JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Mevcut protokol, trofoblast hücreleri gibi hücrelerin, hücre dışı bazal membran matrisinin bir tabakası üzerinde kılcal benzeri yapılar halinde organize olduğu klasik in vitro anjiyogenez-tüp oluşum testinde oluşan tüp benzeri yapıların geri kazanılmasına izin verir. Geri kazanılan yapılar, çeşitli biyokimyasal analizler için RNA ve protein izolasyonu için kullanılır.

Özet

Plasenta gelişimi sırasında, ekstravillöz trofoblast (EVT) hücreleri, mezenkimal ila endotel benzeri geçiş süreci ile uterus spiral arterlerini yeniden şekillendirmek için maternal desiduayı istila eder. Geleneksel olarak, bu işlem, hücrelerin polimerize bir bazal membran preparatı üzerine ekildiğinde kendilerini tüp benzeri yapılar halinde organize ettikleri bir in vitro tüp oluşturma testi ile değerlendirilir. Yapıların fotomikrograflarında çeşitli yapısal özellikler ölçülebilse de, EVT'nin endotel tipi fenotipe gerçek bağlılığını değerlendirmek için hücre ekstraktlarının biyokimyasal analizi gereklidir. RNA ve/veya protein ekstraktları elde etmek için hücrelerin kültür kabından kazınması bir alternatif değildir, çünkü tüp benzeri yapılar polimerize bazal membrandan gelen proteinlerin büyük kısmı tarafından ciddi şekilde kontamine olur. Bu nedenle, hücre ekstraktlarının hazırlanmasından önce hücreleri bazal zar proteinlerinden ayırmak için bir stratejiye ihtiyaç vardır. Burada, tüp benzeri yapıları in vitro tüp oluşturma testinden ve ardından biyokimyasal tekniklerle yapılan analizden kurtarmak için basit, hızlı ve uygun maliyetli bir yöntem sunulmaktadır. Bir EVT hücre hattı olan HTR8/SVneo hücreleri tarafından oluşturulan tüp benzeri yapılar, etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ile takviye edilmiş PBS ile kısa bir inkübasyon yoluyla polimerize bazal membrandan serbest bırakıldı. Seri yıkamalardan sonra, saflaştırılmış tüp benzeri yapılardan oluşan kullanıma hazır bir pelet elde edilebilir. Bu pelet daha sonra RNA ve protein özleri elde etmek için işlenebilir. qPCR analizi, kontrol hücrelerine kıyasla EVT'den türetilmiş tüp benzeri yapılarda iki endotel hücre belirteci olan VE-kaderin ve alfa v-integrin'in indüklenmiş ekspresyonunu kanıtladı ve bu, immünofloresan ile değerlendirilen endotel hücre belirteci CD31'in indüksiyonu ile tutarlıydı. Tüp benzeri yapıların protein ekstraktlarının Western blot analizi, transfekte edilmiş HTR8 / SVneo hücrelerinde RECK'in aşırı ekspresyonunu ortaya çıkardı. Bu nedenle, bu basit yöntem, RNA'ların ve protein ekspresyonunun sonraki analizi için in vitro tüp oluşturma testinden hücre ekstraktlarının elde edilmesine izin verir.

Giriş

Gebeliğin başarısı plasentanın düzgün gelişmesine ve plasental dolaşımın kurulmasına bağlıdır. Bu süreçle ilişkili en önemli olaylardan biri, uterus spiral arterlerinin (uSA)1, yüksek dirençli ve düşük akışlı bir kan damarından düşük dirençli ve yüksek akışlı kan damarına yeniden şekillenmesi ve maternal kanın plasentaya2 perfüzyonunun arttırılmasıdır.

uSA'nın yeniden modellenmesi, blastosistten türetilen özel trofoblast hücreleri ile sağlanır. Embriyonun implantasyonundan sonra, fetal ekstravillöz trofoblast (EVT'ler) implantasyon bölgesinden maternal desidua ve uterus yoluyla uSA3'e doğru göç eder. Bir kez orada, EVT'ler maternal vasküler ilişkili düz kas hücrelerinin (VSMC) ve endotel hücrelerinin (EC) göçünü ve apoptozunu indükler4. Daha sonra, EVT'ler, damarın7 VSMC ve EC'sinin yerini alarak, mezenkimal ila endotel benzeri geçiş (MELT) yoluyla endotel benzeri bir fenotip kazanır5,6.

