Sivrisinek elektroantennografisi için adım adım kılavuz

Özet

Bu makale, hem dişiler hem de erkekler de dahil olmak üzere çeşitli sivrisinek cinslerinde başarılı ve düşük gürültülü elektroantennogramlar için adım adım bir protokolü detaylandırmaktadır.

Özet

Dişi sivrisinekler dünyadaki en ölümcül hayvanlardır ve bir kan unu alırken ilettikleri patojenler nedeniyle her yıl 1 milyondan fazla insanın hayatını iddia etmektedir. Beslenecek bir konakçı bulmak için, sivrisinekler görsel, mekanik, termal ve koku alma dahil olmak üzere çok çeşitli duyusal ipuçlarına güvenirler. Çalışma, araştırmacıların sivrisineklerin bireysel kimyasalları ve kimyasalların karışımlarını konsantrasyona bağlı bir şekilde tespit edip edemeyeceğini değerlendirmelerini sağlayan bir teknik olan elektroantennografiyi (EAG) detaylandırıyor. Gaz kromatografisi (GC-EAG) ile birleştiğinde, bu teknik antenleri tam bir kafa boşluğu / karmaşık karışıma maruz bırakmaya izin verir ve ilgili numunede hangi kimyasalların bulunduğunu sivrisineklerin tespit edebileceğini belirler. Bu, konakçı vücut kokularının yanı sıra bitki çiçek buketleri veya diğer ekolojik olarak ilgili kokular (örneğin, yumurtlama bölgeleri koku vericileri) için de geçerlidir. Burada, uzun süreli hazırlık duyarlılığı süresine izin veren ve Aedes, Culex, Anopheles ve Toxorhynchites sivrisinekleri de dahil olmak üzere birden fazla cinsten hem dişi hem de erkek sivrisineklere uygulanabilir bir protokol tanımladık. Koku alma, sivrisinek-konakçı etkileşimlerinde ve genel olarak sivrisinek biyolojisinde önemli bir rol oynadığından, EAG'ler ve GC-EAG, yeni hastalık vektör kontrol stratejilerinin (örneğin, yemler) geliştirilmesi için ilgi çekici bileşikleri ortaya çıkarabilir. Davranışsal analizlerle tamamlandığında, her kimyasalın değeri (örneğin, çekici, kovucu) belirlenebilir.

Giriş

Sivrisinekler, dünyadaki en ölümcül organizmalardır, yılda bir milyondan fazla insanın hayatını iddia eder ve dünya nüfusunun yarısından fazlasını,^1'i ısırırken, ilettikleri patojenlere maruz kalma riskine sokarlar. Bu böcekler, beslenecek bir konakçı (hem bitki hem de hayvan) bulmak, çiftleşmek ve yumurtlamak ve hem larva hem de yetişkin aşamalarında avcılardan kaçınmak için çok çeşitli ipuçlarına (yani termal, görsel, mekanik, koku alma, işitsel) güvenir ^2,3. Bu duyular arasında, koku alma yukarıda belirtilen davranışlarda, özellikle koku verici moleküllerin orta ila uzun menzilli tespiti için kritik bir rol oynar ^2,3. Bir konakçı veya bir yumurtlama bölgesi tarafından yayılan kokular, sivrisinek palps hortumu, tarsi ve anten^2,3 üzerinde bulunan çeşitli spesifik koku alma reseptörleri (örneğin, GR'ler, OR'lar^, IR'ler) tarafından tespit edilir.

Koku alma, konakçı arama (bitki ve hayvan), çiftleşme ve yumurtlama davranışlarının önemli bir bileşeni olduğundan, sivrisinek kontrolü için yeni araçlar geliştirmek üzere çalışmak için ideal bir hedef oluşturur⁴. Kovucular (örneğin, DEET, IR3535, picaridin) ve yemler (örneğin, BG sentinel insan cazibesi) üzerine yapılan araştırmalar son derece üretkendir⁵, ancak sivrisinek kontrolündeki mevcut zorluklar nedeniyle (örneğin, böcek ilacı direnci, istilacı türler), sivrisinek biyolojisi tarafından bilgilendirilen yeni etkili kontrol yöntemleri geliştirmek esastır.

