마다 가스 카 르 독성, 병 인, 및 약물 효능을 조사 하기 위해 대체 비 포유류 동물 모델로 서 치찰음의 바퀴벌레

요약

우리는 세균 독성, 병 인, 약물 독성, 약물 효능, 그리고 타고 난 면역 반응 연구를 수행 하는 대체 비 포유류 동물 모델으로 치찰음의 바퀴벌레는 마다가스카르를 활용 하는 프로토콜 제시.

초록

타고 난 면제의 여러 측면은 포유류와 곤충 사이 보존 됩니다. 곤충, 치찰음의 바퀴벌레 속 Gromphadorhina 에서 마다가스카르의 독성, 호스트 병원 체 상호 작용, 타고 난 면역 반응 및 약물 효능 연구에 대 한 대체 동물 모델로 활용할 수 있습니다. 양육에 대 한 세부 정보, 관리 및 쉿 하는 바퀴벌레의 번 식 제공 됩니다. 우리는 또한 그것 Burkholderia mallei, B. pseudomallei, 및 B. thailandensis세포내 병원 체과 같은 박테리아로 감염 될 수 있는 어떻게 보여 줍니다. 쉿 하는 바퀴벌레의 사용은 저렴 하 고 포유류 연구를 사용 하 여 처리 하는 규제 문제를 극복. 또한, 쉿 하는 바퀴벌레 모델을 사용 하 여 찾은 결과 재현할 수 있으며 포유류 모델을 사용 하 여 얻은 비슷합니다. 따라서, 마다가스카르 쉿 바퀴벌레 동물 연구를 할 때 탐구 해야 하는 매력적인 대리 호스트를 나타냅니다.

서문

세균 병 인 타고 난 호스트 방어를 공부 하 고 대체 비 포유류 동물 모델으로 곤충의 사용 최근 몇 년 동안에 추진력을 얻고 있다. 물류, 이것은 그들의 상대적으로 저렴 한 비용 및 획득, 처리, 및 포유류에 비해 곤충에 대 한 배려에 용이성 때문. 또한 연구에 있는 곤충의 사용 규제 정책이 있다 그것은 범위에 따라 또는 제한이 어떤 동물에 의해 규정 된 설정 위원회 또는 정부 기관에 사용. 대리 동물 모델으로 곤충 특히 독성 요인, 호스트 병원 체 상호 작용 및 항균 약물 효능 평가 대 한 종합 심사 연구 의무가 있습니다. 그들의 사용은 그로 인하여 일부 동물 실험 ^1,2의 행위에 내재 된 윤리적 딜레마를 극복 하는 연구에 사용 하는 포유류의 수를 줄일 수 있습니다.

곤충 곤충과 포유류 ^1,3의 타고 난 면역 체계 사이 공용성의 높은 학위 때문에 대리 호스트 될 수 있습니다. Plasmatocytes 곤충 및 포유류 세포 phagocytose 미생물 ⁴. neutrophil에 곤충 대응 hemocyte ^5,6입니다. 곤충과 포유류 세포에서 세포내 산화 파열 경로 비슷합니다; 둘 다에서 반응성 산소 종 orthologous p47^phox 와 p67^phox 단백질 ⁵에 의해 생산 됩니다. 곤충 및 수용 체 통행세 같이 수용 체 통행세와 포유류에서 Interleukin-1 신호 계곡 하류는 또한 비슷해; 둘 다 defensins ⁷등 항균 성 펩 티 드의 생산 귀 착될. 따라서, 곤충 연구 metazoans에 의해 공유 되는 일반적인 타고 난 면역 메커니즘을 활용할 수 있습니다.

