Farelerde Progresif Direnç Eğitimi için Basit ve Ucuz Bir Koşu Tekerleği Modeli

Özet

Bu prosedür, farelerde çevrilebilir bir aşamalı yüklü koşu tekerleği direnç eğitim modelini açıklar. Bu direnç eğitim modelinin birincil avantajı, tamamen gönüllü olması, böylece hayvanlar için stresi ve araştırmacı üzerindeki yükü azaltmasıdır.

Özet

Daha önce geliştirilen sinerjik ablasyon, elektriksel stimülasyon, ağırlıklı merdiven tırmanma ve en son olarak ağırlıklı kızak çekme dahil olmak üzere kemirgen direncine dayalı egzersiz modelleri, iskelet kası adaptasyonlarını indüklemek için hipertrofik bir uyaran sağlamada oldukça etkilidir. Bu modellerin iskelet kası araştırmaları için paha biçilmez olduğu kanıtlanmış olsa da, ya invaziv ya da istemsiz ve emek yoğundur. Neyse ki, birçok kemirgen suşu bir koşu tekerleğine erişim verildiğinde gönüllü olarak uzun mesafeler koşar. Kemirgenlerdeki yüklü tekerlek çalıştırma (LWR) modelleri, insanlarda artan kas kütlesi ve lif hipertrofisi ve kas protein sentezinin uyarılması gibi direnç eğitimi ile yaygın olarak gözlenen adaptasyonları indükleyebilir. Bununla birlikte, ılımlı tekerlek yükünün eklenmesi ya fareleri uzun mesafelerde koşmaktan caydıramaz, bu da bir dayanıklılık / direnç eğitim modelini daha iyi yansıtır ya da fareler yük uygulama yöntemi nedeniyle neredeyse tamamen çalışmayı bırakır. Bu nedenle, harici direncin uygulandığı ve kademeli olarak arttırıldığı fareler için yeni bir yüksek yüklü tekerlek çalışma modeli (HLWR) geliştirilmiştir ve farelerin daha önce kullanılandan çok daha yüksek yüklerle çalışmaya devam etmelerini sağlamıştır. Bu yeni HLWR modelinden elde edilen ön sonuçlar, 9 haftalık eğitim protokolü boyunca hipertrofik adaptasyonları indüklemek için yeterli uyaran sağladığını göstermektedir. Burada, farelerde bu basit ama ucuz ilerleyici direnç tabanlı egzersiz eğitim modelini yürütmek için özel prosedürler açıklanmaktadır.

Giriş

İskelet kas kütlesi, yetişkin insanlarda vücut kütlesinin yaklaşık% 40'ını oluşturur; Bu nedenle, iskelet kas kütlesinin yaşam boyunca korunması kritik öneme sahiptir. İskelet kas kütlesi, enerji metabolizmasında, çekirdek vücut ısısının korunmasında ve glikoz homeostazında ayrılmaz bir rol oynar¹. İskelet kasının korunması, protein sentezi ve protein yıkımı arasında bir dengedir, ancak bu süreçleri yönlendiren karmaşık moleküler mekanizmaların anlaşılmasında hala birçok boşluk vardır. Kas kütlesinin korunmasını ve büyümesini düzenleyen moleküler mekanizmaları incelemek için, insan deneklerin araştırma modelleri genellikle direnç egzersizine dayalı müdahaleler kullanır, çünkü mekanik uyaranlar iskelet kas kütlesinin düzenlenmesinde ayrılmaz bir rol oynar. İnsan deneklerin araştırması başarılı olsa da, invaziv prosedürlerle (yani kas biyopsileri) ilgili uyarlamaları ve etik kaygıları sergilemek için gereken süre, elde edilebilecek veri miktarını sınırlar. Direnç egzersizine adaptasyonlar memeli türleri arasında oldukça yaygın olsa da, hayvan modelleri, diyet ve egzersiz rejimini tam olarak kontrol edebilmenin yararını sağlarken, aynı zamanda beyin, karaciğer, kalp ve iskelet kası gibi vücuttaki tüm dokuların toplanmasına izin verir.

