Hamam böceği virülans, Patogenez ve uyuşturucu etkinliği araştırmak için alternatif bir Non-memeli hayvan Model tıslama Madagaskar

Özet

Biz Madagaskar kullanmak için bir protokol hamamböceği bakteriyel virülans, Patogenez, ilaç zehirlenmesi, ilaç etkinliğini ve doğuştan gelen bağışıklık yanıtı çalışmalar yapmak için alternatif bir non-memeli hayvan model tıslama mevcut.

Özet

Doğuştan gelen bağışıklık birçok özelliği memelileri ve böcekler arasında korunmuş. Bir böceği, Hamam böceği Gromphadorhina, cins gelen tıslama Madagaskar virülans, ana bilgisayar-patojen etkileşim, doğuştan gelen bağışıklık yanıtı ve ilaç etkinliğinin incelenmesi için alternatif bir hayvan model olarak yararlı olabilir. Ayrıntılar için yetiştirme, bakım ve Tıslayan hamamböceği üreme sağlanır. Biz de nasıl o intrasellüler patojenlerin Burkholderia mallei, B. pseudomallei ve d. thailandensisgibi bakteri ile enfekte göstermektedir. Tıslayan hamamböceği kullanımı ucuz ve araştırma memelilerde kullanımı ile ilgili düzenleme sorunları üstesinden gelir. Buna ek olarak, sonuç Tıslayan hamamböceği model kullanarak bulundu tekrarlanabilir ve memeli modelleri kullanılarak elde benzer. Böylece, Madagaskar Tıslayan hamamböceği hayvan çalışmaları yürüten zaman keşfedilmeyi bir çekici vekil konak temsil eder.

Giriş

Böcekler bakteriyel Patogenez ve doğuştan gelen ana savunma eğitim için alternatif sigara memeli hayvan modeller olarak kullanımı son yıllarda ivme kazanmaktadır. Lojistik, nispeten ucuz maliyet ve alma, işleme ve memeliler göre böcekler için bakım kolaylığı nedeniyle bu. Böcekler araştırma kullanımı ile ilgili hiçbir yasal ilke olduğunu; Amaç tabi değil veya herhangi bir hayvan tarafından belirtilen koşullar Komitesi veya devlet kurumu kullanın. Böcekler gibi vekil hayvan modelleri özellikle virülans faktörleri, ana bilgisayar-patojen etkileşimleri ve değerlendirmeler anti-mikrobiyal ilaç etkinliğinin kapsamlı tarama çalışmaları için mükellef bulunmaktadır. Bunların kullanımı araştırma böylece bazı etik ikilemler hayvan deney ^1,2yürütülmesi için doğal üstesinden gelmek için kullanılan memeli sayısını azaltabilirsiniz.

Böcekler ve memeliler ^1,3doğuştan gelen bağışıklık sistemi arasında ortak olması yüksek derecede olduğundan böcekler vekil ev sahibi olarak hizmet verebilir. Böcek plasmatocytes ve memeli makrofajlar mikroorganizmaların ⁴phagocytose. Nötrofil böcek Özgününü hemocyte ^5,6' dır. Böcek ve memeli hücreleri hücre içi oksidatif patlama yollar benzer; Reaktif oksijen türleri hem de orthologous p47^phox ve p67^phox proteinleri ⁵tarafından üretilmektedir. Toll reseptörleri Toll benzeri reseptörler ve böcek ve memelilerde Interleukin-1 sinyal cascades nehrin aşağısında da oldukça benzer; her ikisi de defensins ⁷gibi antimikrobiyal peptidler üretiminde neden. Böylece, böcekler metazoans tarafından paylaşılan genel doğuştan gelen bağışıklık mekanizmaları incelemek için yararlı olabilir.

