Periferik Kan Lökositlerini Ölçmek için Bakım Noktası Test Analizörünün Değerlendirilmesi

Özet

Burada POCT kart tabanlı lökosit analizörü kullanarak periferik kan lökositlerini ölçmek için bir protokol sunulmaktadır. Aynı kan örnekleri, sonuçların tutarlılığını ve doğruluğunu değerlendirmek için iki otomatik hematoloji analizörü tarafından test edildi. Sonuçlar, değerlendirilen analizörün referans sistemi ile iyi bir korelasyona sahip olduğunu göstermiştir.

Özet

Beyaz kan hücresi (WBC) vücuttaki inflamasyonun önemli bir göstergesidir ve bakteriyel ve viral enfeksiyonlar arasında ayrım yapmaya yardımcı olabilir. Şu anda, Çin'deki birincil tıbbi kurumların çoğu, kan testi teknolojisinin benimsenme yüzdesinin zayıf bir yüzdesine sahiptir ve birinci basamak sağlık merkezlerinde yüksek fiyat-performans oranına ve kolay kullanıma sahip bir hematoloji tespit sistemine acilen ihtiyaç duyulmaktadır. Bu yazıda, tam kanda nötrofiller, lenfositler ve ara grup hücreler (eozinofiller, bazofiller ve monositler dahil) gibi WBC indekslerini tespit etmek için kullanılan bir bakım noktası testi (POCT) kart tabanlı lökosit analizörünün (değerlendirilmiş sistem) prensibi ve çalışma prosedürleri tanıtılmaktadır. Değerlendirilen sistemden elde edilen sonuçlar, iki ticari otomatik hematoloji analizöründen (referans sistem) elde edilen sonuçlarla karşılaştırılmıştır. Değerlendirilen sistem ile ticari referans sistemleri arasındaki korelasyon ve tutarlılık analiz edilmiştir. Sonuçlar, değerlendirilen ve referans sistemler tarafından tespit edilen WBC sayısı ve granülosit sayısının güçlü bir pozitif korelasyon gösterdiğini (sırasıyla r s = 0.972 ve 0.973), lenfosit sayısının ise nispeten düşük bir korelasyon gösterdiğini göstermiştir (r_s = 0.851). Bir Bland-Altman grafiği, değerlendirilen sistem tarafından tespit edilen değerler ile referans sistemleri arasındaki en büyük farkın, iki sistemin iyi bir anlaşma içinde olduğunu gösteren% 95 anlaşma sınırları (LoA) içinde olduğunu göstermiştir. Sonuç olarak, değerlendirilen sistem mükemmel bir korelasyona, sağlam tutarlılığa ve yaygın olarak kullanılan otomatik hematoloji analizörlerinin sonuçlarıyla güvenilir bir karşılaştırmaya sahiptir. Özellikle COVID-19 normalleştirilmiş önleme ve kontrol döneminde, tam otomatik beş kategorili hematoloji analizörünün kullanılamadığı birincil tıbbi kurumlarda WBC tespiti için idealdir.

Giriş

Beyaz kan hücresi (WBC) sayısı veya diferansiyel, bakteriyel enfeksiyonu viral enfeksiyondan ayırt edebilen vücudun iltihabını yansıtmak için önemli bir göstergedir. WBC analizi, takip tanı ve tedavisine rehberlik etmek için de yararlıdır¹. Şu anda, beş sınıflandırmalı tam otomatik hematoloji analizörü, büyük ve orta ölçekli tıbbi birimlerde yaygın olarak kullanılmaktadır, çünkü otomatiktir, yüksek verimliliğe sahiptir, doğru ve güvenilir sonuçlar verir ve laboratuvar teknisyenlerinin iş yoğunluğunu etkili bir şekilde azaltır. Klinik muayenede önemli rol oynar ^2,3. Bununla birlikte, toplum sağlığı merkezleri ve özel klinikler gibi çoğu birincil tıbbi kurum, hematoloji analizörünün düşük bir benimseme oranına sahiptir. Çin'de klinik laboratuvar inşası üzerine ülke çapında yapılan çok merkezli bir araştırmaya göre, birincil tıbbi kurumların laboratuvar inşaatı, laboratuvarların küçük boyutu, yetersiz yetenek iletimi ve bilim ve teknolojinin kırsal kesime yayılması ile kanıtlandığı gibi yetersizdir⁴.