Sivrisineklerdeki bileşiklerin veya bileşik karışımlarının biyoaktivitesini değerlendirmek için birçok teknik (örneğin, olfaktometre, iniş tahlilleri, elektrofizyoloji) kullanılmıştır. Bunlar arasında, koku vericilerin sivrisinek antenleri tarafından tespit edilip edilmediğini belirlemek için elektroantennografi (veya elektroantennogramlar (EAG'ler)) kullanılabilir. Bu teknik başlangıçta Schneider⁶ tarafından geliştirilmiştir ve o zamandan beri güveler ^7,8,9, bombus arıları ^10,11, bal arıları 12,13 ^{ve meyve} sinekleri^14,15 dahil olmak üzere birçok farklı böcek cinsinde kullanılmıştır. Elektroantennografi ayrıca sivrisineklerde tek veya çoklu antenler de dahil olmak üzere çeşitli protokoller kullanılarak kullanılmıştır 16,17,18,19,20,21,22,23,24,25.

Sivrisinekler oldukça ince antenli nispeten küçük ve hassas böceklerdir. EAG'leri güveler veya bombus arıları gibi daha büyük böcekler üzerinde gerçekleştirmek, daha büyük boyutları ve daha kalın antenleri nedeniyle nispeten kolay olsa da, sivrisineklerde EAG'lerin iletilmesi zor olabilir. Özellikle, iyi bir sinyal-gürültü oranının korunması ve kalıcı bir yanıt hazırlığı, verilerin tekrarlanabilirliği ve güvenilirliği için iki ana gereksinimdir.

Burada önerilen düşük gürültülü EAG'ler için adım adım kılavuz, doğrudan bu sınırlamalara çözümler sunar ve bu protokolü Aedes, Anopheles, Culex ve Toxorhynchites dahil olmak üzere çeşitli cinslerden çeşitli sivrisinek türlerine uygulanabilir hale getirir ve hem dişiler hem de erkekler için tekniği açıklar. Elektroantennografi, davranışsal testlerle değerlik belirlendikten sonra yem gelişiminde kullanılabilecek biyoaktif bileşikleri taramak ve belirlemek için hızlı ama güvenilir bir yol sunar.

Protokol

1. Tuzlu su çözeltisi hazırlama

1. Tuzlu suyu önceden hazırlayın ve buzdolabında saklayın.
2. Çözümü hazırlamak için Beyenbach ve Masia^26'yı takip edin.
   NOT: mM'de salin tarifi: 150.0 NaCl, 25.0 HEPES, 5.0 glikoz, 3.4 KCl, 1.8 NaHCO₃, 1.7 CaCl₂ ve 1.0 MgCl₂. PH, 1 M NaOH ile 7,1'e ayarlanır. Raf depolamasını arttırmak için şu anda preparasyona glikoz veya sakkaroz eklemeyin. EAG'leri çalıştırmadan hemen önce gerekli miktarı tuzlu suya ekleyin (deneme başına yaklaşık 50 mL).

2. Koku hazırlama ve depolama

1. Koku verici karışımları veya tek bileşik seyreltmeleri önceden 1,5 mL kehribar şişelerde hazırlayın ve bileşik bozulmasını önlemek için -20 ° C'de saklayın.
   NOT: Konsantrasyonlar, yapılacak teste bağlı olacaktır. % 0.1 veya% 1, bir bileşiğin tespit edilip edilemeyeceğini belirlemek için yaygın olarak kullanılır. Bir doz-yanıt eğrisi için, belirli bir kimyasalın seri seyreltilerini hazırlayın ve bunları en düşükten en yüksek konsantrasyonlara kadar test edin.
2. Test edilen kimyasalın çözünürlüğüne bağlı olarak seyreltmeleri su, etanol, hekzan, parafin yağı veya mineral yağda hazırlayın.
3. Deney için bir çözücü kontrolü (yalnızca çözücü içeren bir şişe) hazırladığınızdan emin olun.
4. Çözülmelerine izin vermek için deneylere başlamadan 30 dakika önce koku vericileri dondurucudan çıkarın. Kimyasal ve çözücüyü iyice karıştırmak için kullanmadan önce her şişeyi vorteks.
5. Etiketli bir cam şırınga veya Pasteur pipet içine yüklenmiş bir filtre kağıdı parçasına (0,5 cm x 2 cm) 10 μL çözelti pipet.
6. Kontaminasyonu önlemek için her bileşiği veya karışımı belirli bir Pasteur pipetine veya şırıngaya yükleyin.
   NOT: Deneye başlamadan 10 dakika önce yükleyin, böylece koku şırıngada yayılabilir, ancak bozulmayı önlemek için daha uzun süre yayılamaz. Deney başlamadan önce kimyasalın iyi bir şekilde difüzyonuna izin vermek için Pasteur pipetinin veya şırınganın şu anda kapaklı kalmasına izin verin.
7. Her EAG çalışmasından sonra, filtre kağıdının parçasını atın ve kağıdın aşırı ıslanmasını ve iğne tıkanması riskini önlemek için yenisiyle değiştirin. İğneleri düzenli olarak değiştirin (her 10 seferde bir).