Hamamböceği cins Gromphadorhina, gelen tıslama Madagaskar denilen bir böcek var, genellikle 5-8 cm vade sonunda ulaşan en büyük Hamam böceği türlerinden biridir. Bu sadece Madagaskar adasında için yerel ve kolaylaştırır - tıslayan ses Tıslayan hamamböceği solunum açıklıklar vızıltısı ⁸denilen havada ihraç etti zaman üreten bir ses ile karakterizedir. Kendine özgü tıslamak hamamböceği Kur ve saldırganlık ⁹ tıslama arasında sosyal iletişim biçimi olarak hizmet verir ve bir erkek tabiatında rahatsız olduğunda duydum. Hamam böceği tıslama Madagaskar yavaş hareket Amerikan hamamböceği ve diğer kentsel zararlı türler için karşılaştırılır. Bu cins ve bakımı kolaydır; hamile Tıslayan hamamböceği teker teker 20-30 yavru üretebilir. Bir perisi olarak adlandırılan Hamam böceği, 5 ayda cinsel olgunluğa ulaşır tıslama bebek 6 molts geçiren ve 5 vahşi ve esaret ⁸olabilir yıl yaşamak sonra.

İntrasellüler patojenlerin Burkholderia mallei, B. pseudomalleiile enfeksiyon ve B. thailandensis ^10,11. için bir vekil ev sahibi olarak hamamböceği tıslama Madagaskar kullanılan Hamamböceği tıslama içinde bu patojenler virülans Burkholderiaiçin Suriye hamster onların virülans kıyaslama hayvan modeli için karşılaştırıldı. B. pseudomallei ve B. mallei % 50 öldürücü doz (LD₅₀) her iki model ¹¹' benzer bulundu. İlginçtir, B. thailandensis, olmayan kemirgen modelindeki Tıslayan hamamböceği ¹¹' öldürücü olmasına rağmen. Bu fark B. thailandensis enfeksiyon ile ilgili yardımcı programı Tıslayan hamamböceği model vurguluyor; Mutantlar inceltiyorum B. thailandensis daha kolay Tıslayan hamamböceği kemirgen modellerinde çözülebilir. Ayrıca, model organizma için inceltiyorum mutasyonların bu tanımlama B. pseudomallei B. mallei ^10,12,ve¹³, B. thailandensis genellikle kullanılır indirilebilir daha öldürücü akrabaları benzer hedefleri yol.

B. thailandensis karşı Suriye hamster Tıslayan hamamböceği virülans farkı, bu tür 6 salgı sistemi-1 (T6SS-1), gibi kritik virülans faktörleri mutasyonların rağmen hangi inceltiyorum B. mallei içinde ve B. pseudomallei, çoğu benzer şekilde B. thailandensis ¹¹için inceltiyorum. Suriye hamster virülans üzerinde hiçbir etkiye sahip, bireysel T6SS mutantlar (T6SS-2 T6SS-6) B. pseudomalleiiçinde Tıslayan hamamböceği ¹¹' öldürücü kalır bu Tıslayan hamamböceği model daha fazla doğrulanır. Böylece, Tıslayan hamamböceği bir uygun Taşıyıcı hayvan üç Burkholderia türler için modeldir. Son zamanlarda Tıslayan hamamböceği Burkholderia enfeksiyon ¹⁰ ve onun toksisite karşı anti-sıtma ilaç klorokin (CLQ) etkinliğini incelemek için bir vekil hayvan modeli olarak kullanılmaktadır.

Burada, tarif biz yetiştirme ve bakım Madagaskar hamamböceği tıslama ve bu böcek üç Burkholderia türleri ile enfekte konusunda ayrıntılı bilgi sağlar. Ayrıca, biz virülans ve Burkholderia enfeksiyonlar ilaç etkinliğini ve bu büyük olasılıkla da benzer çalışmalar diğer bakteriyel patojenler için bir vekil olarak hizmet edebilir ki çalışmaya uygun vekil manken Tıslayan hamamböceği olduğunu göstermektedir.

