyal yapışma ⁵ destekler. Nano bakteri yüzey potansiyelini karakterize, anti-biyolojik kirlilik stratejilerin geliştirilmesine yardımcı olabilir böylece çeşitli yüzeylere bakteri yapışma kinetiği anlamak için yeni bir yol sağlar, ve olabilir. Böyle elektroforetik ışık saçılması, zeta potansiyeli ve izoelektrik nokta belirleme gibi bakteri, elektro kinetik tanımlamak için kullanılan diğer yöntemlerin aksine, Kelvin prob kuvvet mikroskobu (KPFM) tek tek hücrelerin yerine tüm kültürlerin ^8-11 incelenmesi için izin verir. Hücre-hücre karşılaştırmak veya yüksek doğruluk ve hassasiyet ile elektriksel özelliklerini biyofilm isteyen bu faydalıdır.

KPFM atomik kuvvet mikroskobu (AFM) bir modül. AFM tarama tünelleme mikroskobu (TTM) ¹² doğrudan bir sonucu olarak geliştirilmiştir. STM kullanarak ilk yayınlanan görüntüleri 1982 ¹² Gerd Binnig ve Heinrich Rorhrer tarafından yapılmıştır . Onların buluş havada bir iletken yüzey üzerinde keskin bir iletken ucu tarayarak raster tarafından atom yapılarını çözmek başardı. hızlı görüntü kurutulmuş DNA, protein örneklerinin ve virüslere ¹² STM kullanmayı denedi biyologları heyecanlı yüksek çözünürlüklü görüntüler elde etkileri. STM ayrıca özel prob ipuçları ¹³ kullanılarak sıvı yapılabilir. Bu Lindsay ve ark., Altın elektrotlar ^13, 10 mM _HClO4 ve su içinde görüntü DNA molekülleri STM ve AFM kullanılan ile gösterilmiştir. KPFM ligandları ^26, DNA ve protein analizi ²⁵ ve biyomoleküllerin etkileşim yüzey potansiyellerinin belirlenmesinde gösterilmiştir.

KPFM AFM iletken konsol ucu ve bir ideal olarak iletken numune arasındaki temas potansiyeli farkı (CPD) ölçerek ^14,15 (i Şekil 1) çalışır. Numuneler mutlaka iletken (yani, biyolojik sampl olmak zorunda değilsinizes). Görüntüleme mika, cam ve uzun iletken olmayan yüzey incedir ve bir alt iletken malzeme ^6,7 olduğu gibi silikon yüzeyler (iletken olmayan) ile gerçekleştirilebilir. SMG yüzeyi potansiyel gerilimi eşdeğerdir ve negatif elektron yükünün bölü ucu (φ _ucu) ve örnek _(numune φ) arasındaki iş fonksiyonları farkı olarak tarif edilebilir (- e). İletken bir AFM ucu bir örnek, yüzeye yakın getirildiğinde bağlı Fermi enerjileri arasındaki fark (Şekil 1, II, a) ¹⁵ ile bir elektrostatik kuvvet (F _lar) oluşturulur, (d mesafesinde ayrılmış). Bu noktada, uç ve örnek (E _v) vakum enerjileri denge ve hizalanmış bulunmaktadır. Yakın örnek yüzeyine ucu getirerek üzerine, uç ve örnek yüzeyi paralel plakalı kapasitörler (Şekil 1, ii b gibi elektrik kontağı ve hareket girer ) ^14,15. Noktada uç ve numune yüzeyinden Fermi enerjileri bir kalıcı-hal dengeye ulaşması aynı hizaya gelirler ve (Şekil 1, ü, b). ucu ve örnek yüzeyi nedeniyle E _v 'nin ve iş fonksiyonları bir fark tahsil edilecektir ve V _SMG oluşturacaktır. Nedeniyle oluşan V _CPD elektrik temas alanı üzerinde bir F _es görür. Bu kuvvet daha sonra (Şekil 1, II, c) oluşan V _CPD ile aynı büyüklüğe sahip ucuna bir dış V _DC uygulaması ile etkisiz kılınır. Bu DC gerilim elektrik temas alanında yüzey yükü ortadan kaldırır uygulanan ve V _CPD F _es ortadan kaldırmak için gerekli V _DC miktarı sa arasındaki iş fonksiyonları farka eşittirmple yüzey ve uç ^15. Bu ucu iş fonksiyonu bilinen ve üretici tarafından sağlanan not edilmelidir. Tüm KPFM yöntemlerinde, bir AC voltajı (V _AC, yaklaşık 100-500 mV) de uç ve örnek ¹⁴ arasındaki salınım elektrik kuvvetlerinin üretilmesi için, uç uygulanır. V _CPD ve / veya F _es değişiklikleri ölçerken daha iyi çözünürlük sağlar. Bu bağlamda, frekans veya elektrik salınım amplitüdünün değişiklikler V _DC ile düzeltilir ve potansiyel harita oluşturulabilir yüzey olabilir. Bu haritaların belirli alanlarda elde edilen veriler daha spesifik topografik özellikler hakkında bilgi sağlamak için elektrik analiz edilebilir.