Aralık 2019'dan itibaren COVID-19 tüm dünyaya yayılmaya başladı ve küresel bir salgına dönüştü. 'Salgın sonrası dönemde', salgın durumlarının normalleştirilmiş önleme ve kontrol önlemlerini uygulamak için bir dizi ulusal politika önerilmiştir. Birinci basamak sağlık kuruluşlarının laboratuvarı, tabandan tanı ve tedavi ile hastalıkların önlenmesi ve kontrolünde önemli bir rol oynamaktadır. Salgın durumlarında ilk savunma ve kontrol hattıdır ve COVID-19'un önlenmesi ve kontrolü için kritik^{öneme sahiptir 5}. Bazı çalışmalar, periferik kan lenfositlerinin ve nötrofillerin saptanmasının COVID-19 hasta taramasına, teşhisine ve tedavisine katkıda bulunacağını ve nötrofil/lenfosit oranının şiddetli ve kritik COVID-19'un klinik erken uyarı göstergeleri olarak da kullanılabileceğini göstermiştir ^6,7. Ayrıca, lökosit tespiti hızlı bir rapor sunma avantajına sahiptir. Birincil tıp ve sağlık kurumları, şüpheli enfeksiyonları zamanında tespit etmeye ve taramaya yardımcı olmak için lökosit tespitini kapsamlı bir şekilde gerçekleştirebilir.

POCT kart tabanlı lökosit analizörü (değerlendirilen sistem; bakınız Malzeme Tablosu), altın standart "Coulter prensibine" dayanan üç sınıflandırmalı bir kan hücresi analizörüdür. Değerlendirilen sistem, bir WBC histogramının ve WBC sayısı, granülosit sayısı (Gran#), granülosit yüzdesi (Gran%), lenfosit sayısı (Lym #), lenfosit yüzdesi (Lym%), ara hücre sayısı (Mid#) ve ara hücrelerin yüzdesi (Mid%) dahil olmak üzere yedi kan parametresinin kantitatif analiz sonuçlarını sağlar. Kart tabanlı yenilikçi teknolojiyi benimseyen bu ürün, tek kişilik algılama kitinin bulunması, sıvı atıklarının olmaması, 30 saniyede hızlı algılama, rutin bakımdan arındırılmış olması ve kullanıcı dostu çalışma gibi avantajlara sahiptir. Bu nedenle, özellikle birincil tıbbi kurumlar için çok uygundur. Bu çalışma, POCT kart tabanlı lökosit analizörünün klinik tespit performansını, iki büyük ölçekli kamu hastanesinin laboratuvarlarından alınan iki tam otomatik ticari hematoloji analizörü (referans sistemi 1 ve referans sistem 2; bakınız Malzeme Tablosu) ile karşılaştırarak değerlendirmeyi amaçlamaktadır.

Protokol

Bu çalışma ve insan kan örneklerinin kullanımı, Guangzhou Tıp Üniversitesi İlk Bağlı Hastanesi Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (GYYY-2016-73). Tüm katılımcılar yazılı onaylarını bağımsız olarak veya ebeveynleri aracılığıyla (çocuklar söz konusu olduğunda) vermişlerdir.

1. Çalışma grubunun temel bilgileri

NOT: Guangzhou Tıp Üniversitesi Birinci Bağlı Hastanesini (Hastane 1) ve Zunyi Tıp Üniversitesi Beşinci Bağlı (Zhuhai) Hastanesini (Hastane 2) ziyaret eden hastalardan venöz kan toplandı. Hastane 1'de kan rutini muayenesi için kullanılan alet Referans sistemi 1 iken, Hastane 2 Referans sistemi 2'dir.

1. Ocak 2021'de Hastane 1 (532) ve Hastane 2'yi (534) ziyaret eden ve kan rutini muayeneleri yapılan hastalardan toplam 1066 kan örneği toplandı.
   NOT: Hastalar rastgele seçilmiş, birden fazla bölümden gelmiş ve çeşitli hastalıklardan muzdariptir.
2. Eksik tıbbi kayıtları olan hastaları ve işbirliği yapmayan veya bilgilendirilmiş onam vermeyi reddedenleri hariç tutun. Kan örnekleri hemoliz, chyle kanı veya bulanıklık sergileyen veya kanın hacim olarak yetersiz olduğu veya 24 saatten fazla saklandığı hastaları hariç tutun.

2. Çalışma akışı ve ilgi ölçümleri

NOT: Değerlendirilen sistem, WBC'yi ve üç sınıflandırma parametresini belirlemek için 5 μL kan örneğine ihtiyaç duyar. Kan toplandıktan sonra kan rutin muayenesi için değerlendirilen sistem ve referans sistemi kullanıldı.

1. WBC'yi ve sırasıyla referans sistemini ve değerlendirilen sistemi kullanarak 532 ve 534 kan örneklerinin üç sınıflandırma parametresini tespit edin.
   1. Yüksek eğitimli bir teknisyenin, referans sistemi ile klinik testi tamamladıktan sonra seçilen kan örneklerini rastgele yeniden numaralandırmasına izin verin. Ardından, değerlendirilen sistemi kullanarak WBC ve sınıflandırma parametrelerinin tespiti için numuneleri başka bir yüksek eğitimli teknisyene teslim edin.
2. İki sistemin sonuçlarını ortaya çıkarın.
3. Üçüncü bir teknisyenden, yalnızca hem değerlendirilen hem de referans sistemleri tarafından paylaşılan beş göstergeyi (WBC sayısı, Gran#, Gran%, Lym #, Lym%) analiz etmesini isteyin.