Kemirgenlerde kullanılmak üzere birçok direnç eğitim modeli geliştirilmiştir: sinerjik ablasyon², elektriksel stimülasyon^3,4, ağırlıklı merdiven tırmanma^5, ağırlıklı kızak çekme⁶ ve tuvalli çömelme⁷. Tüm bu modellerin, doğru yapılırsa, hipertrofi gibi iskelet kası adaptasyonlarını indüklemek için etkili modeller olabileceği açıktır. Bununla birlikte, bu modellerin düşüşleri, çoğunlukla istemsiz olmaları, normal kemirgen davranışının bir parçası olmamaları, zaman / emek yoğun ve istilacı olmalarıdır.

Neyse ki, birçok fare ve sıçan suşu, bir koşu tekerleğine erişim verildiğinde gönüllü olarak uzun mesafeler koşar. Dahası, serbest çalışan tekerlek (FWR) egzersiz modelleri, hareketi veya kas aktivitesini zorlamak için kapsamlı koşullandırma, pozitif / negatif takviye veya anesteziye dayanmaz ^8,9. Koşu aktivitesi büyük ölçüde fare gerginliğine, cinsiyetine, yaşına ve bireysel bazda bağlıdır. Lightfoot ve ark. 15 farklı fare suşunun koşu aktivitesini karşılaştırdı ve günlük koşu mesafesinin 2.93 km ila 7.93 km arasında değiştiğini, C57BL / 6 farelerin cinsiyet^10'dan bağımsız olarak en uzağa koştuğunu buldu. FWR genellikle iskelet ve kalp kaslarında dayanıklılık adaptasyonlarını indüklemek için mükemmel bir model olarak kabul edilir^{11,12,13,14,15,16}; Bununla birlikte, direnç eğitim modellerinde tekerlek koşusunun kullanılması daha az araştırılmaktadır.

Tahmin edilebileceği gibi, tekerlek çalışmasının hipertrofik etkisi, yüklü tekerlek çalıştırma (LWR) olarak adlandırılan koşu tekerleğine direnç eklenerek arttırılabilir, böylece direnç eğitimini daha yakından taklit etmek için tekerlek üzerinde çalışmak için daha fazla çaba sarf edilmesi gerekir. Çeşitli yük uygulama yöntemleri kullanarak, önceki çalışmalar, sıçanları ve fareleri kullanan LWR modelinin, 6-8 hafta içinde ekstremite kas kütlesinde% 5-30'luk bir artış gösterdiğini göstermiştir 17,18,19,20,21. Ayrıca, D'hulst ve ark., tek bir LWR nöbetinin, FWR^22'ye kıyasla protein sentezi sinyal yolunun aktivasyonunda% 50 daha fazla artışa yol açtığını göstermiştir. Tekerlek direnci en yaygın olarak sürtünme tabanlı, sabit yükleme yöntemiyle uygulanmıştır, bu sayede tekerlek direnci^{12,19,23,24'ü} uygulamak için manyetik bir fren veya gergi cıvatası kullanılır. Sürtünmeye dayalı, sabit yük yönteminin bir uyarısı, orta ila yüksek direnç uygulandığında, hayvanın tekerleğin hareketini başlatmak için yüksek direncin üstesinden gelememesi ve eğitimi etkili bir şekilde durdurmasıdır. En önemlisi, kemirgen koşu tekerleği modelleri için kullanılan kafes ve tekerlek sistemlerinin birçoğu oldukça maliyetlidir ve özel ekipman gerektirir.

Son zamanlarda, Dungan ve ark., tekerleğin tek bir tarafına yapıştırılmış dış kütleler aracılığıyla tekerleğe asimetrik olarak bir yük uygulayan ilerici ağırlıklı tekerlek çalışan (PoWeR) bir model geliştirdi. PoWeR modelinin dengesiz tekerlek yüklemesi ve değişken direncinin, sürekli çalışma aktivitesini teşvik ettiği ve farelerde çalışan yüklü tekerleğin daha kısa patlamalarını teşvik ettiği, direnç eğitimi¹⁷ ile gerçekleştirilen setleri ve tekrarları daha yakından taklit ettiği düşünülmektedir. Ortalama koşu mesafesinin günde 10-12 km olmasına rağmen, PoWeR modeli, plantaris kası ıslak kütlesinde ve lif kesit alanında (CSA) sırasıyla% 16 ve% 17'lik bir artış sağlamıştır. Birçok pratik avantaja rağmen, LWR'nin PoWeR modelinin bazı sınırlamaları vardır. Yazarlar tarafından tanındığı gibi, PoWeR modeli, daha katı bir direnç egzersizine dayalı modelin aksine, harmanlanmış bir dayanıklılık / direnç egzersiz modelini (yani, insanlarda eşzamanlı eğitim) yansıtan, potansiyel olarak bir girişim etkisi yaratan ve daha az belirgin hipertrofiye veya hipertrofinin indüklendiği farklı mekanizmalara katkıda bulunan yüksek hacimli bir "hibrit" uyarandır^{. 25} . Bir direnç egzersizi eğitim modeli olması amaçlanan şeyde eşzamanlı bir eğitim olgusunun gerçekleşmemesini sağlamak zorunludur. Bu nedenle, PoWeR modeli, bir direnç eğitim modeline daha yakından benzemek için daha önce kullanılandan daha yüksek yükler kullanan bir LWR modeli geliştirmek üzere değiştirildi. Burada, C57BL / 6 farelerde basit ve ucuz bir 9 haftalık progresif direnç eğitimi LWR modeli için ayrıntılar verilmiştir.