치찰음의 바퀴벌레 속 Gromphadorhina 에서 마다가스카르 라는 곤충 존재, 일반적으로 만기에 5 ~ 8 cm를 도달 하는 가장 큰 바퀴벌레 종 중 하나입니다. 마다가스카르의 섬에만 기본 이며 그것은-쉿 소리 쉿 하는 바퀴벌레 spiracles ⁸라는 호흡 구멍을 통해 공기를 추방 하는 때 생산 되는 소리가 특징 이다. 독특한 엘리베이터 치찰음의 바퀴벌레 구애와 침략 ⁹ 간의 사회적 커뮤니케이션의 한 형태로 제공 하 고 남성은 그것의 서식 지에서 방해 하는 때 들릴 수 있다. 마다가스카르 쉿 하는 바퀴벌레는 미국 바퀴벌레 및 다른 도시 해충 종에 비해 느린 이동입니다. 그것은 쉽게에 대 한 관심과 사육; 임신 치찰음의 바퀴벌레는 한 번에 20 ~ 30 자손을 생산할 수 있다. 치찰음의 바퀴벌레, 요정, 라는 도달 성적인 성숙에 5 개월 아기 후 6 molts를 진행 하 고 야생에서와 포로 ⁸에서 5 년까지 살 수.

우리 Burkholderia mallei, B. pseudomallei, 세포내 병원 체 감염 및 B. thailandensis ^10,11. 에 대 한 대리 호스트 치찰음의 바퀴벌레는 마다가스카르 활용 치찰음의 바퀴벌레에이 균의 독성은 Burkholderia, 시리아 햄스터에 대 한 벤치 마크 동물 모델에서 그들의 독성에 비교 되었다. 우리는 50% 치 사 량 (LD₅₀) B. pseudomallei 의 B. mallei 두 모델 ¹¹에서 유사 했다 발견. 흥미롭게도, B. thailandensis, 설치류 모델에서 avirulent는 치찰음 바퀴벌레 ¹¹치명적인입니다. B. thailandensis 감염에 관하여이 차이 밑줄, 치찰음 바퀴벌레 모델의 유틸리티 B. thailandensis 돌연변이 약하게 설치류 모델에서 보다 치찰음 바퀴벌레에 더 쉽게 해결할 수 있습니다. 또한, B. thailandensis 로 자주 사용으로 B. pseudomallei 와 B. mallei ^10,12,13, 그것에 약하게 돌연변이 식별에 대 한 모델 유기 체 수 있습니다. 악성의 친척에 비슷한 대상으로 이어질.

시리아 햄스터에 비해 치찰음 바퀴벌레에 B. thailandensis 의 독성에 차이, 돌연변이 유형 6 분 비 시스템-1 (T6SS-1), 그와 같은 중요 한 독성 요인에도 불구 하 고는 B. mallei 에 약하게 되 고 B. pseudomallei, 있다 마찬가지로 B. thailandensis ¹¹약하게. 쉿 하는 바퀴벌레 모델 개별 T6SS 돌연변이 (T6SS-T6SS-6 2) B. pseudomallei에 시리아 햄스터에 독성에 아무런 베어링을가지고, 치찰음 바퀴벌레 ¹¹악성 유지에 더 유효성이 검사 됩니다. 따라서, 쉿 하는 바퀴벌레 세 Burkholderia 종에 대 한 실행 가능한 대리 동물 모델 이다. 우리는 최근 Burkholderia 감염 ¹⁰ 과 그 독성에 대 한 안티 말라리아 약물 클로로퀸 (CLQ)의 효능을 검사 하는 서로게이트 동물 모델으로 쉿 하는 바퀴벌레를 활용.

여기, 우리가 설명 양육 그리고 배려는 마다가스카르의 치찰음의 바퀴벌레와 3 Burkholderia 종 가진이 곤충을 감염 하는 방법에 정보를 제공. 또한, 우리는 쉿 하는 바퀴벌레는 공부 독성 및 약물 효능 Burkholderia 감염에는 그것은 가능성이 될 수 있습니다 또한 비슷한 연구에서 다른 세균성 병원 체에 대 한 대리 호스트 실행 가능한 대리 모델을 보여 줍니다.