3. Sivrisinek ayırma

1. Deneylerin yapıldığı gün sivrisinekleri izole edin.
2. Konakçıyla ilgili koku vericilere tepkilerini arttırmak için dişilerin çiftleşme şansını artırmak için deneylerin yapıldığı gün en az 6 günlük sivrisinekler kullanın.
   NOT: Projeye bağlı olarak test sırasında sivrisinek yaşını ayarlayın. Fizyolojik durumu kontrol edin ve uyumlu hale getirin (örneğin, kanla beslenen, açlıktan ölen, daha önce hiç beslenmemiş vb.).
3. Motivasyonlarını ve hassasiyetlerini artırmak için sivrisinekleri 12 saate kadar aç bırakın (yani, şekere erişim yok).
4. Sivrisinek kabını uçmayı bırakana kadar buzdolabına (4 ° C) yerleştirin, böylece bireyler forsepsli tek bardaklara kolayca hassas bir şekilde aktarılabilir.
   NOT: Soğuğa karşı toleransı daha yüksek olan türler CO₂ sinek pedi kullanılarak azaltılabilir. Sivrisineklerin kurumayı önlemek için uzun süre üzerinde kalmamalarını sağlayın, bu da sivrisinek EAG preparatının tepkisini azaltacaktır.
5. EAG'ler yapılmadan önce tek sivrisinek içeren bardakları oda sıcaklığında saklayın ve gün boyunca kullanılamayacak sivrisinekleri atın.