Protokol

Bu çalışma Appalachian State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (#22-05) tarafından onaylanmıştır.

1. Hayvanlar

1. C57BL/6 farelerini şirket içi fare kolonisinden temin edin.
   NOT: Çalışmanın başlangıcında 5-8 aylık erkek fareler kullanılmıştır. Günlük koşu aktivitesi 26 haftalıkken yaklaşık 9-10 haftalıkken zirveye ulaşır ve^{platolara ulaşır}. Önceki çalışmalar, yaşlı farelerin (22-24 ay) da²⁷ çalışan yüklü tekerlek gerçekleştireceğini göstermiştir.
2. Fareleri ayrı ayrı tel kapaklı standart bir kemirgen kafesinde barındırın ve kafesi kontrollü bir ortamda tutun (12:12 saat ışık:karanlık döngü ile 20-24 °C).
3. Standart kemirgen chow ve su ad libitum sağlayın.

2. Koşu tekerleği aparatı

1. Çalışan tekerlek kurulumu:
   NOT: Çalışan tekerlekler, 1 g veya 2,5 g yük mıknatısları eklemek dışında, tüm çalışan protokoller için benzer şekilde monte edilir/kurulur.
   1. Tek bir 1 g sensör mıknatısını koşu tekerleğinin dış orta çevresine yapıştırın (Şekil 1).
   2. Bu tekerleği, tekerleğe alışmanın yalnızca ilk haftası için tek bir 1 g sensör mıknatısıyla kullanın.
   3. Yüklü tekerlek çalıştırma (LWR; PoWeR¹⁷ ile aynı yükleme protokolü): 2.1.4-2.1.6 adımlarını izleyin.
   4. LWR için 2. hafta 2 g yük gerektirir (bkz. Tablo 1).
   5. İki adet 1 g mıknatısı tekerleğin dış çevresine yan yana yapıştırın (Şekil 2A).
      NOT: Burada, yapıştırıcı sıkıca kuruyana kadar mıknatısları yerinde tutmak için bant kullanmak yararlıdır; aksi takdirde, sensör mıknatısına çekilebilir ve yerinden çıkabilirler.
   6. 3, 4 ve 6. haftalarda, halihazırda mevcut olan mıknatıslardan herhangi birinin üzerine 1 g mıknatıs daha yerleştirerek ek yük uygulayın.
      NOT: Mıknatıslar birbirine sıkıca yapıştığı için yapıştırıcı gerekmez. Örneğin, 6. haftada 6 g yük ile, mıknatısların her biri üç yüksekliğinde istiflenecektir (Şekil 2B).
   7. Yüksek yüklü tekerlek çalıştırma (HLWR): 2.1.8-2.1.11 arasındaki adımları izleyin.
      NOT: HLWR protokolü üç tekerlek seti gerektirir. Farklı tekerlek setlerinin montajı, araştırmacının tekerlek iyice temizlendikten ve sterilize edildikten sonra diğer fareler için tekerlek kurulumlarını yeniden kullanmasına izin verir (her setin sayısı, araştırmacı tarafından kohort / grup boyutuna göre belirlenmelidir).
   8. İlk tekerlek seti (yalnızca 2. hafta için gereklidir) tek bir 2,5 g mıknatısa sahip olacaktır; Tekerleğin dış çevresine bir adet 2,5 g mıknatıs yapıştırın (Adım 2.1.5'in altındaki Nota bakınız) (Şekil 3A).
   9. İkinci tekerlek seti (sadece 3. hafta için gereklidir) iki adet 2,5 g mıknatısa sahip olacaktır; tutkal (Adım 2.1.5'in altındaki Not'a bakınız) tekerleğin dış çevresine yan yana iki adet 2,5 g mıknatıs (Şekil 3B).
   10. Üçüncü tekerlek seti (4. hafta ve sonrası için gereklidir) yan yana üç adet 2,5 g mıknatısa sahip olacaktır; tutkal (Adım 2.1.5'in altındaki Not'a bakınız) tekerleğin dış çevresine yan yana üç adet 2,5 g mıknatıs (Şekil 3C).
   11. Mevcut mıknatıslardan herhangi birinin üzerine 2,5 g'lık başka bir mıknatıs yerleştirerek 6. ve 8. haftalar için ek yük uygulayın (Şekil 3D, E).