프로토콜

1. 치찰음 바퀴벌레 식민지를 유지 하기 위한 준비

1. 감 금 소에 살고 치찰음 바퀴벌레에 대 한 준비. 감 금 소에서 등산과 탈출에서 치찰음 바퀴벌레를 방지 하기 위해 감 금 소의 위쪽 내부 벽의 둘레에 석유 젤리, 폭, 약 20 ~ 30 m m의 얇은 레이어를 적용 됩니다.
   참고: 치찰음의 바퀴벌레 다양 한 있는 대형 바닥 공간, 충분 한 높이의 뚜껑 컨테이너에에서 보관 수 있습니다. 마우스 케이지를 사용 하 여 (~ 43 cm x 23 cm x 20 cm). 감 금 소에 대 한 37 ° C에 대 한 운명, 석유 젤리는 적용 되지 않습니다.
2. 자연스럽 게 수 줍 어 곤충에 대 한 숨어있는 장소를 제공 하기 안에 거꾸로 배치 판지 계란 판지 포함. 폴리스 티 렌 거품의 플라스틱의 섭취를 방지 하기 위해 만든 한 골 판지 계란 판지를 대체 하지 않습니다.
3. 쉽게 정리 하 고 새로 부 화 nymphs의 가시성을 높이기에 침구를 제공 하지 않습니다.
4. 건조 한 개밥 ~ 20%의 조 단백질의 구성 포함 된 얻을. 덜 갈기 음식 프로세서 또는 믹서 기 개밥 및 4 ° c.에 저장
5. 여러 가지 얕은 요리 및 수족관 돌 또는 음식과 물에 대 한 스폰지를 얻을.
   참고: 접시는 추천.

2. 치찰음의 바퀴벌레 관리 및 번 식

1. Outbred 마다가스카르 쉿 하는 바퀴벌레 (~ 5 cm)는 상업적인 종 축에서 얻을. 이 프로토콜에서 사용 하는 종 Gromphadorhina laevigata입니다. 수령 즉시 치찰음 바퀴벌레를 포함 하는 배송 상자를 풀으십시오.
2. 동물 처리에 개인 보호 장비의 사용에 대 한 적절 한 제도적 지침을 따릅니다.
   참고: 치찰음의 바퀴벌레의 tarsal 발톱 날카로운로 바퀴벌레를 처리 하기 위한 두꺼운 일회용 장갑을 사용 합니다.
3. 최대 75 큰 치찰음 바퀴벌레를 전송 (> 3 cm) 큰 감 금 소 당. 새롭게 부 화 하 고 작은 nymphs 전송 (< 3 cm) 별도 감 금 소에.
   참고: 유지 75 보다 훨씬 더 큰 치찰음의 바퀴벌레 마우스 케이지 당 식민지의 건강 악화으로 이어질 수 및 또한 죽음 귀 착될 수 있었다.
4. 부드럽게 컬러로, 하얀은 새로 molted 바퀴벌레를 처리 하 고 그것을 당기고 피하십시오. 또는, 어둡게 하 고 처리 하기 전에 강화 외 골격을 하실 수 있습니다.
   참고: 그것는 진드기, Gromphadorholaelaps schaeferi 를 종종 종 축에서 수령 시 치찰음 바퀴벌레를 제거할 필요가 없습니다. 도움이 진드기 쉿 하는 바퀴벌레를 청결 한 유지 하 고 인 간에 게 무해 하다.
5. 치찰음 바퀴벌레 먹이 지상 건조 한 개밥 얕은 접시에 일주일에 한 두 번. 쉿 하는 바퀴벌레는 충분 한 음식을 사용 하 여 다음 수 유까지 되도록 충분 한 개밥을 제공 합니다. 우기와 썩 되는 어떤 음식을 삭제 합니다.
6. 개 음식 뿐만 아니라 컷-업 과일, 야채, 사과, 감자, 또는 얕은 접시에 상 추 등을 제공 합니다. 폐기 썩 또는 썩은 음식.
7. 얕은 접시에 일주일에 한 두 번 식용 수를 제공 하지만 장에 흘림을 방지 하기 위해 접시 연극 하지 마십시오. 작은 님프에 대 한 상륙 패드를 제공 하기 위해 접시에 작은 수족관 돌 또는 스폰지를 놓습니다. 역삼 투 물를 사용 하 여 사용 가능한 경우.
8. 온도 21 ° C에서 30 ° c.에 배열에서 어둠 속에서 바퀴벌레 치찰음 유지 계속 큰 치찰음 바퀴벌레 번 식와 임신 ~ 2 개월 (~ 21 ° C) 낮은 온도에서 실험에 대 한 운명. 반면, 성장을 촉진 하 더 높은 온도 (28 ° C ~ 30 ° C)에서 님프를 유지.
   참고: 캐비닛 실내 온도 (21 ° C)는 어둠 속에 감 금 소를 유지.
9. 치찰음의 바퀴벌레는 인큐베이터에 보관 하는 경우 물 별도 팬을 포함 하 여 습도 제공 합니다.
10. 정기적으로 또는 전송 하 여 치찰음 바퀴벌레 깨끗 한 케이지를 2 ~ 3 주마다 건조 배설물 밖으로 떠 서 여 감 금 소를 청소. 감 금 소의 바닥 건조 유지. 과잉의 물을 축적 하는 감 금 소의 바닥에 배설물과 혼합 수 있다면 즉시 케이지 청소.