Preeklampsi (PE), maternal hipertansiyonun başlangıcı ile karakterize, proteinüri ve/veya maternal son organ disfonksiyonunun diğer semptomlarının eşlik ettiği, gebeliğin 20. haftasından itibaren tespit edilengebeliğe özgü bir sendromdur. PE'nin kesin etiyolojisi tam olarak anlaşılamamış olsa da, en çok kabul gören hipotez, plasentaya kalıcı bir yetersiz kan akışı durumu oluşturan, iskemi-reperfüzyon, hipoksi ve oksidatif stres ile plasental hasarın eşlik ettiği, plasental faktörlerin maternal dolaşıma salınmasını aktive eden ve PE9'un karakteristik maternal semptomlarını tetikleyen kusurlu bir uSA yeniden şekillenmesi9 ile ilgilidir. Bu nedenle, trofoblast hücreleri tarafından uSA'nın yeniden modellenmesinde yer alan temel hücresel ve moleküler mekanizmaların belirlenmesi kritik öneme sahiptir.

EVT'lerin MELT'inin değerlendirilmesi, klasik olarak, tek tek hücrelerin kan damarına benzeyen iki boyutlu yapılarda göç ettiği ve kendilerini organize ettiği in vitro bazal membran matris tüp oluşturma testi10 ile gerçekleştirilir. Bu protokol, EVT'lerin hücre hatlarının, genellikle bazal membran matrisi olarak adlandırılan, Engelbreth-Holm-Swarm fare sarkomundan ekstrakte edilen, Laminin ile zenginleştirilmiş çözünmüş bir hücre dışı matristen oluşan ticari olarak temin edilebilen bir hücre dışı matris olan ince bir polimerize hücre dışı matris tabakası üzerine tohumlanmasını gerektirir, ayrıca Kollajen IV, heparan sülfat proteoglikanları ve entaktin / nidogen10. Oluşturulan tüp benzeri yapıların analizi genellikle fotomikrograflarda yerleşik özelliklerin tanımlanması (örneğin, dal sayısı veya ağ indeksi) ve bunların ImageJ yazılımı (Anjiyogenez analizörü eklentisi) ile nicelleştirilmesi ile elde edilir11. Bu yöntem, tüp benzeri yapılarınoluşumunu tanımlamak için yaygın olarak kullanılmasına rağmen, 12,13,14, hücrelerin organizasyonunun karakterizasyonu ile sınırlıdır, çünkü bu yapıların biyokimyasal analiz için toplanması mümkün değildir 12,13,14, büyük ölçüde hücreleri/tüpleri yüksek miktarda farklı protein içeren bazal membran matrisinden ayırmanın imkansızlığı nedeniyle. Bu nedenle, hücresel proteinlerin ekspresyonunu doğru bir şekilde anlamak için gerekli olan hücre kaynaklı proteinlerin gerçek katkısını belirlemek mümkün değildir. Bu ekstraktlardaki proteinlerin çoğu bazal membran matrisinden geleceğinden, hücresel proteinlerin temsili çok düşük olduğu ortaya çıkar, bu nedenle büyük miktarda protein, proteinlerin çözünürlüğünü ve transferini etkileyen Western blot ile analiz için bir SDS sayfalı jele yüklenmelidir. Doğru analizi neredeyse imkansız hale getirmek. Bu bazal membran matrisinden türetilmiş proteinlerin fazlalığı, daha ileri analizler için gerekli saflıkta RNA'nın ekstraksiyonunu da derinden etkiler.