4. Elektrot tutucu ve kılcal preparat

1. Kılcal çekme, hazırlama ve depolama
   1. Filamentli borosilikat kılcal damarları kullanın (I.D: 0.78 mm, O.D: 1 mm). Ekipmana bağlı olarak bunları çekin²⁷.
      NOT: Çekilen kılcal damarları bir Petri kabında saklayın. Petri kabını, hareket etmelerini ve kırılmalarını önlemek için balmumu parçalarına veya kokusuz modelleme kiline yerleştirin.
   2. EAG deneyini çalıştırmadan önce, mikroskop altında bir çift forseps ile 2 kılcal damarın ucunu yavaşça kırın.
      NOT: Birinin boynuna (daha büyük kılcal damar) veya anten uçlarına (daha küçük kılcal damar) sığması için diğerinden biraz daha büyük olduğundan emin olun. Kılcal duvarda çatlak olmadan kesimin temiz olduğundan emin olun. Bu sabır ve pratik gerektirir.
   3. Hala sağlamsa, deney bittikten sonra deiyonize (DI) su ile duruladıktan sonra bu kılcal damarları tekrar kullanın. Uca nazikçe bir temizleme mendili uygulayarak fazla suyu çıkarın. Petri kabını tekrar depoya koyun. Uç eğriyse, kılcal damarı atın.
2. Elektrot tutucu ve kılcal montaj
   1. Farklı renklerde laboratuvar bandı parçaları kullanarak iki elektrot tutucuyu "kayıt" ve "referans" olarak etiketleyin. Bu, sivrisinek kafasının ve elektrotların montajına rehberlik etmeye yardımcı olacaktır.
   2. Elektrot tutucuların içinin temiz olduğundan ve borosilikat kalıntılarının bulunmadığından emin olun.
   3. Kloridizasyon: Elektrot tutucuların gümüş tellerini yaklaşık 5 dakika boyunca saf ağartıcıya batırın. Teller parlak açık griden mat koyu griye döner.
   4. Kauçuk tıpayı gevşetin ve kılcal damarın içini 20 G'lik bir iğne kullanarak% 10 tuzlu su çözeltisi ile doldurun.
   5. Borosilikat kılcal damarını bir şırınga kullanarak tuzlu su çözeltisi ile doldurun. Ne elektrot tutucusunda ne de çekilen kılcal damarda kabarcık bulunmadığından emin olun.
      NOT: Kılcal damarda kabarcıklar oluşma olasılığını azaltmak için, iğneyi yavaşça dışarı çekerken kılcal damardaki salini itmeye devam edin ve kılcal damarları bir filamentle kullanın. Kılcal damarları 1:3 elektrot jeli ve tuzlu su çözeltisinden oluşan bir çözelti ile yüklemek mümkündür. Bu, salinin buharlaşmasını önlemeye yardımcı olabilir ve deneycinin farklı adımları tamamlamak için daha fazla zamana ihtiyacı olacağından, EAG'leri öğrenirken ve uygularken özellikle yararlı olabilir.
   6. Islattıktan sonra, gümüş telleri DI suyla durulayın ve iki kılcal damara yerleştirin. Telin ucunun kılcal damarın ucundan 1 mm'den az olduğundan emin olun. Kılcal damarın elektrot tutucunun içindeki kauçuk halkayı kırılmadan geçirdiğinden emin olun. Kauçuk tıpayı yavaşça sıkın. Hava kabarcığı bulunmadığından emin olun.
   7. Kılcal damarı, referans elektrodu tutucusundaki (boyun) daha geniş açıklıkla ve kayıt elektrodu tutucusundaki (antenler) daha küçük açıklıkla kullanın.
   8. Kafayı monte etmeye hazır olana kadar ucun kurumasını önlemek için monte edilmiş iki elektrot tutucuyu ıslak temizleme mendili üzerinde bırakın.

5. EAG teçhizat hazırlığı (Şekil 1)

1. Hava tablasının yukarıda olduğundan, havayolunda tıkanıklık olmadığından emin olun. Deneyin ortasında değiştirmekten kaçınmak için tıbbi hava deposunun hala dolu olduğundan emin olun. Nemlendiricide kabarcıklar olduğundan emin olun.
2. Hava ve darbe dağıtım sistemi
   1. Tıbbi hava gazı tankını açın.
   2. İki debimetrenin seviyesini kontrol edin.
      NOT: Tüm deney boyunca preparatı yıkayan ana hava akımını kontrol eden debimetre 140 mL / dak'da olmalı ve koku darbesi ile ilgili diğeri 15 mL / dak okumalıdır.
3. GC-EAD yapıyorsanız, makineyi, gaz tanklarını açın ve dosyayı / yöntemi oluşturun / yükleyin.
4. Yazılım uygulamasının çalışması için bilgisayarları, yazılım uygulamalarını, valf güç kaynağını açın ve internet bağlantısını doğrulayın.
   1. Yazılım uygulaması: Nabzı iletmek için kısa bir komut dosyası yazılabilir.
   2. EAG yazılımı: Herhangi bir elektrofizyoloji yazılımı kullanın.
   3. Yazılımdaki parametreleri uygulayın (örneğin, amplifikatör, kayıt süresi, darbelerin süresi, vb.).
5. Darbeleri ileten valfin işlevsel olduğunu doğrulamak için bir kontrol darbesi iletin.
6. Güç kaynağını 5,2 V'a ayarlayın. amplifikatör parametrelerini doğrulayın.
   NOT: Burada sunulan veriler için kullanılan parametreler şunlardır: 0,1 Hz'lik düşük kesme filtresi; 500 Hz'lik yüksek kesme filtresi; x100 kazancı.