3. 바퀴벌레 실험에 대 한 준비

1. 적절 한 수 장에 치찰음 바퀴벌레의 전송 37 ° C 습도 인큐베이터 새 환경 순응 실험에 앞서 1 ~ 3 주. 주입에 대 한 컨트롤 그룹을 포함 합니다. 이 새 환경 순응 기간 실험 동안 온도 충격을 피하기 위해 중요 하다.
2. 석유 젤리 케이지 때문에 높은 온도 녹아 젤리 37 ° C에 대 한 운명에 적용 되지 않습니다.
3. 확인 치찰음 바퀴벌레 1 ~ 2 일 마다 음식과 물을 대체 하 고 감 금 소를 청소.
4. 분명 일회용 플라스틱 음식 용기 실험 동안 쉿 하는 바퀴벌레를 그룹화 하는 데 뚜껑을 얻을. 환기, 뚜껑 또는 못을 가진 컨테이너의 측면에 구멍을 펀치와 망치.
   참고: 스냅인을 통해 사용 나사 뚜껑 컨테이너 컨테이너 biosafety 수준 3 설정에서 모자. 필요한 경우 테이프, 스냅 캡 용기를 강화 수 있습니다.
5. 주입의 하루에 6 ~ 12 acclimatized 치찰음 바퀴벌레 섹스에 의해 동등 하 게 분배 되도록 하는 컨테이너, 당 그룹으로 고 신체 질량.
6. 개별 치찰음 바퀴벌레의 섹스를 확인 합니다. 남성과 여성에 그 부족에 뿔의 굴지에 의해 섹스를 확인 합니다.
7. 개별 치찰음 바퀴벌레 무게. 촉진 하기 위해 균형에 치찰음 바퀴벌레의 무게, tared 된 두 무게 보트 내에서 묶습니다.
   참고: 실험 간의 일관성을 위해 4-8 g의 무게로 치찰음의 바퀴벌레를 사용 합니다. 그러나, 감염 후 생존에 차이가 작은 (1.5 ~ 2 g), 대형 (6-8 g) 치찰음 바퀴벌레 사이 발견 되었습니다. 약물 연구를 사용 하 여 치찰음 바퀴벌레 ~ 5 g의 무게와 몸 당 보다 일관성 있는 약물 농도 대량.
8. 물 접시 대신 높은 물 콘텐츠 과일 또는 야채, 사과 또는 감자의 조각 등을 포함 합니다. 썩은 음식을 삭제 합니다. 컨테이너를 건조 유지에 추가 물을 제공 하지 않습니다.
9. 주사까지 37 ° C에 치찰음의 바퀴벌레를 반환 합니다.

