Vasküler Manşetler Kullanılarak Fare Heterotopik Servikal Kardiyak Transplantasyonu

Özet

Fare kardiyak transplantasyon modelleri, transplantasyon immünolojisini incelemek için değerli araştırma araçlarını temsil etmektedir. Mevcut protokol, laminer kan akışına izin vermek için alıcının ortak karotis arterine ve donörün pulmoner arter gövdesine manşetlerin yerleştirilmesini içeren fare heterotopik servikal kardiyak transplantasyonunu detaylandırmaktadır.

Özet

Kardiyak transplantasyonun murin modelleri, iskemi-reperfüzyon hasarını, transplantasyon sonrası doğuştan gelen ve adaptif immün yanıtları ve immünomodülatör tedavilerin greft reddi üzerindeki etkisini incelemek için sıklıkla kullanılmaktadır. Farelerde heterotopik servikal kalp transplantasyonu ilk olarak 1991 yılında dikişli anastomozlar kullanılarak tanımlanmış ve daha sonra manşet tekniklerini içerecek şekilde modifiye edilmiştir. Bu değişiklik, başarı oranlarının iyileştirilmesine izin verdi ve o zamandan beri, daha fazla teknik iyileştirme öneren birden fazla rapor yapıldı. Bununla birlikte, greft anastomozları ile ilişkili teknik zorluk nedeniyle daha yaygın kullanıma çeviri sınırlı kalmaktadır, bu da vasküler anastomoz bükülmesini veya aşırı gerginliği önlemek için manşetlerin yeterli uzunluğunu ve kalibresini elde etmek için hassasiyet gerektirir ve bu da greftin zarar görmesine neden olabilir. Bu protokol, farelerde heterotopik servikal kardiyak transplantasyon için modifiye edilmiş bir tekniği tanımlamaktadır ve bu da alıcının ortak karotis arterine ve donörün pulmoner arterine kan akışının yönü ile uyumlu olarak manşet yerleştirilmesini içerir.

Giriş

Abbott ve ark.¹⁹⁶⁴ yılında sıçanlarda heterotopik abdominal kalp transplantasyonunun ilk tanımını 1 kez yayınlamıştır. Bu cerrahi teknikler 1969 yılında Ono ve ark. tarafından rafine edilmiş ve basitleştirilmiştir². Corry ve ark. ilk olarak 1973 yılında farelerde heterotopik abdominal kalp nakli için bir yöntem tanımladılar; Daha önce bildirilen sıçan modellerine benzer şekilde, bu, donörün pulmoner arterinin uçtan yana anastomozları ve alıcının inferior vena kava ve abdominal aortuna yükselen aort ile revaskülarizasyon ile konakçının karnına engraftasyonu içeriyordu, sırasıyla³. Sıçanlarda hetero....

Protokol

Tüm hayvan taşıma prosedürleri, NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı kılavuzlarına uygun olarak yürütülmüş ve Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvan Çalışmaları Komitesi tarafından onaylanmıştır. C57BL / 6 (B6) ve BALB / c farelerinden (20-25 g ağırlığında) gelen kalpler, cinsiyete uygun B6 alıcılarına (6-8 haftalık) nakledildi. Fareler ticari kaynaklardan elde edilmiştir (bakınız Malzeme Tablosu). İskemi-reperfüzyon hasarına bağlı hücresel yanıtları değerlendirmek için sinjenik transplantasyonlar yapıldı ve greft toleransı ve reddinde rol oynayan immün mekanizmaları araştırmak için allojenik transplantasyonlar yapıldı. B6 lizozim M....

Sonuçlar

Bu fare servikal heterotopik kardiyak transplantasyon modeli, laboratuvarımızda yaklaşık %97'lik bir sağkalım oranı ile 1.000'den fazla nakil gerçekleştirmek için kullanılmıştır. Başarı oranı, farelerde diğer servikal heterotopik kalp nakli teknikleri kullanılarak yapılan önceki raporlardan biraz daha yüksektir^10,11,20. Bu potansiyel olarak, alıcıya kan akışının bol miktarda geri dönüşünü sağlam.......

Tartışmalar

Bu tekniği kullanarak, fare heterotopik servikal kalp nakli, deneyimli bir mikrocerrah tarafından 40 dakikadan daha kısa bir sürede ve giriş seviyesi bir mikrocerrah tarafından yaklaşık 60 dakika içinde gerçekleştirilebilir. Servikal kalp nakli çok sayıda hayvan modelinde incelenmiş olsa da, bir fare modeli, çok sayıda iyi tanımlanmış genetik suş, genetik değişiklik yetenekleri ve monoklonal antikorlar da dahil olmak üzere çok sayıda reaktifin mevcudiyeti nedeniyle altın standart olmaya devam et.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
6-0 braided silk ties	Henry Schein Inc	7718729
0.75% Providone iosine scrub	Priority Care Inc	NDC 57319-327-0
10-0 nylon suture	Surgical Specialties Corporation	AK-0106
655-nm nontargeted Q-dots	Invitrogen	Q21021MP
70% Ethanol	Pharmco Products Inc	111000140
8-0 braided silk ties	Henry Schein Inc	1005597
Adson forceps	Fine Science Tools Inc	91127-12
BALB/c and C57BL/6 mice (6-8 weeks)	Jackson Laboratories
Bipolar coagulator	Valleylab Inc	SurgII-20, E6008/E6008B
Carprofen (Rimadyl) injection	Transpharm	35844
Carprofen (Rimadyl) oral chewable tablet	Transpharm	38995/37919
Custom-built 2P microscope running ImageWarp acquisition software	A&B Software
Dumont no. 5 forceps	Fine Science Tools Inc	11251-20
Fine vannas style spring scissors	Fine Science Tools Inc	15000-03
GraphPad Prism 5.0	Sun Microsystems Inc.
Halsey needle holder	Fine Science Tools Inc	91201-13
Halsted-Mosquito clamp curved tip	Fine Science Tools Inc	91309-12
Harvard Apparatus mouse ventilator model 687	Harvard Apparatus	MA1 55-0001
Heparin solution (100 U/mL)	Abraxis Pharmaceutical Products	504031
Imaris	Bitplane
Ketamine (50 mg/kg)	Wyeth	206205-01
Microscope—Leica Wild M651 × 6–40 magnification	Leica Microsystems
Moria extra fine spring scissors	Fine Science Tools Inc	15396-00
Ohio isoflurane vaporizer	Parkland Scientific	V3000i
Qdots	ThermoFisher	1604036
S&T SuperGrip Forceps angled tip	Fine Science Tools Inc	00649-11
S&T SuperGrip Forceps straight tip	Fine Science Tools Inc	00632-11
Sterile normal saline (0.9% (wt/vol) sodium chloride	Hospira Inc	NDC 0409-4888-20
Sterile Q-tips (tapered mini cotton tipped 3-inch applicators)	Puritan Medical Company LLC	823-WC
Surflow 20 gauge 1/4-inch Teflon angiocatheter	Terumo Medical Corporation	SR-OX2032CA
Surflow 24 gauge 3/4-inch Teflon angiocatheter	Terumo Medical Corporation	R-OX2419CA
ThermoCare Small Animal ICU System (recovery settings 3 L/min O2, 80 °C, 40% humidity)	Thermocare Inc
VetBond	Santa Cruz Biotechnology SC361931	NC0846393
Xylazine (10 mg/kg)	Lloyd Laboratories	139-236