3. Değerlendirilen sistemi kullanma prosedürü

NOT: Değerlendirilen sistem, algılama elemanında WBC'yi saymak için elektriksel empedans prensibini (Coulter prensibi) kullanır. Test protokolü altı bölüme ayrılmıştır: analizörü başlatmak, test hazırlamak, kan toplamak, reaktif karıştırmak, numune analizi yapmak ve analizörü kapatmak.

1. Çözümleyiciyi başlatın
   1. Analizörün arkasındaki [O/I] güç düğmesini [I] konumuna getirin. Analizörün gösterge ışığının açık olup olmadığını kontrol edin.
   2. Oturum açma iletişim kutusuna doğru kullanıcı adını ve şifreyi girin ve Oturum Aç'a tıklayın. Sistemin kendi kendini denetleme ve başlatma işlemini otomatik olarak gerçekleştirdiğinden ve ardından Örnek Analizi giriş sayfasını görüntülediğinden emin olun.
2. Sınava hazırlık
   NOT: Tam bir kan örneği testi dört sarf malzemesi gerektirir: kan neşteri, hemolitik reaktif, içinde kılcal tüp bulunan kantitatif pipet ve kan hücresi algılama modülü (Şekil 1).
   1. Sonraki Örnek'e tıklayın, cinsiyeti, adı ve diğer klinik bilgileri (gerektiği gibi) doğru girin ve uygun bir referans grubu seçin. Bilgileri kaydetmek için Tamam'a tıklayın.
      NOT: Farklı yaş gruplarının kendi referans aralıkları vardır, bu nedenle doğru referans grubunu seçmek daha uygun bir alarm istemi alabilir. Yenidoğan: 1-28 günlük; Çocuklar: 29 günden 14 yaşına kadar; Yetişkin Erkek / Kadın / Genel: 15 yaşından büyük veya ona eşit.
   2. Kan hücresi algılama modülünün ince filmini yırtın, Giriş / Çıkış deposu düğmesine basın ve kan hücresi algılama modülünü makine deposuna, deliği dışa bakacak şekilde doğru şekilde yerleştirin.
   3. Hemolitik reaktif sızdırmazlık filmini kantitatif bir pipetin ucuyla delin.
3. Kan alımı
   1. Kılcal kan toplama: Sol yüzük parmağını alkole batırılmış pamuklu çubukla bir şekilde ve bir kez dezenfekte edin. Alkol doğal olarak kuruduktan sonra, sol yüzük parmağının derisini delmek için bir kan neşteri kullanın.
      1. İlk damla kanı nazikçe sıkın ve pamuklu çubukla silin. Tam bir "su damlası" oluşturacak kadar kan sıkın ve kantitatif pipet içindeki kılcal tüpü kullanarak kan örneğinin 5 μL'sini toplayın.
   2. Venöz kan toplama: Kantitatif pipet içindeki kılcal tüpü kullanarak önceden elde edilmiş venöz kan örneğinin 5 μL'sini toplayın. Bu çalışmadaki tüm testlerde, EDTA-K2 antikoagülanı içeren bir vakum kabı kullanılarak her hastadan (5 mL) toplanan venöz kan kullanılmıştır. Tüm testleri 30 dakika ila 24 saat içinde tamamlayın.
4. Reaktif karıştırma
   1. Kantitatif pipeti hemolitik reaktife (2,5 mL) yerleştirin ve kan örneğini kılcal tüpten serbest bırakmak için sıkıca bastırın.
   2. Kanı kılcal tüp ve hemolitik reaktifte, kılcal tüpte belirgin kırmızı kan kalmayana kadar sabit bir hızda 15-20 kez baş aşağı çevirerek karıştırın. Bu çalışmada, kan örneği hemolitik reaktif ile 1:500 oranında karıştırılmıştır.
5. Numune analizi
   1. Kapağı açın ve çözeltiyi kan hücresi algılama modülüne sıkın.
   2. Depoya Giriş/Çıkış düğmesine basın. Kan hücresi algılama modülü depoya girdikten sonra, Sayma düğmesine basın.
      NOT: Yanıp sönen yeşil gösterge ışığı, analizörün saymakta olduğunu gösterir. Kan hücresi tespit modülü, sayımdan sonra depodan otomatik olarak çıkacaktır ve uygun şekilde çıkarılmalı ve atılmalıdır. Her test sadece 30 saniye sürer.
   3. Analizör arayüzünde, kan hücresi algılama modülünün çıkarıldığını onaylamak için OK düğmesine iki kez tıklayın.
   4. Çözümleyici arayüzünde, test sonuçlarını yazdırmak için Yazdır düğmesine tıklayın.
6. Çözümleyiciyi kapatın
   1. Çözümleyici arayüzünde, kapatma düğmesine tıklayın ve arayüzde açılan iletişim kutusunda Evet'i seçin. Sistemin kapatma sırasını yürütmeye başlayıp başlamadığını kontrol edin.
   2. Kapatma sırası tamamlandıktan sonra anabilgisayarın arkasındaki [O/I] anahtarını [O] olarak ayarlayın.