4. 세균성 문화 및 준비

참고: 세균성 종이이 프로토콜에 사용 되는 B. mallei, B. pseudomallei, 및 B. thailandensis. B. mallei 와 B. pseudomallei 모든 조작 클래스 II에서 수행 해야 합니다 또는 클래스 III 생물 안전 캐비닛 biosafety 수준 (BSL)에 3 실험실. 조작을 수행 B. thailandensis 비슷한 생물 안전 캐비닛 BSL2 또는 BSL3 실험실에 위치. BSL3 작업에 대 한 기관 표준 운영 절차를 따릅니다. 박테리아를 처리할 때 개인 보호 장비의 사용에 대 한 제도적 지침을 따릅니다.

1. 최소 3 일 전에 감염 Burkholderia 의 마스터 플레이트를 준비 합니다. Luria Bertani (레 녹 스) (파운드)를 사용 하 여 B. pseudomallei 또는 B. thailandensis agar 및 사용 파운드 agar 4% 글리세롤 B. mallei에 대 한 보충. 저장-80 ° c.에 25% 글리세롤 재고에서 행진 박테리아
   참고: 항상 냉동된 글리세롤 주식;에서 직접 마스터 플레이트를 행진 직렬 통과 하는 박테리아의 피할 에서 플레이트에 플레이트가 감소 된 독성을 발생할 수 있습니다.
2. 10 ~ 20 mL 파운드 국물 마스터 플레이트에서 B. pseudomallei 또는 B. thailandensis 의 여러 식민지와 예방 마찬가지로 파운드 국물 B. mallei에 대 한 4% 글리세롤과 보충 접종.
3. ~ 18 h 37 ° C에서 175 ~ 250 rpm 국물 문화를 흔들어.
4. 10 분 동안 5000 x g에서 문화 2 ~ 3 mL 원심
5. 삭제는 상쾌한 고 버퍼링 멸 균 인산 염 (PBS, 137 mM NaCl, 2.7 m m KCl, 10mm 나₂포₄, 1.8 m m KH₂포₄, pH 7.4)에 세균 펠 릿 resuspend.
6. 0.5, 600에서 흡 광도 측정에의 한 광학 밀도 (OD)를 달성 하기 위해 PBS 가진 박테리아를 희석 한 분 광 광도 계에 nm.
7. 순차적으로 희석 박테리아 0.5의 시작 마약에서 ten-fold에 PBS. 이러한 정지를 사용 하 여 감염에 대 한.
8. 식민지는 inoculum 단위의 (CFU) 직렬 희석에 의해 형성 하 고 agar 미디어에 100 µ L aliquots의 도금을 결정 합니다. 24 ~ 48 h에 대 한 37 ° C에서 접시를 품 어.

5. 약 준비

1. 체 당 주어진 약물의 적절 한 금액을 결정 질량. 쉿 하는 바퀴벌레에 게 주어진 CLQ 복용량은 50 mg/kg, 포유류에 대 한 표준 복용량에 근거 했다/일.
2. Resuspend 또는 차량에 대 한 관심의 약물을 희석. 예를 들어 12 mg/mL의 농도에서 CLQ PBS에 희석. 이 농도의 치찰음의 바퀴벌레 25 µ L에서 주입 볼륨 ~ 6 g을 약 300 µ g를 제공 합니다.
3. 필요한 경우, 0.22 μ m 주사기 필터를 통해 그것을 전달 하 여 약물 솔루션을 소독.
4. 사용 될 때까지 4 ° C에서 약 솔루션을 저장 합니다. 적어도 21 ° c (실내 온도) 주사 전에 약물 솔루션 따뜻한.