Protokol

1. Tıslayan hamamböceği koloni korumak için hazırlıklar

1. Tıslayan hamamböceği yaşamak için kümesler hazırlayın. İç duvarları kafes kafes dışına tırmanma ve kaçan Tıslayan hamamböceği önlemek için en yakın çevresi için vazelin, yaklaşık 20 ila 30 mm genişliğinde, ince bir tabaka uygulayın.
   Not: hamamböceği tıslama büyük bir yer var, yeterli yüksekliğini ve kapaklarını kapsayıcılar çeşitli barındırılıyor olabilir. Fare kafesleri kullanın (~ 43 cm x 23 cm x 20 cm). 37 ° C için mukadder kafesleri için vazelin geçerli değildir.
2. Baş aşağı doğal utangaç böcekler için saklanacak bir yer sağlamak için kafesin içine yerleştirilen bir karton yumurta kartonu içerir. Karton yumurta kartonu polistren köpük plastik sindirim önlemek için yapılmış bir ile yerine değil.
3. Odada mevcut yataklar kullanılıyorsa daha kolay temizlik için ve yeni taranmış perileri görünürlüğünü artırmak için sağlamaz.
4. ~ % 20 ham protein bileşimi içeren kuru köpek maması edinin. Kalitesiz köpek maması blender veya mutfak robotu ile eziyet ve 4 ° C'de depolayın
5. Birkaç sığ yemekler ve akvaryum taş veya bir sünger yiyecek ve su elde etmek.
   Not: Custome Petri yemekler vardır.

2. Tıslayan hamamböceği bakım ve yetiştirme

1. Hamam böcekleri (~ 5 cm)--dan a ticari doğurmak tıslama outbred Madagaskar elde edilir. Bu protokol için kullanılan Gromphadorhina laevigatatürdür. Tıslayan hamamböceği aldıktan hemen sonra içeren nakliye kutusunu açmak.
2. Hayvanlar alınmasında kişisel koruyucu ekipman kullanım için uygun kurumsal yönergeleri izleyin.
   Not: kalın tek kullanımlık eldiven Tıslayan hamamböceği tarsal pençeleri keskin olduğu gibi Hamam böcekleri işlemek için kullanın.
3. İlâ 75 büyük Tıslayan hamamböceği transfer (> 3 cm) büyük kafes başına. Yeni taranmış ve daha küçük perileri transfer (< 3 cm) için ayrı bir kafes.
   Not: önemli ölçüde daha fazla 75 büyük tutmak tıslama hamamböceği fare kafesi başına sağlık koloninin bozulan için neden olabilir ve ayrıca ölümle sonuçlanabilir.
4. Kirli beyaz renkli, yavaşça olan yeni molted Hamam böceği, idare ve sıkma kaçının. Alternatif olarak, exoskeleton karartmak ve tutmadan önce sertleşmesine izin verir.
   Not: Akarlar, Gromphadorholaelaps schaeferi, sık sık--dan doğurmak aldıktan sonra Tıslayan hamamböceği eşlik kaldırmak için gerekli değildir. Faydalı akarları Tıslayan hamamböceği temiz tutmak ve insanlar için zararsızdır.
5. Tıslayan hamamböceği ile zemin kuru köpek maması sığ bir tabak içinde bir veya iki kez bir hafta ver. Tıslayan hamamböceği yeterli gıda sonraki besleme kadar olması için köpek besin içerir. Islak ve küflü olmuştur herhangi bir gıda atmak.
6. Köpek maması ek olarak kesilmiş meyve ve sebzeler, elma, patates veya marul, sığ bir tabak gibi sağlar. Küflü veya çürümüş gıda atmak.
7. İçme suyu sığ bir tabak içinde bir veya iki kez bir hafta sağlar ancak yemek içinde belgili tanımlık kafes dökülmeyi önlemek için fazla değil. Küçük akvaryum taş veya bir sünger bir iniş pisti için küçük perileri sağlamak için çanak yerleştirin. Ters Ozmos su, varsa kullanır.
8. Sıcaklık 21 ° C 30 ° C'ye kadar karanlıkta hamamböceği tıslama tutmak Deneme daha düşük sıcaklıkta (~ 21 ° C) ~ 2 ay ıslah ve gebelik azaltmak hedef alan büyük Tıslayan hamamböceği tutun. Buna ek olarak, perileri (28 ° C ile 30 ° C) daha yüksek sıcaklıklarda büyüme hızlandırmak için devam edin.
   Not: kafes, karanlık oda sıcaklığında (21 ° C) kabine tutun.
9. Nem bir kuluçka makinesine hamamböceği tutulur tıslama Eğer ayrı bir tavada su ekleyerek sağlar.
10. Kafes düzenli olarak veya aktarma tarafından 2-3 haftada bir temiz kafes Hamamböceklerine tıslama kuru dışkı scooping tarafından temiz. Kafesin dibinde kuru tutun. Aşırı su birikir ve kafesin dibinde dışkı ile karıştırın izni varsa kafes hemen temizle.