(1) kaldırma modu, (2) genlik modülasyonu (AM) modu, ve (3) frekans modülasyonu (FM) modu ^14,16: KPFM üç modda çalıştırılabilir. Asansör modu ilk inc olduKPFM ve arnation. Asansör modu sallanmaktadır ucu topografik görüntü elde etmek yüzey boyunca sürüklenen olduğu bir iki-geçişli yöntemine dayanır. İkinci geçişte için ucu numune üzerinde önceden belirlenmiş bir mesafeyi yükseltildiğinde (10-100 nm) ve tekrar aynı alan boyunca taradı. Nedeniyle AM- ve FM-KPFM göre bu iki taramalı yöntemiyle, asansör moduna, görüntü alımı için uzun zaman alır. Yüzeyden ucu Raising sadece uzun menzilli F _es ölçülür sağlar. Ayrıca, topografya ve yüzey potansiyel ölçümleri arasındaki çapraz konuşma artan yanal çözünürlük ve hassasiyet pahasına decoupled.

AM-KPFM aynı anda numune topografya ve yüzey potansiyeli (tek-geçişli tarama) ¹⁴ ölçmek için çift frekansları kullanılarak yanal çözünürlük ve hassasiyeti artırır. AM modunda ise, konsol mekanik genel olarak% 5, ilk rezonans frekansı altında salınım (f _0), ve elektrik olarak salınım (tikinci rezonans frekansı (f ₁₎ bir V _AC) hrough. Nedeniyle F _es ve V _CPD değişikliklere f ₁ genlik değişiklikleri, yüzey potansiyel ölçüm verileri verirken topoğrafik verilerin nesil f ₀ kurşun genlik değişiklikler. fnin ₀ ve konsol f ₁ çapraz konuşma ¹⁴ en aza indirilir sinyal önemli frekansları ve enerji ile ayrılır. AFM başkanı elektroniği kutusu (HEB) hem topografik vermek ve bir tarama aynı anda potansiyel verileri yüzey iki sinyalleri ayırır. FM-KPFM biyolojik yüzeyler ¹⁴ çözünürlük daha fazla AM-KPFM geliştirir. FM-KPFM elektrostatik kuvvet geçişlerini yerine elektrostatik kuvvet (F _es) ¹⁵ değişiklikleri ölçen AM-KPFM daha farklı çalışır. AM modunda gibi, FM modu çift frekansları ve SINGL kullanırE-pass tarama mekanizması topografik elde etmek ve aynı anda ¹⁴ potansiyel verileri yüzey. FM modunda, konsol mekanik f ₀ sallanmaktadır ve elektriksel düşük modifiye frekansta salınımlandırılan _(mod f, tipik 1-5 kHz). Elektrostatik etkileşimler üzerine, ₀ ve f _mod karışımı f ₀ ± f _mod f yan bantları üretimi için. Bu yan bantlar elektrostatik kuvvet değişikliklere çok hassastırlar ve AFM HEB yoluyla f ₀ ayrılabilir. FM-KPFM elektrostatik kuvvet geçişlerini değişiklikleri ölçen bu yana, ipuçları apeks şekil ve bakım / bütünlük. Genel yüzeye potansiyel çözünürlük ^{14, 15} kritik rol oynamaktadır AM kullanarak potansiyel çözünürlük Yüzey ve FM modları yanal 1 nm aralığında ¹⁴ olan ^-16. Bu KPFM görüntüleme içinde (polar olmayan sıvılar içinde yapılabilir, ve en son olarak, düşük iyonik (<10 mM), polar sıvılar içinde yapılabilir gösterilmiştir unutulmamalıdırBöyle MilliQ su gibi bir DC önyargı uygulama kalmayabilir, bir önyargı geribildirim gerekmez açık döngü KPFM modları); Ancak, KPFM görüntüleme henüz kutup çözümleri ^17-20 canlı hücrelerde yapılması gerekir. Sıvı SP görüntüleme ile ilgili daha başka sorunlar çözümler genel olarak muhafaza hücreleri için kullanılan (yani, fosfat tamponlu tuzlu su) Faradaysal reaksiyonları, önyargı kaynaklı yük dinamikleri ve iyon difüzyon / yeniden dağıtma ²⁰ yol açacak mobil iyonlar, yüksek konsantrasyonlarda bulunur. Bu durumda, bu deney için, ölçümler ortam koşullarında poli-L-lisin işlevselleştirilmiş paslanmaz çelik, altın yüzeyleri üzerinde kurutuldu ve ölü MRSA hücrelerden alındı. Görüntüleme önceden kurutulmuş ya da yüzey ²⁰ üzerine immobilize edilmiş biyolojik örnekler üzerinde hava veya vakum koşullarında gerçekleştirilebilir. Nemli koşullar da yüzeyleri ⁶ KPFM görüntüleme etkilediği gösterilmiştir.