6. Sivrisinek kafası hazırlama ve montajı (Şekil 2)

1. Buzun üzerine alüminyum bir plaka yerleştirin ve üzerine bir parça ıslak temizleme mendili yerleştirin.
2. Bir köşeye küçük bir elektrot jeli koyun.
3. Buzun üzerine bir sivrisinek kabı yerleştirin ve sivrisineğin birkaç dakika soğumasını sağlayın veya uçmayı bırakana kadar.
   NOT: Bazı türler soğuğa dayanıklıdır ve aşağı inmek için CO₂ sinek pedi üzerinde hızlı bir anestezi gerektirebilir. Sivrisinek ne kadar az kalırsa, o kadar iyidir.
4. Sivrisineği sırtına yerleştirin ve her antenin ucunu (son segmentin sadece küçük bir kısmını) mikro makasla klipsleyin.
5. Elektrot jeli dollopunun yanındaki sivrisineği sürüklemek için forseps kullanın ve her antenin ucunu yavaşça jelin içine batırın. Elektrot jelindeki son segmentten daha fazlasını daldırmaktan kaçının.
6. Forseps kullanarak, sivrisinek antenlerini yan yana tutarken dışarı çekin. Jelden birlikte çıkmalarına izin verin. Antenlerin temizleme mendilinin yüzeyine temas etmediğinden emin olun, aksi takdirde ayrılabilirler.
7. Sivrisineği yanına yerleştirin ve mikro makas veya tıraş bıçağı kullanarak kafayı doğrayın.
   NOT: Kafa doğrandıktan sonra, kayıtları başlatmak için bir sonraki adımlara ve EAG donanımına hızlıca ilerleyin. Hazırlık yaklaşık 30 dakika boyunca duyarlı kalmalıdır.
8. Referans elektrodunu alın ve ucu jelin içine hafifçe derinleştirin. Boyun dokularıyla temas halinde kalın ve başın üzerine yapışmasına izin verin.
9. Elektrot tutucularını EAG mikroskobu altında hareket ettirin ve kafa (yani referans) elektrodunu bir mikromanipülatöre yerleştirmek için mikroskoptan görüntüleyin. Antenlerin merkezde olduğundan emin olun.
10. Kayıt elektrotunu alın, anten uçlarının önüne yerleştirin. Mikromanipülatörü kullanarak uçlara mümkün olduğunca yakın hareket ettirin ve hizalayın. Mikroskobu kullanarak, kayıt elektrodunun ucunu antenlere doğru hareket ettirin.
11. Yerleştirildikten sonra hareket etmelerini önlemek için uçları takmadan önce her iki elektrot tutucuyu amplifikatöre bağlayın.
12. Anten uçlarını kayıt elektroduna yerleştirin. Sadece salin ve elektrot jeli ile temas ettiklerinden ve kılcal damardan şeffaflıkla görülebildiklerinden emin olun. Anten "emme etkisi" ile içeri girer.
13. Gerekirse başın ve uçların konumunu mikroskop altında forseps ile ayarlayın.
14. Havayolu borusunu sivrisinek kafası preparasyonuna yakın bir yere yerleştirin (mesafe: 1 cm).
    NOT: Kafa düşerse, diseksiyon istasyonuna geri dönün ve kafayı yeniden monte edin veya kaybolmuşsa veya başın kesilmesinden bu yana 5 dakikadan fazla zaman geçtiyse yenisini hazırlayın. Düşük gürültü ve güvenilir kayıt için kılcal damar ve boyun/anten arasında iyi bir bağlantı şarttır. İdeal olarak, anten uçları yerleştirildikten sonra kayıt elektrodunun telinden 1 mm'den daha az olacaktır.
15. Kullanılıyorsa ışık kaynağını kapatın.
16. Vakum hattını sivrisinek kafası preparasyonunun yanına yerleştirin (mesafe: 20 cm) ve ana havayolu ile hizalayın.
    NOT: Vakum, uyarandan sonra kafa hazırlığını çevreleyen kimyasalların uzaklaştırılmasına yardımcı olacaktır, bu da darbeler uygulandıktan sonra EAG tepkilerine yol açabilir.

