Hipoksi ile İndüklenen Fare Pulmoner Arter Hipertansiyon Modelinde Çoklu İntravenöz Bolus Dozu ve İnvaziv Hemodinamik Değerlendirme

Özet

Bu protokol, farelerde çoklu intravenöz bolus dozu uygulaması ve invaziv hemodinamik izleme yürütmek için adım adım bir prosedür sağlar. Araştırmacılar bu protokolü pulmoner arter hipertansiyonu için gelecekteki terapötik bileşik taraması için kullanabilirler.

Özet

Pulmoner arteriyel hipertansiyon (PAH), primer olarak akciğerin küçük pulmoner arteriyollerini etkileyen, ilerleyici, hayatı tehdit eden bir hastalıktır. Şu anda, PAH için bir tedavi yoktur. PAH'ı tedavi etmek için kullanılabilecek yeni bileşiklerin keşfedilmesi önemlidir. Fare hipoksisinin neden olduğu PAH modeli, PAH araştırmaları için yaygın olarak kullanılan bir modeldir. Bu model, PAH Grup 3 hastalığının insan klinik belirtilerini özetlemektedir ve PAH için yeni deneysel tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için önemli bir araştırma aracıdır. Bu modeli kullanan araştırmalar genellikle farelerde bileşiklerin uygulanmasını gerektirir. Doğrudan kan dolaşımına verilmesi gereken bir bileşik için, intravenöz (IV) uygulamanın optimize edilmesi, deneysel prosedürlerin önemli bir parçasıdır. İdeal olarak, IV enjeksiyon sistemi, belirli bir süre boyunca birden fazla enjeksiyona izin vermelidir. Fare hipoksisinin neden olduğu PAH modeli birçok laboratuvarda çok popüler olmasına rağmen, bu modelde çoklu IV bolus dozu ve invaziv hemodinamik değerlendirme yapmak teknik olarak zordur. Bu protokolde, fare hipoksi ile indüklenen PAH modelinde hemodinamik değerlendirme için fare juguler veni yoluyla çoklu IV bolus dozlamasının nasıl yapılacağı ve arteriyel ve sağ ventrikül kateterizasyonunun nasıl yapılacağı hakkında adım adım talimatlar sunuyoruz.

Giriş

Pulmoner arter hipertansiyonu (PAH), istirahatte ortalama pulmoner arter sistolik basıncının 20 mmHg'dan yüksek^{olması ile} tanımlanır ^1,2. Pulmoner arter basıncında sürekli yükselme ile karakterize, sağ ventrikül aşırı yüklenmesine ve sonuçta sağ ventrikül yetmezliğine bağlı ölüme yol açan ilerleyici ve ölümcül bir hastalıktır¹. Şu anda, PAH için bir tedavi yoktur.

Deneysel PAH tedavilerinin etkinliğini test etmek için pulmoner hipertansiyonun hayvan modellerinin kullanılması önemlidir. Bu modeller arasında, fare hipoksisinin neden olduğu PAH modeli, insan PAH....

Protokol

Tüm hayvan prosedürleri, Yale Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komiteleri tarafından onaylanan protokoller kapsamında gerçekleştirildi.

1. Hayvanların, aletlerin, kan basıncı ölçüm cihazlarının ve hipoksi odasının hazırlanması

1. Hayvan iklimi.
   NOT: Bu çalışma için kullanılan deney hayvanları, 25-27 g ağırlığındaki erkek, 8 haftalık C57BL/6 farelerdi. Deney için gerekli hayvan sayısını tahmin ederken, ameliyata bağlı mortalite, beklenmedik cerrahi komplikasyonlar ve ani beklenmedik ölüm dahil olmak üzere çeşitli faktörler göz önünde bulundurulmalıdır. İstatistiksel güce ulaşmak ve yetersiz çalışmalar....

Sonuçlar

Anestezi genellikle kan basıncını düşürür. Bu nedenle, zararlı bir uyarana yanıt olarak hareketleri ortadan kaldırmak için minimum anestezi dozu kullanıldı. Başarılı sağ ventrikül odası erişimi, venöz sistemlerin farklı bölgelerinde hemodinamik dalga formu değişiklikleri olarak görselleştirilebilir (Şekil 8).

Bu çalışmada, fareler rastgele normoksik (% 21_O2) grubuna (n = 10), hipoksi (% 10_O2) grubuna (n = 10) ve.......

Tartışmalar

İnsan deneklerde artmış pulmoner vasküler direnç olaylarını taklit etmek için çeşitli pulmoner hipertansiyon hayvan modelleri oluşturulmuştur. Bunlar arasında, fare hipoksisinin neden olduğu PAH modeli, PAH için yeni deneysel tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu modeli kullanan araştırmalar genellikle bileşiklerin farelere uygulanmasını gerektirir. Yayınlanmış diğer intravenöz (IV) enjeksiyon ve invaziv hemodinamik değerlendirme protokolleri ile ka.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
5-0 prolene suture pack	Ethicon	8698G	for incision closure
8-0 nylon suture pack	AROSurgical Instruments	T06A08N14-13	for ligation
Anesthesia induction chamber	VETEQUIP	#941444	Holds the animal during anesthesia exposure
Catheter Interface Cable PEC-4D	Millar		for connecting Millar Mikro-Tip catheter to PCU-2000
Charcoal canister filters	VETEQUIP	#931401	to help remove waste anesthetic gases
Cotton swabs	McKesson	24-106	for applying pressure to the injection site to prevent bleeding
Fine scissors	Fine Science Tools	14059-11	Surgical tools
Insulin syringe 28 G	EXEL	26027	for jugular vein IV injection
Isoflurane	COVETRUS	#029405	for mouse anesthesia
LabChart 8 Software	ADInstruments		for data analysis
Mikro-Tip Pressure Catheter SPR-1000 (1.0 F)	Millar		for invasive blood pressure measurement
Needle-25 G	BD	305124	for making a samll hole in a vessel
Oxygen controller ProOx Oxygen Sensor	BioSpherix	E702	for oxygen concentration monitoring
PCU-2000 Pressure Control Unit	Millar		for connecting Millar Mikro-Tip catheter to PowerLab 4/35
PowerLab 4/35	ADInstruments		for Data Acquisition. Investigator needs to connect the PowerLab 4/35 to a personal laptop containing LabChart 8 software for operation.
Prism 8	GraphPad		for statistics and scientific graphing
Semisealable hypoxia chamber	BioSpherix		an artificial environment that simulates high-altitude conditions for animals
Spring Scissors	Fine Science Tools	15021-15	Surgical tools
Tweezer Style 4	Electron Microscopy Sciences	0302-4-PO	Surgical tools
VasoRx compound 7C1/let-7 miRNA	VasoRx, Inc.	Lot# B2-L-16Apr	IV injection compound
VIP 3000 Veterinary Vaporizer	COLONIAL MEDICAL SUPPLY CO., INC.		for accurate anesthesia delivery