Bu çalışmada, biz FM-KPFM istihdamve AFM poli-L-lizin fonksiyonlandırılmış paslanmaz çelik ve altın yüzeylere metisilin dirençli Staphylococcus aureus USA100 (MRSA) eki SP rolünü incelemek için. MRSA son zamanlarda nedeniyle birçok β-laktam antibiyotikler ve sefalosporinlere ²¹ olan doğal seçilen direnci bir çok ilaç dirençli (MDR) "Superbug" olarak statüsünü topladı. MRSA enfeksiyonları gibi vankomisin ya da uzun süreli tedavilerde ²² olarak kullanılamaz, bu nedenle, insanlarda daha yüksek toksisite düzeyine sahip ve oksazolidinonların gibi daha sert antimikrobik kullanımına yol açan, hemen tedavi etmek için daha zorlu zordur ve çok büyüktür. Paslanmaz çelik tıbbi alaka ve Altın karşılaştırmalı metal olarak kullanılan vb derialtı iğneler, bedpans, kapı kolları, lavabo, bir malzeme olarak yaygın kullanımı nedeniyle seçildi. FM-KPFM mikrobiyal zar SP yüzeylere eki üzerine değişirse incelemek için kullanılmıştır.

Protokol

Züccaciye ve Kültürler 1. Hazırlık

1. Bu deneyde geçmeden önce,% 5 koyun kanlı agar (SBA) MRSA yetiştirmek için plakaları hazırlamak. 37 ° C'de 24 saat süre ile SBA inkübe edin. Bu süreden sonra, tek bir iyi izole edilmiş koloni sıvı ortam içine eden aşılamalar için kullanılmak üzere mevcut olması gerekmektedir. 2 ay - Mağaza 1 4 ° C'de tek koloniler ile SBA plakaları çizgili.
   Not: koyun kanı agar plakaları 20 arasında ihtiva eden önceden hazırlanmış paketlerde gelir - üretici göre 25 plakaları ve tipik olarak hac koyun kanı% 5 w / ilavesi ile bir triptik soya agar baz oluşur.
2. % 1 glukoz ve% 0.1 NaCI ile takviye edilmiş triptik soya suyu (TSB) içinde, 500 ml olun. Bundan sonra, toplamak ve 2 cam test tüpleri temizleyin. Otoklavlanabilir kapaklar Test tüpleri için kullanılamaz iseniz, bir kap olarak alüminyum folyo kullanın. Otoklav TSB ve 1 ml pipet uçları bir kutu ile birlikte deney tüpleri.
3. Bir biyogüvenlik kabini altında veya bir Buns yakınındakibrülör tr, pipet önce 5 ml otoklava deney tüpleri içine TSB otoklava. Yeterli zamanı sağlamak için dikkatli olun TSB izin verilen ve test tüpleri oda sıcaklığında soğumaya olmuştur. Önceden çizgili% 5 SBA plaka, 6 ml TSB suyu içine tek bir koloni aşılamak. Bir MRSA içerecektir ve ikinci bir test tüpü sterilizasyonu sağlamak için bir negatif kontrol olarak kullanılır.