3. Hamam böceği hazırlık deneme için

1. Bir kafeste Tıslayan hamamböceği uygun sayıda 37 ° C oksijen kuluçka 1 ila 3 hafta önce deney calıştıkları aktarın. Enjeksiyon için denetim grubu içerir. Bu calıştıkları dönem deneme sırasında sıcaklık şok kaçınmak için önemlidir.
2. Vazelin jöle daha yüksek sıcaklık erir çünkü 37 ° C için mukadder kafesleri için geçerli değildir.
3. Tıslayan hamamböceği her 1-2 gün gıda ve su yerine ve kafes temizlemek için kontrol edin.
4. Açık tek kullanımlık plastik saklama kapları Tıslayan hamamböceği deneme sırasında gruplandırma için kapakları ile elde edilir. Havalandırma için kapağı veya kapsayıcı bir çivi ile tarafında delikler ve çekiç.
   Not: Kullanım vidalı kapak konteyner üzerinde ek Biyogüvenlik seviye 3 ayarı kaplarda kap. Snap kap kapsayıcılar kasetle, gerekirse takviye.
5. Enjeksiyon gününde, 6-12 acclimatized Tıslayan hamamböceği konteyner, başına seks tarafından eşit dağıtım sağlanması gruplara dağıtabilir ve kitle vücut.
6. Bireysel Tıslayan hamamböceği cinsiyetini belirlemek. Erkek ve kadın bunların eksikliği bulunan boynuzları çıkıntı tarafından seks belirler.
7. Bireysel Tıslayan hamamböceği tartın. Tıslayan hamamböceği denge üzerinde ağırlığında kolaylaştırmak için şeytan iki tartmak tekne içinde alın.
   Not: deneyler arasında tutarlılık sağlamak için 4-8 g ağırlığıyla Tıslayan hamamböceği kullanın. Ancak, enfeksiyon sonra hayatta kalma hiçbir fark bulundu (1,5-2 g) küçük ve büyük (6-8 g) Tıslayan hamamböceği arasında. İlaç araştırmaları için Tıslayan hamamböceği ~ 5 g bir ağırlık ile vücut başına daha tutarlı bir ilaç konsantrasyonu elde etmek için kullanmak kitle.
8. Bir su yemek yerine, yüksek su içeriği meyve veya bir dilim elma ya da patates gibi sebzeler içerir. Çürük yiyecek atmak. Konteyner kuru tutmak için ek su sağlar.
9. Tıslayan hamamböceği 37 ° C'ye kadar enjeksiyonları dönün.