Bu raporda, hücre ekstraktlarının biyokimyasal analizi için işlenebilecek bazal membran matrisinden tüp benzeri yapıların salınmasına izin veren PBS-EDTA işlemine dayanan basit, hızlı ve uygun maliyetli bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem yüksek miktarda biyomolekül, RNA ve protein verir ve klasik biyokimyasal analiz, qPCR ve Western blot ile uyumludur. Bu stratejinin, hücre altı fraksiyonlama, epigenetik belirteçlerin pirosekanslama veya kromatin immün çökeltme testleri ile belirlenmesi gibi diğer deneylere de uygulanabileceğini öneriyoruz. Kısaca protokol, bazal membran matrisini çözmek için 4 ° C'de 50 mM EDTA ile desteklenmiş PBS ile kültür kabındaki tüp benzeri yapıların inkübe edilmesinden oluşur. Bu basit inkübasyon ile, boru şeklindeki yapılar süspansiyon halinde kalır, bu da EDTA'yı ve seyreltilmiş bazal membran matrisinin fazlalığını ortadan kaldırmak için PBS ile bir dizi yıkamadan sonra, boru şeklindeki yapıların ve/veya tek tek hücrelerin kullanıma hazır bir peleti olarak elde edilebilir. Sonraki bölümler, MELT testi ve tüp benzeri yapıların geri kazanımı için protokolleri açıklamaktadır.

Protokol

1. Test için hazırlık

NOT: Tüm adımlar steril koşullar altında gerçekleştirilmelidir. Tüm plastik malzemeler steril ve yepyeni olmalıdır. Cam şişeler otoklavlama ile sterilize edilmelidir. Tüm malzemeler laminer akış kabininde kullanılmadan önce %70 etanol çözeltisi ile sterilize edilmelidir. Minimum hücre kültürü ortamı (RPMI), fetal sığır serumu (FBS) ile takviye edilmeden önce 0.22 μM filtre ile süzülerek sterilize edilmelidir. Biyolojik olarak tehlikeli atıklarla çalışırken daima kişisel koruyucu ekipman kullanın (laboratuvar önlüğü, eldivenler, arkadan bağlanmış uzun saçlar vb.).

  1. Laminer akış kabininde steril bir cam şişeye sterilize edilmiş RPMI 1640 ve FBS ekleyerek RPMI-1640 ortamını (%5 FBS tam büyüme ortamı) hazırlayın. % 5 FBS çözeltisi için 190 mL RPMI-1640 ve 10 mL FBS ekleyin. RPMI-1640 Media-5% FBS'yi sıcaklık kontrollü bir su banyosunda 37 °C'de ısıtın.
  2. Bodrum membran matrisini aşağıdaki gibi hazırlayın. Şişeyi 3 ila 4 saat boyunca 4 °C'ye yerleştirerek bazal membran matrisini yavaşça çözün ve MW-6 kabını kullanmadan önce 1 saat -20 °C'de soğutun. Çözüldükten sonra, bazal membran matrisini buz üzerinde tutun. Laminer akış kabininde, bazal membran matrisini buz gibi soğuk RPMI1640 FBS olmadan %70'e kadar seyreltin.
    NOT: Bazal membran matrisi kullanıma kadar -80 °C'de saklanmalıdır. Çözüldükten sonra, matrisin erken polimerizasyonunu önlemek için her şey 4 ° C'de çalışılmalıdır.
  3. 50 mM EDTA'lık bir nihai konsantrasyona ulaşmak için uygun miktarda EDTA'yı PBS'de çözerek PBS-EDTA'yı hazırlayın. PBS-EDTA'yı 4 °C'de tutun.