4. İnoküle edilmiş TSB test tüpleri alın ve 37 ° C'de 24 saat süre ile 200 rpm'de bir karşılıklı inkübatör içine yerleştirilir. Herhangi bir büyüme kontrol test tüpü içinde meydana gelmiş olmalıdır Bu süre sonra, mikrobiyal büyüme MRSA test tüpünde açık olmalıdır.
5. Taze TSB 6 ml 24 saat kültür ve pipetle 1 ml alın. 200 rpm'de 6 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edilir.
6. Pipet 1.5 ml mikrofüj tüpüne 6 saat alt kültürün 1 ml olmuştur. 850 x g'de 3 dakika boyunca santrifüj. Süpernatantı ve deiyonize _H2O, 1 ml pelet yeniden askıya Santrifüj, tekrar, ve tekrar askıya.

2. Temizlik ve Aşılama Paslanmaz Çelik ve Altın Yüzeyler

1. Paslanmaz çelik ve altın AFM örnek diskleri (20 mm ve 10 mm çapları) alın ve deiyonize H ₂ O 5 ml her tarafını temizlemek Forseps ile dominant elin örnek diskleri tutun ve örnek diskin her iki tarafında 5 ml pipetle için subdominant elinizi kullanın. 1 dakika süreyle sese tabi tutularak ve ardından deiyonize _H2O 20 ml ihtiva eden bir çanak içinde her iki tarafında yer örnek diskleri yıkandıktan sonra.
2. Sonication kullanım forseps sonra beher örnek diskleri kaldırmak için. Bir kağıt havlu üzerine açık bir Petri plaka kenarına karşı 60 ° açıyla eğilmek böylece diskleri yerleştirin. Kurutma diskleri kapsayacak Petri plaka kapağını kullanın. Diskler devam etmeden önce tamamen kurumasını bekleyin. 8 saat - Kurutma süresi 4 arasında değişebilir.
3. Kuruduktan sonra, bir Petri plaka içine örnek diskleri yerleştirmek için forseps kullanabilir.
   1. İsteğe bağlı olarak, (herhangi bir malzeme ile örnek disklerin yüzeyleri işlevselleştirilmesiörneğin, kolajen, hiyalüronan, gümüş nano-parçacıklar, vs.).
   2. Bu deney için, kaplamak için poli-L-lisin alt-tabaka yüzeyi kullanır. Için poli-L-lisin işlevselleştirme, pipet 200 - örnek disklere (lH ₂ O),% 0.1 poli-L-lisin, 400 ul, ve bir Petri tabağına ve oda sıcaklığında 1 saat süreyle inkübe edin.
   3. 1 saat sonra, numune diski tutun ve deiyonize _H2O 1 ml yıkama için forseps kullanabilir Adım 2.2 açıklandığı gibi kağıt havlu üzerinde kurumaya bırakın.
4. 2x yıkanmış yeniden askıya hücreleri alın ve 200 plaka - bir biyogüvenlik kabini içinde örnek disklere 400 ul. Örnek diskler ve poli-L-lizin ile kaplanmış ise, oda sıcaklığında, 0.5 saat süre ile inkübe edilir.
5. Örnek diskler üzerinde hücrelerin inkübe edildikten sonra, deiyonize _H2O, 1 ml ile hafifçe örnek diskleri yıkama Diskler görüntüleme önce gecede kurumasını bekleyin.