4. bakteri kültürü ve hazırlıkları

Not: Bu protokol için kullanılan bakteriyel türdür B. mallei, B. pseudomallei ve B. thailandensis. Sınıf III biyolojik Emanet dolapları bir biyogüvenlik düzeyi (BSL) yer alan 3 laboratuvar veya B. mallei ve B. pseudomallei ile tüm manipülasyonlar sınıf II içinde gerçekleştirilmesi gerekir. Uygulamaları gerçekleştirin B. thailandensis benzer biyolojik güvenlik ile dolapları ya BSL2 ya da BSL3 laboratuar bulunmaktadır. BSL3 iş için kurumsal standart işletim prosedürü izleyin. Bakteri işlerken kişisel koruyucu ekipman kullanım için kurumsal yönergeleri izleyin.

1. En az 3 gün önce enfeksiyon Burkholderia ana bir tabak hazırla. Luria-Bertani (Lennox) (LB) kullanın agar B. pseudomallei veya B. thailandensis ve kullanım LB agar B. malleiiçin % 4 gliserol ile desteklenmiştir. -80 ° C'de depolanan bir % 25 gliserol hisse senedi bakterilerden çizgi
   Not: Her zaman doğrudan donmuş gliserol stoktan ana plaka çizgi; bakteri seri geçişini önlemek dan plaka için plaka bu azaltılmış virülans neden olabilir gibi.
2. 10-20 mL LB suyu B. thailandensis B. pseudomallei ve sömürgeler ana plaka ile aşılamak. Benzer şekilde B. malleiiçin % 4 gliserol ile desteklenmiş LB suyu aşılamak.
3. 175-250 devirde 37 ° c ~ 18 h için suyu kültür sallamak.
4. 2-3 mL 5000 x g 10 dk de kültürünün santrifüj kapasitesi.
5. Süpernatant atın ve bakteriyel Pelet steril fosfat tamponlu tuz (PBS, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na₂PO₄, 1.8 mM KH₂PO₄, pH 7,4) resuspend.
6. Ölçü vasıl 600 bir Absorbans 0,5, optik bir yoğunluğu (OD) sağlamak için PBS ile bakteri seyreltik bir Spektrofotometre nm.
7. Seri olarak bakteri panolarında içinde PBS üzerinden başlangıç OD 0,5 oranında seyreltin. Bu süspansiyonlar enfeksiyon için kullanın.
8. Birim inoculum (CFU) tarafından seri seyreltme şekillendirme ve 100 µL aliquots agar medya, kaplama koloni belirlemek. Plakalar için 24-48 h 37 ° C'de kuluçkaya.

5. uyuşturucu hazırlıkları

1. Uyuşturucu vücut verilecek uygun miktarını belirlemek kitle. Tıslayan hamamböceği verilen CLQ doz 50 mg/kg olan standart doz memeliler, dayanıyordu/gün.
2. Resuspend veya araç ilgi uyuşturucu oranında seyreltin. Örneğin, PBS CLQ 12 mg/mL konsantrasyonu oranında seyreltin. Bu konsantrasyon ilaç cilt 25 µL hamamböceği enjekte tıslama ~ 6 g için 300 µg sağlar.
3. Gerekirse, uyuşturucu çözüm 0,22 µm şırınga filtreden geçirilerek sterilize.
4. 4 ° C'de uyuşturucu çözüm kullanmak kadar saklamak. Uyuşturucu çözüm en az 21 ° c (oda sıcaklığında) enjeksiyonları önce sıcak.