Resim 1: Tekerleğin orta dış çevresine yapıştırılmış tek 1 g sensörlü mıknatıslı temel koşu tekerleği. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: Sensör mıknatıslı yüklü koşu tekerleği (LWR) ve 1 g yükleme mıknatısları. (A) 2 g yük örneği, tekerleğin dış kenarına yan yana yapıştırılmış iki adet 1 g mıknatıs; (B) 6 g yük örneği, tekerleğin dış kenarına yan yana yapıştırılmış iki adet 1 g mıknatıs ve ilave 4 g yük uygulanır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Resim 3: Sensör mıknatıslı yüksek yüklü koşu tekerleği (HLWR) ve 2,5 g yükleme mıknatısları. (A) 2,5 g yük örneği, tekerleğin dış kenarına yapıştırılmış bir adet 2,5 g mıknatıs; (B) 5 g yük örneği, tekerleğin dış kenarına yan yana yapıştırılmış iki adet 2,5 g mıknatıs; (C) 7,5 g yük örneği, tekerleğin dış kenarına yan yana yapıştırılmış üç adet 2,5 g mıknatıs; (D) 10 g yük örneği, tekerleğin dış kenarına yan yana yapıştırılmış üç adet 2,5 g mıknatıs, ilave 2,5 g yük uygulanarak; (E) 12,5 g yük örneği, tekerleğin dış kenarına yan yana yapıştırılmış üç adet 2,5 g mıknatıs, ilave 5 g yük uygulanır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

3. Kafes montajı

1. Egzersiz süresini (h) ve kat edilen mesafeyi (km) izlemek için dijital bisiklet bilgisayarıyla donatılmış bir kafes kullanarak koşu tekerleklerini monte edin. Ortalama hız (km/s) aritmetik olarak türetilir.
   1. Montajdan önce bisiklet bilgisayarına yeni bir pil takıldığından emin olun.
   2. İlk bisiklet bilgisayar programlaması sırasında tekerlek boyutunu ayarlayın (üreticinin talimatlarına bakın); Koşu tekerleğinin dış çevresini ölçerek devir başına mesafeyi hesaplayın (örneğin, burada kullanılan tekerlek tipi için 3.580 mm).
2. Bisiklet bilgisayar sensörünü, kafes kapağının dış tarafında, tekerleğin sensör mıknatısının bulunduğu yerin hemen üzerinde sağlam bir yüzeye yerleştirin. Farelerin bileşenleri çiğnemesini önlemek için tüm bilgisayar ve sensör bileşenlerinin kafesin dışındaki katı bir bariyer içinde bulunduğundan emin olun.
   1. Manyetik bisiklet sensörünün oturması için küçük bir dikdörtgen kesilmiş boş bir pipet ucu kutusunun kapağını ve bisiklet bilgisayarını ve kablosunu tutmak için kutunun ana kısmını (uç rafı ızgarası çıkarılmış) kullanın (Şekil 4A).
   2. Manyetik bisiklet sensörünü ve koşu tekerleği standını kafesin dışına sabitlemek için katı yüzeyin köşelerinden iki delik açın (Şekil 4A).
3. Çalışan dingil tabanını baş aşağı, kafes kapağındaki boşluklardan ancak adım 3.2'de açıklanan katı yüzeyin üzerine yerleştirin (Şekil 4B).
   1. Dingil mesafesini ve bilgisayar sensörünü donanımla kafesin üst kısmına sabitleyin (Şekil 4C, D).
4. Tekerlek hareketinin düzgün bir şekilde kaydedilmesini sağlamak için sensör mıknatısının ve bilgisayar sensörünün en fazla 1 cm aralıklarla yerleştirildiğinden emin olun (çoğu standart bisiklet bilgisayar sensörü çift yönlüdür ve her iki dönüş yönünde de pozitif tekerlek hareketini kaydeder).
5. Uygun koşu tekerleğini (yukarıda açıklandığı gibi) kafes kapağının içinden dingil mesafesine takın ve kapağı kafesin üzerine güvenli bir şekilde yerleştirin (Şekil 4E, F).
6. Tekerlek kafes kapağından asılıyken, kafes tabanından en az 2,5 cm boşluk bırakın. Tekerleğin serbestçe dönmesini, ancak yatak takımlarının birikmesiyle engellenmemesini sağlamak için kafese minimum miktarda yatak malzemesi yerleştirin.
7. Deneme sırasında, doğru etkinlik izlemeyi sağlamak için bisiklet bilgisayarından gelen verileri tutarlı bir aralık çizelgesinde kaydedin.
   1. Farelerin gece bir tür olduğunu kabul edin; Bu nedenle, doğal kafes aktivitelerinin çoğu (tekerlek koşusu dahil) ışık döngüsünün karanlık saatlerinde gerçekleştirilecektir.