6입니다. 인젝터의 조립

1. 반복적인 피 펫에 조정 나사를 회전 하 여 원하는 볼륨 (25 µ L)에 대 한 포인터를 설정 합니다.
2. 푸 셔를 바깥쪽으로 당겨 하 고 반복적인 피 펫의 릴리스 바를 안쪽으로 밀어. 반복적인 피 펫 이제 로드 주사기를 수용할 준비가 되어 있습니다.
   참고: 보정 볼륨 균형에 배출 하는 물의 양을 측정 하 여 반복적인 피 펫으로 나옵니다.
3. 박테리아 또는 약물을 포함 하는 서 스 펜 션에 1 mL 주사기를 채우십시오.
4. 살 균 26에 주사기를 연결 또는 27 G x ½ 인치 (또는 더 짧은) 바늘.
5. 상단에 기포를 플 로트 하 여 10% 표 백제로 채워진 콘테이너로 거품 및 일부 정지 추방 주사기를 누릅니다.
6. 향하도록 바늘 경사와 반복적인 피 펫의 주사기 클립에 주사기를 스냅 합니다.
7. 릴리스 바 바깥쪽으로 당겨 고 빈 주사 주사기 플런저는 미는 사람에 대 한 때까지 10% 표 백제로 채워진 콘테이너로 수행을 단단히 디스펜서 버튼을 눌러
8. 액체 주사기에서 배출 되는 보장 하기 위해 추가 빈 주사 1 또는 2 수행 합니다. 반복적인 피 펫은 주사에 대 한 준비.

7. 바퀴벌레 주사

1. 클래스 II 또는 클래스 III 생물 안전 캐비닛에 BSL2에서에서 모든 바퀴벌레 주사를 수행 하거나 권장 BSL3 설정을 사용 하 여 기관 개인 보호 장비.
2. 깨끗 한 작업 표면은 안전 캐비닛에 쉿 하는 바퀴벌레와 접촉 하 여 올 수 있습니다. 뒤에 70% 에탄올 10% 표 백제를 사용 하 여 잔여 표 백제를 제거. 건조 공기를 표면을 수 있습니다.
3. 한 손으로, 그것의 측면에 의해 치찰음의 바퀴벌레를 잡습니다. 되도록 주입 중 반동 수 치찰음 바퀴벌레를 고정 하 고 구부려 치찰음 바퀴벌레 약간 그래서 복 부 terga 사이 피부 막 노출 됩니다.
4. 다른 한편으로는, 되도록 바늘 0 °에 30 ° 각도로 쉿 하는 바퀴벌레의 dorso 복 부 중간에서 반복적인 피 펫 붙. 찔린 피부 막 후부 끝에서 3^rd, 4^번째또는 5^번째 tergum에 인접 한 합니다.
   참고: 항목 표시 각도에서 치찰음 바퀴벌레에 바늘의 바늘 않습니다 하지 통과 하 고 쉿 하는 바퀴벌레를 종료할 보장 합니다. 사출 사이트 꺼낸된 소재 hemolymph 채워진 복 부 구멍 안에 포함 된 보장 합니다. 쉿 하는 바퀴벌레를 들고 사업 라이브 박테리아 또는 약물 주입 하기 전에 물으로 주입 연습.
5. 디스 펜스 버튼 볼륨을 주입을 단단히 밀어. 부드럽게 항목에 대 한 사용으로 같은 각도로 바늘을 철회 한다.
6. 주입 하지 아직 치찰음 바퀴벌레에서 그것을 구별 하는 별도 용기에 주입된 치찰음 바퀴벌레를 놓습니다. 주사 사이트에서 분출 할 수 있습니다 어떤 hemolymph를 닦아내십시오.
7. 계속 같은 주사기와 바늘을 사용 하 여 그룹 내에서 다른 치찰음 바퀴벌레를 주입 합니다. 주입 주사기 플런저 마지막 주입에 불완전 한 주입을 방지 하기 위해 배럴의 바닥에 도달 하기 전에 중지 합니다.
8. 여러 주사 약, 박테리아와 같은 단일 치찰음 바퀴벌레에 대 한 쉿 하는 바퀴벌레의 등 쪽 측에 tergum의 다른 측면에서 주사. 또는, 다른 terga (3 5^일을^rd )에 주입 하 여 여러 주사를 수행 합니다.
9. 컨테이너의 뚜껑은 단단히 고정 되어 있는지 확인 합니다. 필요한 경우 테이프, 뚜껑을 강화.
10. 치찰음의 바퀴벌레 습도 37 ° C 배양 기에서 품 어.