6. enjektör montajı

1. İşaretçiyi istediğiniz birime (25 µL) ayarı vida tekrarlayan bir pipet üzerinde döndürerek ayarlayın.
2. Tekrarlayan pipet yayın bar içe doğru itin ve itici dışa doğru çekin. Tekrarlayan pipet şimdi dolu bir şırınga karşılamak hazırdır.
   Not: bir denge üzerinde atılır su miktarını ölçerek tekrarlayan pipet tarafından atılır birim kalibre.
3. 1 mL şırınga ya bakteri ya da uyuşturucu içeren süspansiyon ile doldurun.
4. Şırınga steril bir 26 veya 27 G ½ inç x (veya daha kısa) iğne ekleyin.
5. Hava kabarcıkları üst şamandıra ve % 10 çamaşır suyu ile dolu bir kap içine baloncuklar ve bazı süspansiyon çıkarmak için şırınga dokunun.
6. Yukarı dönük olacak şekilde iğne eğim ile şırınga tekrarlayan pipet şırınga klibin üzerine oturtun.
7. Yayın çubuğunu dışa doğru çekin ve sıkıca şırınga pistonu itici karşı gelene kadar % 10 çamaşır suyu ile dolu bir kap içine boş enjeksiyonları gerçekleştirmek için dağıtıcı düğmesine basın.
8. Sıvı şırınga dışarı atılır sağlamak için 1 veya 2 ek boş enjeksiyonları gerçekleştirin. Tekrarlayan pipet enjeksiyonlar için hazırdır.

7. Hamam böceği enjeksiyonları

1. Sınıf II ve sınıf III biyolojik Emanet bir BSL2 kabin tüm hamamböceği enjeksiyonları gerçekleştirmek veya BSL3 ayarı kurumsal kullanarak kişisel koruyucu ekipman önerilir.
2. Tıslayan hamamböceği ile temas gelebilir temiz çalışma yüzeyleri kabin emniyet. % 10 çamaşır suyu % 70 etanol tarafından takip artık çamaşır suyu kaldırmak için kullanın. Hava yüzey kuru izin.
3. Bir elinizle Tıslayan hamamböceği onun yanında tut. Öyle ki enjeksiyon sırasında geri tepme değiştiremiyor Tıslayan hamamböceği hareketsiz. Böylece karın terga arasında Kutanöz membranlar maruz Tıslayan hamamböceği biraz kır.
4. İğne bir 0 ° 30 ° açı Tıslayan hamamböceği dorso-ventral orta hat öyle ki diğer elini de tekrarlayan pipet tutun. Kutanöz membran 3^rd, 4^thveya 5^inci tergum posterior ucundan yanındaki delik.
   Not: Giriş belirtilen açıda Tıslayan hamamböceği içine iğne iğne geçmesi değil ve Tıslayan hamamböceği dışarı çıkmak sağlar. Enjeksiyon yeri çkarlyor malzeme hemolymph ile dolu karın boşluğu içinde bulunur sağlar. Tıslayan hamamböceği holding ve girişim iğneleri canlı bakteri ya da ilaç ile önce su ile enjekte uygulama.
5. Sıkıca birimi enjekte için besleme butonuna basın. Yavaşça olarak kullanılan aynı açıda iğne giriş için geri alıyorum.
6. Değil henüz enjekte etmiş Tıslayan hamamböceği ayırmak için bir yer ayrı bir kapta enjekte Tıslayan hamamböceği. Dışarı enjeksiyon sitesinden oozed herhangi bir hemolymph yok etmek.
7. Aynı şırınga ve iğne kullanarak bir grup içindeki diğer Tıslayan hamamböceği enjekte devam edin. Şırınga pistonu eksik son enjeksiyon dozaj önlemek için varil dibinde ulaşmadan önce enjekte durdurmak.
8. Bakteri ve uyuşturucu, olanlar gibi tek bir Tıslayan hamamböceği içinde birden çok enjeksiyonlar için farklı bir tergum Tıslayan hamamböceği dorsal tarafta kenarlarında enjekte. Alternatif olarak, birden çok enjeksiyonları farklı terga (3^rd 5^inciiçin) adlı enjekte edilerek gerçekleştirin.
9. Konteyner kapağı güvenli bir şekilde sabitlenmiş emin olun. Teyp, kapaklı gerekirse güçlendirmek.
10. Hamamböceği oksijen 37 ° C kuluçka tıslama kuluçkaya.