Resim 4: Çalışan tekerlek kafesi tertibatı. (A) Katı yüzeye/tepsiye yerleştirilmiş bisiklet bilgisayarı ve manyetik sensör; (B) katı yüzeyin/tepsinin ve sensörün üzerine yerleştirilmiş ters çevrilmiş dingil mesafesi (üstten görünüm; tabanın donanımla kafes kapağına sabitlenmesi için sensör yüzeyindeki/tepsisindeki iki deliğe dikkat edin), (C) donanım monte edilmiş ters dingil mesafesi (alttan görünüm); (D) donanım montajlı ters dingil mesafesi (üstten görünüm); (E) tam kafes tertibatı (üstten görünüm); ve (F) tam kafes tertibatı (yandan görünüm). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

4. Egzersiz eğitimi yükleme protokolleri

1. Herhangi bir çalışmayı önlemek için kilitli bir koşu tekerleği içeren bir kafeste 9 hafta boyunca sedanter (SED) fareleri ayrı ayrı barındırın.
   NOT: Tablo 1, deneysel tasarımda kullanılan LWR (PoWeR) ve HLWR protokollerinin yükleme programını sağlar.
2. Farelerin 9 haftalık protokolün tamamı boyunca egzersiz yapmaya devam etmesini sağlamak için gerekirse LWR ve HLWR gruplarının yükünü azaltın.

		Hafta
		1	2	3	4	5	6	7	8	9
LWR (n = 4)	Yük (g)	0.0	2.0	3.0	4.0	5.0	5.0	6.0	6.0	6.0
	%BM	--	8%	11%	15%	19%	19%	23%	23%	23%
HLWR (n = 7)	Yük (g)	0.0	2.5	5.0	7.5	7.5	10.0	10.0	12.5	12.5
	%BM	--	10%	19%	28%	28%	38%	38%	48%	48%

Tablo 1. Yüklü tekerlek çalıştırma protokolleri

5. In situ kas fonksiyon testi, doku hasadı ve doku analizi

1. 9 haftalık eğitim müdahalesini takiben, ek oksijen ile inhale izofluran (% 4 indüksiyon; % 2 bakım) kullanarak fareleri anestezi altına alın ve prosedür boyunca uygun anestezik düzlem izlemesini sağlayın.
2. İzometrik kas gücünü test etmek için gastroknemius, plantaris, soleus (GPS) kompleksi üzerinde in situ kas fonksiyon testi yapın²⁸. Siyatik siniri 1-300 Hz arasında 11 yükselen frekansta 27 G elektrot iğnesi ile doğrudan uyararak bir kuvvet-frekans eğrisi oluşturun, tetanik kasılmalar 100-150 hz²⁹ civarında meydana gelir.
3. Kas fonksiyon testinden hemen sonra, fareleri servikal çıkık yoluyla ötenazi yapın ve kalbi çıkararak ötenaziyi onaylayın. Plantaris ve soleus kaslarını dikkatlice tüketin ve ıslak doku kütlesini kaydedin.
4. Her kas örneğini bir gömme ortamında (OCT) kaplayın ve bir mantar üzerine monte edin. Sıvı azot soğutmalı isopentan içinde dondurun ve kas dokusunun bölümlerinde (10 μm kalınlığında) daha fazla immünohistokimyasal (IHC) analiz yapılana kadar -80 ° C'de saklayın.
5. Laminin için immünofloresan kullanarak kas lifi CSA'yı analiz edin. Otomatik görüntü ölçme platformu 30 kullanarak fiber CSA'yı^ölçün.