8입니다. 녹화 치찰음의 바퀴벌레 병 적 상태와 사망률

1. 개인 보호 장비를 권장 클래스 III 또는 클래스 II 생물 안전 캐비닛 기관에서 모든 치찰음 바퀴벌레 검사를 수행 합니다. 뒤에 70% 에탄올 10% 표 백제와 함께 안전 캐비닛에 표면 청소. 작업 영역 공기를 건조 하실 수 있습니다.
2. 점수 표 (표 1) 사망률을 사용 하 여 1 ~ 2 주 동안 매일 치찰음 바퀴벌레 번 점수.
3. 컨테이너에서 죽은 쉿 하는 바퀴벌레를 제거 하 고 생존자의 수를 기록.
4. 컨테이너의 하단에 과도 일 분 축적 하는 경우 깨끗 한 컨테이너에 바퀴벌레 치찰음 라이브 남은 전송. 또는, 일회용 종이 수건을 사용 하 여 과도 일 분을 닦아.
5. 썩은 음식 매일 반환 치찰음의 바퀴벌레 습도 37 ° C 배양 기를 교체 합니다.
6. 연구의 끝에, 나머지 생존자 biohazard 가방에 놓고 안락사에-80 ℃에서 동결 합니다.
7. 통계적으로 분석 데이터¹⁴ l D₅₀ 를 결정 하 고 생존을 위한 카 플 란-마이어와 로그-순위 분석. 모든 곤충 실험과 마찬가지로 일부 사망자의 제어 그룹에서 발생할 수 있습니다. 이 죽음은 곤충 ¹⁵의 자연 사망률 때문 이라고. 컨트롤 그룹에서 죽음에 대 한 계정 하는 방법에 더 자세한 내용은, 참조¹⁵참조.

결과

이 섹션에서는 마다가스카르 쉿 바퀴벌레 했다 또는 감염 된 B. mallei, B. pseudomallei B. thailandensis; 때 가져온 결과 결과이 곤충 독성, 약물 독성, 그리고 세균 감염에 대 한 약물 효능을 공부에서 Burkholderia 의 다른 종족에 대 한 온순한 동물 모델 임을 보여준다. 더 쉿 바퀴벌레 감쇠 돌연변이 (Δhcp1) 보다 그룹 wildtype B. pseudomallei K96243, 부모의

토론

최적의 실험 조건 일관 된 시간 약속 하지만 최소한의 요구 하는 건강 한 치찰음 바퀴벌레 식민지로 시작 합니다. 치찰음의 바퀴벌레 시간의 비교적 긴 기간에 대 한 갈 수 있지만 (~ 주) 음식과 물 없이 매주 또는 격주 케이지 유지 보수를 제공 해야 합니다. 음식과 물 공급을 확인 하 고 보장 그는 케이지 건조 포함 됩니다. 건조 생활 상태를 유지 하는 특히 중요 한 새 환경 순응 및 높은 온도;에서 ...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Madagascar hissing cockroach	Carolina Biological Supply Co, Burlington, NC	143668
Kibbles n Bits, any flavor	Big Heart Pet Brands, San Francisco, CA	UPC #079100519378
Snap on disposable plastic containers or equivalent	Rubbermaid, Huntersville, NC	UPC #FG7F71RETCHIL
Screw on disposable plastic containers or equivalent	Rubbermaid, Huntersville, NC	UPC #FG7J0000TCHIL
Tridak STEPPER series repetitive pipette	Dymax Corporation www.dymax.com	T15469
Syringe (1 mL)	Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ	309659
Needle (26 or 27G x 1/2)	Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ	305109, 305111
Chloroquine diphosphate	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	C6628
Phosphate buffered saline	Gibco/ Thermo Fisher Scientific, Gaithersburg, MD	10010023
Difco Luria- Bertani (Lennox)	Becton Dickinson, Sparks, MD	240230
Agar	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	A1296
Glycerol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	G6279