4. İstatistiksel analiz

1. Genelleştirilmiş aşırı öğrencileştirilmiş sapma (ESD) yöntemini kullanarak aykırı değerleri tespit edin ve Amerikan Klinik Laboratuvar Standardizasyonu Derneği (CLSI) EP9-A3 belge^8'in gereksinimlerine göre takip istatistiksel analizi için bu aykırı değerleri ortadan kaldırın.
2. Normalde dağıtılan sürekli veriler için ortalamalar ve standart sapmalar (SD'ler) gibi açıklayıcı parametreleri hesaplayın; normal olarak dağıtılmamış veriler için medyanlar ve% 25-75% çeyrekler arası aralıklar; ve kategorik veriler için frekanslar ve yüzdeler.
3. Kategorik değişkenler arasındaki ilişki derecesini belirlemek için Pearson χ2 testini veya Fisher'ın kesin testini kullanın. Gruplar arasındaki sayısal verileri karşılaştırmak için Çift-Örneklem T-testi veya Mann-Whitney U testini kullanın.
4. İki sistemin tespit edilen sonuçlarının dağılımını ve doğrusal ilişkisini dağılım grafikleri ile gösterin. Kantitatif değişkenler arasındaki ilişki derecesine erişmek için Spearman'ın parametrik olmayan korelasyon testini uygulayın. İki sistem tarafından tespit edilen nicel değerler arasındaki anlaşmayı doğrulamak için Bland-Altman grafiklerini ve sınıf içi korelasyon katsayısını (ICC) kullanın.
5. Verileri tercih ettiğiniz istatistiksel yazılımla analiz edin. 0.05 < P-değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edilir.

Sonuçlar

Örnek verilerSample data
Hastane 1 (n = 532) ve Hastane 2 (n = 534) dahil olmak üzere iki araştırma merkezine toplam 1066 hasta kaydedildi. Hasta özellikleri Tablo 1'de gösterilmiştir. Erkeklerin oranı %49,9, ortanca yaş 52 (32, 66) yıldır. Çalışmaya alınan hastalar yatan hastalar (%51.1), ayaktan hastalar (%39.0) ve fizik muayene hastalarından (%8.4) oluşuyordu. Test edilen örnekler dahiliye bölümlerini (%30.6), cerrahi bölümleri (%19.1), kadın hastalıkları v...

Tartışmalar

Modern laboratuvar tıbbının ilerlemesiyle birlikte, aynı klinik belirteci tanımlamak için aynı veya farklı laboratuvarlarda kullanılan birkaç tespit teknolojisini görmek artık tipiktir. Sonuç olarak, kliniklerin test sonuçlarının doğru yorumlarını ve kararlarını vermelerine yardımcı olmak için test sonuçlarının tutarlılığına daha fazla önem verilmelidir. Araştırmaya göre, üçüncü basamak hastanelerdeki ve bağımsız laboratuvarlardaki laboratuvar ekipmanlarının toplam değeri, bir...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blood cell detection module	Chuanghuai Medical Technology Co., Ltd.(Shenzhen, China)		consumables for evaluated system
Blood lancet	Chuanghuai Medical Technology Co., Ltd.(Shenzhen, China)		consumables for evaluated system
Hemolytic reagent	Chuanghuai Medical Technology Co., Ltd.(Shenzhen, China)		consumables for evaluated system
IBM SPSS Statistics 25	International Business Machines Corp., Armonk, NY		Software for data analysis
MedCalc 11.4.2.0	2021 MedCalc Software Ltd		Software for data analysis
Microsoft Excel 2019	Microsoft		Software for data analysis
Point-of-care testing (POCT) card-based leukocyte analyzer	Chuanghuai Medical Technology Co., Ltd.(Shenzhen, China)	CX-2000	Evaluated system
Quantitative pipette with capillary tube inside	Chuanghuai Medical Technology Co., Ltd.(Shenzhen, China)		consumables for evaluated system
Siemens fully automatic hematology analyzer and its related reagents and consumables	Siemens Healthcare Diagnostics Inc.	ADVIA 2120i	Reference system 2
UniCel DxH 800 Coulter Cellular Analysis System and its related reagents and consumables	Beckman Coulter, Inc.	DxH 800	Reference system 1