7. Kayıtlar

1. Anten uçlarının yerleştirilmesinden sonra, amplifikatörü ve gürültü azaltıcıyı açın. Taban çizgisi sinyalini gözlemleyin ve gürültülü olmadığından emin olun.
   NOT: Elektrik sinyalinde büyük salınımların olup olmadığını gözlemleyin. Sinyal temiz olana kadar kafa ve anten uçlarının konumunu gerektiği gibi ayarlayın. Faraday kafesine veya hava tablasına gürültü getiren her şeyi topraklamak için timsah klipsleri kullanın. Genlikte 0,01 mV'den daha düşük bir taban çizgisi sinyali, dakika EAG yanıtlarını algılamak ve ayırt etmek için idealdir.
2. Gürültü seviyesi tatmin edici olduğunda, havayolu deliğinde test etmek için ilk koku şırıngasını yerleştirin.
3. Faraday kafesini kapatın. Gürültüyü azaltmak için preparatın önünde durmayın.
4. EAG yazılımında Kaydet'e tıklayın.
5. Yazılım uygulamasını kullanarak nabız (lar) ı iletin.
   NOT: Darbelerin sayısı ve süresi deneylere bağlı olarak değişecektir. Burada, koku verici başına tek 1 s. bakliyat kullanılmıştır. Koku vericiler 45 s ile ayrıldı.
6. Laboratuvar not defterindeki sivrisinek antenlerinin tepkisine dikkat edin.
   NOT: Koku verici sivrisinek antenleri tarafından algılanırsa, sinyalde net bir sapma gözlenir (bkz. Şekil 3A).
7. Bir sonraki koku veya konsantrasyonla devam edin. Bir doz-yanıt eğrisi yapılmadıkça koku vericilerin sunumunu rastgele hale getirmeyi unutmayın.
   NOT: Deneylerde negatif kontrol ve pozitif kontrol kullanılmalıdır. Bu, gözlemlenen tepkilerin gerçekten koku alma tepkileri olmasını ve mekanik veya elektrik gürültüsünden kaynaklanmamasını sağlayacaktır.
8. Kaydın sonunda, antenlerin hala yanıt verdiğini doğrulamak için pozitif bir kontrol uygulayın.
   NOT: Şimdiye kadar test edilen tüm sivrisinek türleri bu bileşiğe yanıt verdiğinden% 0.1 veya% 1 benzaldehit kullanın.
9. Bir sonraki sivrisinek hazırlığı ile devam edin.

8. Temizlik

1. Amplifikatörü, gürültü azaltıcıyı, havayolu şirketini ve bilgisayarı kapatın.
2. Koku vericileri dondurucuya geri koyun.
3. Filtre kağıtlarını cam şırıngalardan çıkarın ve duvarlarda kalıntı varsa% 100 etanol ile temizleyin. Gece boyunca temizlik mendiliyle kurumaya bırakın.
4. Olası tuz izlerini gidermek için elektrot tutucuları DI suyuyla temizleyin. Bir parça temizleme mendiline nazikçe uygulayarak kurulayın.
5. Sivrisinek kalıntılarını dondurucuya koyun ve 24 saat sonra atın.
   NOT: Enfekte sivrisineklerle çalışıyorsanız, kurumunuzdaki güvenlik gereksinimlerine uyun.

9. Veri analizleri

1. EAG yanıtlarını manuel veya otomatik olarak ölçün.
   NOT: EAG genliği (-mV) burada ölçülür. Her bileşik için birden fazla darbe uygulanmışsa ortalama. Kullanılan yazılıma bağlı olarak, EAG'ler otomatik olarak algılanabilir ve ölçülebilir. Bununla birlikte, yanıtın şeklini doğrulamak ve olası taşıma, gecikmeli yanıt vb. Değerlendirmek için her yanıtı ayrı ayrı incelemek önemlidir. İdeal EAG yanıtı nabız ile hizalanır, net bir sapma gösterir ve sivrisinek preparatları arasında tekrarlanabilir (Şekil 3).
2. Ham verileri minimum değişkenlik, düşük gürültü sinyali ve net yanıtlar gösterecek şekilde sunun (Şekil 3B).
   NOT: Veriler normalleştirilebilir (örneğin, Z-skoru). Negatif kontrol değeri (örneğin, mineral yağ) (yani, taban çizgisi) yanıttan çıkarılabilir ve değilse, şekillerde sunulmalıdır. Pozitif bir kontrol de sunulmalıdır.
3. Herhangi bir istatistik yazılımını kullanarak istatistiksel analiz yapmak²⁸.