3. KPFM Görüntüleme

NOT: Bu deney için,bir Agilent 5500 serisi ILM-AFM kullanın.

1. AFM başlatmak için, AFM HEB ve MAC III kontrolörü ile birlikte bilgisayar ünitesi açın. Açık AFM görüntüleme yazılımı (örneğin, Agilent'in PicoView). Başlangıçta ACAFM veya hangisi doğru tanımlama aralıklı temas modunda görüntüleme için AFM üzerinde seçtiğinizden emin olun.
2. Dominant elin AFM forseps kullanarak ve subdominant el açık yaylı klips tutucu tutarak, baş-parça içine KPFM konsol yerleştirin. Taşıma ve (en az 5500 ILM-AFM üzerine) Bu birim olarak AFM AFM baş parça aktarılması X, Y ve Z tarama directionalities kontrol kırılgan piezo kristal birimi içerir dikkatli olun.
   NOT: Bu durumda kullanılan KPFM konsollar Mikromasch iletken DPE 2.7 N / m 80 kHz ve yay sabitleri ortalama rezonans frekansları ile (düşük-gürültü) konsollar vardı. Bu rezonans frekansları ve yay sabitleri ile konsollar nedeniyle kullanım kolaylığı için seçildi.Daha büyük bir yay sabitleri ve daha yüksek rezonant frekanslarına sahip konsol aynı zamanda görüntüleme için kullanılabilir.
3. Dikkatle AFM içine baş parça yüklemek ve (iki tel takılı olması gerekir bu durumda: lazer ışığı ve sahne asansör motorunun) uygun kabloları bağlayın.
4. Konsolun ucuna lazer hizalama. Bazı birimler kolay uyum sağlayan bir kamera işlevselliği içerir. Kamera işlevi AFM mevcut değilse sonraki açıklandığı gibi, konsol ucuna align:
   1. Konsol çip üstünlük lazer taşımak için ön-arka düğmesini saat yönünde çevirin. Lazer çip ulaştığında bloke edilecek ve artık görünür olacaktır. Sadece düğmenin bir kaç kez çevirin.
   2. Lazer nokta tekrar gelene kadar saat yönünün tersine ön-arka düğmesini çevirin. Lazer çipin kenarında şimdi.
   3. Konsol üzerindeki lazer konumlandırmak için sol-sağ düğmeyi çevirin. Lazer konsol üzerinde geçerken kaybolur ve i yeniden görünürn hızlı arkaya. lazer nokta fotodiyot ünitesi daha sonra oturup buzlu cam kapak görünür olmalıdır.
   4. Buzlu cam spot kaybolana kadar uca doğru konsol aşağı noktaya taşımak için saat yönünün tersine önden arkaya düğmesini çevirin.
   5. Sadece konsol ucunda oturur, böylece lazer konumlandırmak için sadece biraz ön-arka düğmesini saat yönünde çevirin. lazer nokta buzlu cam üzerinde yeniden görünür.
      NOT: Bu dalış kartı konsollar için lazer konumlandırma yöntemidir. Üçgen konsol için, hizalama işlemi biraz farklıdır.
5. Lazer hizalanmış sonra, AFM için örnek takarken konsol ve örnek arasında yeterli boşluk sağlamak için 10 saniye için "açık" konumuna sahne asansör motoru tutun.
6. KPFM örnek sahnede örnek yerleştirin. Bir bakır tel kullanılarak örnek topraklayın. Örnek aşamasına AFM uygun teller bağlayın. S bağlayınAFM için tage. Çoğu durumda sahne mıknatıslar kullanılarak yerinde tutulur.
7. AFM yazılımında, melodi konsol ve daha sonra örnek konsol ucu yaklaşımını başlar. Zaman yerleşme fazla 10 msn olarak ayarlanmış olduğundan emin olun, ve bu yaklaşım hızları ucu hasarı önlemek için 2.0 mm / sn aşmamaktadır.
8. Konsol ucu numune yüzeyinde sonra, bir görüntüleme penceresi boyutu ve ideal görüntüleme alanını seçin. Topografik görüntüleme optimize böylece konsol ayar noktası ile birlikte I ve P kazançlar optimize.
   1. Topografik görüntüleme optimize sonra, KPFM modülü açın (FM ya da AM modu, burada, FM modunu kullanın). Bu KPFM görüntüleme 5 mm x 5 mm görüntüleme penceresinin dışında çok zor olduğu unutulmamalıdır. (- 0.05 hatları / sn 0.02) Ayrıca, optimum KPFM görüntüleme için, yavaş tarama hızları ile 512 x 512 çözünürlüğü kullanın.
9. 10% - FM-KPFM ayarları için (ayarları ACAFM değil), 5 ila sürücü yüzde ayarlayın. Konsol fr ayarlayın2 kHz bant genişliği ile 5 kHz - 1 arası equency. 0.3% FM-KPFM ayarları için I ve P kazançlar ayarlayın.
   1. Sinyal bant genişliği ve I ve örnek yüzeyleri arasında P kazançlar Vary. SP görüntüleme optimize etmek için, daha fazla sinyal bant genişliği ayarlamak ve I ve P kazançlar optimum görüntü elde etmek. 0.35% - I ve P kazanımların tavsiye aralığı 0.22 vardır.
10. Süreç ve SP verilerini toplamak için post-görüntü işleme yazılımı kullanarak KPFM görüntüleri toplanan analiz eder.