2. Tüp oluşumu testi

  1. Adım 1.2'de gösterildiği gibi seyreltilmiş bazal membran matrisinden 60 μL/cm2 ekleyin. bulaşıklara. Boru şeklindeki yapıların nicelleştirilmesi için gereken mikro fotoğrafa müdahale eden kabarcıklardan kaçının.
    NOT: Çok kuyulu-6 (MW6, 9,6 cm2 alana sahip) durumunda, hacim 580 μL bazal membran matrisi -%70'tir.
  2. Bazal membran matrisi polimerizasyonunu desteklemek için bazal membran matrisli kapları 2 saat boyunca bir hücre inkübatörüne (%5 CO2 ve 37 °C) aktarın.
    NOT: Polimerizasyonun son 1 saati boyunca, hücreler tohumlanmaya hazır olduğunda 2 saatlik polimerizasyonu tamamlamak amacıyla, tahlil için kullanılacak hücrelerin hücre süspansiyonunu hazırlayın.
  3. Polimerize bazal membran matrisi üzerinde ve ayrıca kontrol olarak kaplanmamış tabaklar üzerinde 2 mL RPMI-1640-% 5 FBS içinde seyreltilmiş 80.000 hücre /cm2 HTR8 / SVneo (EVT'ler hücre hattı) tohumlayın. Bazal membran matrisini tahrip etmekten kaçınmak için hücreleri kuyu duvarı boyunca dikkatlice tohumlayın.
    NOT: Matrigel üzerinde homojen bir hücre dağılımı sağlayın, aksi takdirde daha az hücrenin olduğu veya hücrelerin aşırı kalabalık olduğu alanlarda tüpler oluşmaz.
  4. Tohumlanan hücreleri hücre inkübatörüne aktarın ve %5 CO2 ve 37 ° C'de 12 saat, 24 saat ve 48 saat kültürleyin.
    NOT: Genellikle, boru şeklindeki yapıyı analiz etmek için 24 saat yeterlidir, ancak bu işlem sırasında kinetik protein veya RNA ekspresyonu gerekiyorsa, hücreleri 3 saat, 6 saat, 12 saat, 24 saat ve 48 saat için inkübe edin.

3. Bazal membran matrisinden hücre geri kazanımı

  1. Seçilen inkübasyon süresine ulaştığında (örneğin, 12 saat, 24 saat, 48 saat), üzerinde tercih edilen ölçümü gerçekleştirmek için şartlandırılmış ortamı geri kazanın.
  2. Hücre kalıntılarını gidermek için hücreleri buz gibi soğuk 1x PBS, en az 3x ile nazikçe yıkayın. Mikrofotograf gerekiyorsa, her kuyucuğa 1 mL soğuk PBS dökün ve 10 dakika içinde fotoğraf çekin.
  3. PBS'yi çıkarın ve her bir oyuğa 700 μL PBS-EDTA ekleyin ve plakayı buz üzerinde 3-5 dakika inkübe edin.
    NOT: PBS-EDTA, bazal membran matrisini çözecek, böylece tüm hücre ağı askıda kalacaktır.
  4. Boru şeklindeki ağın süspansiyonunu 1.000 mL'lik bir tüpte bir mikropipet (p1.5) ile nazikçe geri kazanın.
  5. Süspansiyonu 1,000 ° C'de 10 dakika boyunca 4 x g'da santrifüjleyin. Sonunda, beyaz bir hücre peleti görünmelidir.
  6. Tüpü ters çevirerek süpernatanı ortadan kaldırın ve mümkün olduğunca kuru bırakmaya çalışın.
  7. 4 ° C'de 1 mL PBS ekleyin ve hücreleri yıkamak ve çözünmüş bazal membran matrisini ve EDTA'yı çıkarmak için hücre peletini bir p.1000 mikropipet ile nazikçe yeniden süspanse edin. En az 2 kez tekrarlayın.
    NOT: Bu yıkama adımları kritiktir. Kalan bazal membran matrisi, hücre peleti üzerinde viskoz bir tabaka olarak gözlemlenebilir. Bazal membran matris tabakasının çoğu ortadan kalkana kadar yıkamaları tekrarlayın.
  8. Son yıkamadan sonra, hücre peletini doğrudan protein veya RNA ekstraksiyonu için kullanın. Alternatif olarak, peleti PBS'nin 1 mL'sinde yeniden süspanse edin ve gereksinimlere bağlı olarak farklı tüplere dağıtın: örneğin, RNA ekstraksiyonu için 300 μL ve protein ekstraksiyonu için kalan 700 μL, vb.
  9. Hücre peletini elde etmek için tüpleri 1.000 x g'da 4 ° C'de 10 dakika santrifüjleyin.
    NOT: PBS'de hücre süspansiyonunun bölünmesi, örneğin 1: 1, 1: 2 veya 1: 3 / RNA: protein gibi istenen oranda olabilir. Burada 1:2 RNA:protein oranı kullanılır. Bu noktada, hemen ihtiyaç duyulmadığı takdirde hücre peletlerini mümkün olduğunca kuru olarak -80 °C'de bir aya kadar saklayın.