8. kayıt hamamböceği morbidite ve mortalite tıslama

1. Tüm Tıslayan hamamböceği sınavları sınıf II ve sınıf III biyolojik güvenlik ile kurumsal kabin kişisel koruyucu ekipman önerilen gerçekleştirin. Emniyet dolap yüzeyleri % 70 etanol tarafından takip % 10 çamaşır suyu ile temizleyin. Hava için çalışma alanını kuru izin.
2. Tıslayan hamamböceği bir veya iki kez 1-2 hafta tablo (Tablo 1) puanlama morbidite kullanarak günlük bir süre içinde puan.
3. Ölü Tıslayan hamamböceği kapsayıcıdan kaldır ve ölüm kaydedin.
4. Aşırı nem konteyner alt kısmında birikmiş Eğer temiz bir kapsayıcı Hamamböceklerine tıslama canlı kalan aktarın. Alternatif olarak, tek kullanımlık kağıt havlu aşırı nem silmek için kullanın.
5. Çürük yiyecek günlük ve dönüş oksijen 37 ° C kuluçka Hamamböceklerine tıslama değiştirin.
6. Çalışma sonunda kalan kurtulan bir biohazard torbaya koyun ve ötenazi yapmak-80 ° C'de dondurmak.
7. LD₅₀ belirlemek için veri¹⁴ istatistiksel analiz ve hayatta kalmak için Kaplan-Meier ve günlük sırası analizi tarafından. Tüm böcek deneme gibi bazı ölümler kontrol grubunda oluşabilir. Bu ölümlerin böcekler ¹⁵doğal ölüm atfedilen. Daha ayrıntılı bilgi için nasıl hesabına ölümlerinin kontrol grubunda, başvuru¹⁵bakın.

Sonuçlar

Bu bölümde Madagaskar Tıslayan hamamböceği B. mallei, B. pseudomallei, veya B. thailandensisile enfekte elde sonuçları göstermektedir; sonuçlar virülans, ilaç toksisitesi ve uyuşturucu etkinliği bakteriyel enfeksiyona karşı okumak bu böcek Burkholderia farklı türler için uysal bir hayvan modeli olduğunu gösterir. Daha fazla Tıslayan hamamböceği hayatta zayıflatılmış mutantlarla (Δhcp1) ile wildtype B. pseudomallei K...

Tartışmalar

En iyi deneysel koşullar tutarlı süre taahhüdü ama en az gerektiren bir sağlıklı Tıslayan hamamböceği koloni başlayın. Hamamböceği tıslama oldukça uzun bir süre için gidebilirsiniz, ancak (~ hafta) yiyecek ve su, haftalık veya iki haftalık kafes bakım sağlanmalıdır. Bu yiyecek ve su kaynağı kontrol ve kafes kurudur sağlanması içerir. Kuru yaşam koşulları Bakımı calıştıkları ve daha yüksek sıcaklıklarda kuluçka sırasında özellikle önemlidir; Biz daha Tıslayan hamamböceği ?...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Madagascar hissing cockroach	Carolina Biological Supply Co, Burlington, NC	143668
Kibbles n Bits, any flavor	Big Heart Pet Brands, San Francisco, CA	UPC #079100519378
Snap on disposable plastic containers or equivalent	Rubbermaid, Huntersville, NC	UPC #FG7F71RETCHIL
Screw on disposable plastic containers or equivalent	Rubbermaid, Huntersville, NC	UPC #FG7J0000TCHIL
Tridak STEPPER series repetitive pipette	Dymax Corporation www.dymax.com	T15469
Syringe (1 mL)	Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ	309659
Needle (26 or 27G x 1/2)	Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ	305109, 305111
Chloroquine diphosphate	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	C6628
Phosphate buffered saline	Gibco/ Thermo Fisher Scientific, Gaithersburg, MD	10010023
Difco Luria- Bertani (Lennox)	Becton Dickinson, Sparks, MD	240230
Agar	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	A1296
Glycerol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	G6279