Sonuçlar

Elektroantennografi, bir kimyasal veya kimyasal karışımın bir böcek anteni tarafından tespit edilip edilmediğini belirlemek için güçlü bir araçtır. Ayrıca, kademeli bir konsantrasyon artışı kullanarak belirli bir kimyasalın tespit eşiğini belirlemek için de kullanılabilir (yani, doz eğrisi yanıtı, Şekil 4B). Ayrıca, kovucunun konakçı ile ilgili kokulara verilen yanıt üzerindeki etkilerini test etmek yararlıdır²⁹.

Tartışmalar

Koku alma aracılı davranışlar, fizyolojik (örneğin, yaş, günün saati) ve çevresel (örneğin, sıcaklık, bağıl nem) dahil olmak üzere birçok faktörden ^etkilenir30. Bu nedenle, EAG'leri yürütürken, aynı fizyolojik durumda olan böceklerin kullanılması (yani, yaşın izlenmesi, açlık, çiftleşme)³¹ ve ayrıca kurumayı önlemek için preparatın etrafında sıcak ve nemli bir ortam sağlamak esastır. 25 °C civarında bir sıcaklık idealdir ve ana h...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Air table Clean Bench	TMC	https://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriess	Noise reducer
Analog-to-digital board	National Instruments	BNC-2090A
Benchtop Flowbuddy Complete	Genesee Scientific	59-122BC	To anesthesize mosquitoes
Borosillicate glass capillary	Sutter Instrument	B100-78-10	To make the recording and references capillaries
Chemicals	Sigma Aldrich	Benzaldehyde: 418099-100 mL; Butyric acid: B103500-100mL; 1-Hexanol: 471402-100mL; Mineral oil: M8410-1L	Chemicals used for the experiments presented here
CO2	Airgas or Praxair	N/A	To anesthesize mosquitoes
Cold Light Source	Volpi	NCL-150
Disposable syringes	BD	1 mL (309628)  / 3 mL (309657)
Electrode cables	World Precision Instruments	5371
Electrode gel salt free	Parkerlabs	12-08-Spectra-360
Faraday cage	TMC	https://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycages	Noise reducer
Flowmeters	Bel-art	65 mm (H40406-0010) / 150 mm (H40407-0075)	One of each
GCMS vials and caps	Thermo-fisher scientific	2-SVWKA8-CPK	To prepare odorant dilutions
Glass syringes (Fortuna)	Sigma Aldrich	Z314307	For odor delivery to the EAG prep
Humbug	Quest Scientific	http://www.quest-sci.com/	Noise reducer
2 mm Jack Holder, Narrow, 90 deg., With Wire	A-M Systems	675748	Electrode holder
Magnetic bases	Kanetec	MB-FX	x 2
MATLAB + Toolboxes	Mathworks	https://www.mathworks.com/products/matlab.html	For delivering the pulses
Medical air	Airgas or Praxair	N/A	For main airline
Microscope	Nikkon	SMZ-800N
Micromanipulators Three-Axis Coarse/Fine Compact Micromanipulator	Narishige	MHW-3	x 2
Microelectrode amplifier with headstage	A-M Systems	Model 1800
Mosquito rearing supplies	Bioquip	https://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp
Needles	BD	25G (305127) / 21G (305165)
Pasteur pipettes	Fisher Scientific	13-678-6A	For odor delivery to the EAG prep
PTFE Tubing of different diameters	Mc Master Carr	N/A	To connect solenoid valve, flowmeter, airline ect.
30V/5A DC Power Supply	Dr. Meter	PS-305DM
R version 3.5.1	R project	https://www.r-project.org/	For data analyses
Relay for solenoid valve	N/A	Custom made
Silver wire 0.01”	A-M Systems	782500
Solenoid valve (3-way)	The Lee Company	LHDA0533115H
WinEDR software	Strathclyde Electrophysiology Software	WinEDR V3.9.1	For EAG recording
Whatman paper	Cole Parmer	UX-06648-03	To load chemical in glass syringe / Pasteur pipette