6. İstatistiksel analiz

1. Tüm verileri ortalama ± SD olarak ifade edin.
2. Anlamlılığı p ≤ 0,05 olarak ayarlanmış istatistiksel analiz yazılımı kullanarak istatistiksel analizler yapın.
3. Tekerlek çalıştırma ve antrenman hacmi verilerini, tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleriyle karşılaştırın.
4. Vücut kütlesini, doku kütlesini, CSA'yı ve kas fonksiyonunu tek yönlü bir ANOVA ile karşılaştırın. Önemli F-oranları bulunursa, Fisher LSD post hoc analizlerini kullanarak grup içi farklılıkları karşılaştırın.
5. Efekt boyutlarını hesaplayın, ardından bunları küçük, orta ve büyük efekt boyutları için sırasıyla 0,01, 0,06 ve 0,14 olarak yorumlayın.

Sonuçlar

Bu çalışmada, 24 C57BL / 6 fare (bu çalışmanın başlangıcında 6.3 ± 0.7 ay) rastgele üç tedavi grubundan birine atandı: sedanter (SED), yüklü tekerlek çalıştırma (LWR; Dungan ve ^ark.17 tarafından tanımlanan PoWeR ile aynı) veya yüksek LWR (HLWR) ve daha sonra ilgili 9 haftalık protokollerini tamamladılar. Alışma haftasından sonra (1. hafta), koşu mesafesi veya antrenman hacminde grup veya grup x zaman farkı yoktu (Şekil 5).

Tartışmalar

Kemirgenlerdeki mevcut direnç egzersiz modellerinin iskelet kası araştırmaları için paha biçilmez olduğu kanıtlanmıştır; Bununla birlikte, bu modellerin çoğu istilacı, istemsiz ve / veya zaman ve emek yoğundur. LWR, sadece diğer iyi kabul görmüş direnç egzersizi eğitim modellerinde gözlemlenenlerle benzer kas adaptasyonlarını indüklemekle kalmayıp, aynı zamanda araştırmacı tarafından minimum zaman / emek taahhüdü ile hayvan için kronik, düşük stresli bir egzersiz uyarıcısı sağlay...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 g disc neodymium magnets	Applied Magnets	ND018-6	Used for all sensor magnets and 1 g increments of wheel loading
2.5 g disc neodymium magnets	Applied Magnets	ND022	Used for 2.5 g increments of wheel loading
8-32 x 1" stainless steel screws	Amazon		https://www.amazon.com/gp/product/B07939RS23/ref=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&psc=1
8-32 Wing Nuts	Amazon		https://www.amazon.com/gp/product/B07YYWW2SB/ref=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&th=1
10 µL pipette tip box (empty)	Thermo Scientific	2140	We used empty ART Pipette tip boxes, but any similar sized boxes/trays would suffice
Extreme Liquid Glue	Loctite
Laminin primary antibody	Novus Biologicals	NB300-144AF647	primary antibody conjugated with AF657; 1:200 in PBS containing 10% normal goat serum
Lithium 3 V battery	n/a	CR2032
M10 (3/16" x 1 1/4") stainless steel fender washers	Amazon		https://www.amazon.com/gp/product/B00OHUHEU8/ref=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8&th=1
MyoVision: Automated Image Quantification Platform	Wen et al. (2017)	v1.0	https://www.uky.edu/chs/center-for-muscle-biology/myovision
Polycarbonate rodent cage (430 mm L x 290 mm W x 201 mm H), with narrow width stainless steel wired bar lid	Orchid Scientific	Polycarbonate Rat Cage Type II	https://orchidscientific.com/product/rat-cage/ - 1519974600758-c29bc1c5-6dfa
Sigma Sport 509 Bike Computer	Sigma Sport		Does not need to be this model in particular, but must have distance and time monitoring capabilities
Silent Spinner Running Wheel (mini 11.4 cm)	Kaytee	SKU# 100079369	https://www.kaytee.com/all-products/small-animal/silent-spinner-wheel