Sonuçlar

KPFM kullanarak SP ölçmek yeteneği örnek yüzeyi ve konsol ucu hem bir ölçüde iletken olduğu ilkesine dayanmaktadır. Paslanmaz çelik ve altın MRSA tutunduğu gibi iletken yüzeylere harekete geçti. KPFM görüntüleri 512 x 512 çözünürlükte her iki yüzeylerde 15 MRSA hücreleri alındı ​​ve 5 x 5 um den 10 x 10 mm arasında değişen tarama alanları ile yapılmıştır. Tarama 0.02 satır / sn 0.05 satır / sn arasında değişen hat hızı ile gerçekleştirilmiştir. 512 veri noktaları tarama ...

Tartışmalar

KPFM elektriksel yüzey verilerinin elde edilmesi için yeni bir yöntem olarak kullanılmıştır. Genellikle kimyada yük dağılımının incelenmesi için bir yöntem olarak kullanılmaktadır ve sadece yakın zamanda mikro ve nano ölçeklerde biyolojik sistemlerin çalışma için uygulanacak başlamıştır. Toplanan veriler biz mikropların kolayca bile statik inkübasyon 3 saat sonra, paslanmaz çelik ve altın yüzeyleri temizlemek eklemek için görünmedi bulundu. Poli-L-lisin işlevselleştirilmiş yüzeyle...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
5500ILM Atomic Force Microscope	Agilent Technologies	#N9435S
AFM/STM Metal Specimen Discs	TED PELLA, INC.	#16219	Stainless steel sample discs
DPE (Low-Noise) Conductive SPM Probes	Mikromasch	#HQ:DPE-XSC11	There are 4 Pt-coated cantilevers per chip. We utilized cantilever B for experiments.
PELCO Gold Coated AFM/STM Metal Specimen Discs	TED PELLA, INC.	#16218-G	Gold sample discs
PicoView Software	Agilent Technologies	#N9797B	5500ILM Atomic Force Microscope imaging software
Pico Image Software (Pico Image Basic)	Agilent Technologies	#N9797AU-1FP	5500 ILM Atomic Force Microscope post-image processing software
Scilogex D3024 High Speed Micro-Centrifuge	Thomas Scientific	#91201513	Centrifuge used in cell-washing steps to separate cells (pellet) from media
Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood	BD	#221261	Pre-made plates
Tryptic Soy Broth	BD	#257107	Comes as a dry powder. Instruction on how to make come on the container.