Sonuçlar

Bu raporda açıklanan protokolü değerlendirmek için önce tüp benzeri yapıları oluşturduk. Şekil 1A'da gösterildiği gibi, HTR8/SVneo hücreleri (EVT), bazal membran matrisi üzerinde 12 saat, 24 saat ve 48 saat inkübasyonda tüp benzeri yapılar üretti. HTR8 / SVneo'nun test edilen zaman aralığında plastik üzerine ekildiği kontrol kaplarında tüp benzeri yapılar gözlenmedi. Fotomikrograf elde edildikten sonra, tüp yapılarının çeşit...

Tartışmalar

Tüp benzeri oluşum testi, anjiyojenik süreçlerde hücreler arasındaki etkileşimi değerlendirmek için yaygın olarak kullanılan bir araçtır19. Burada, plasentasyon6 sırasında kritik bir olay olan vasküler uterin damarların yeniden şekillenmesinde EVT'ler gibi Endotel olmayan hücrelerin anjiyojenik özelliklerini gösteriyoruz. Tüp benzeri oluşum, hücreler arasındaki etkileşim hakkında çok bilgilendirici olsa da, anjiy...

Açıklamalar

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

JG için finansman kaynağı FONDECYT 1221362, ANID. Convocatoria Nacional Subvención a la Instalación en la Academia, ANID, No. ICW için SA77210087.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Cell Culture Dishes laboratory (100mm)Nest704201
Cell Culure 6-PlateNest0917A
Cell Culure MicroscopeOlympusCKX53SF
CentrifugeThermo ScientificMega Fuge 8R
Circular Analog Magnetic Hotplate StirrerSCI LogexMS-H-S
CO2 IncubatorThermo ScientificHERA cell Vios 160i
Cultrex PathClear Basement Membrane Extract (2 x 5 mL) R&D SYSTEMSRD.3432-010-01
Dry Heat IncubatorsHESMK 200-1
Ethylenediaminetetraacetic Acid (EDTA)WinklerBM-0680
Fetal Bovine Serum Heat InactivatedCapricorn ScientificFBS-HI-12A
Freezer VerticalDEAWOOFF-211VSM
HTR8/SVneoATCCCRL-3271
Laboratory bench rockerTCLS2025
Laminar flow cabinetBIOBASEBSC-1300
Luminescent Image AnalyzerHealth CareImage Quant LAS 500
Matrigel Matrix Growth Factor Reduced, Phenol Red-Free 10 ml R&D SYSTEMS356231
Micro CentrifugeSCI LogexD1008
Micropipete Lambda Plus, P10Corning4071
Micropipete Lambda Plus, P1000Corning4075
Micropipete Lambda Plus, P2Corning4070
Micropipete Lambda Plus, P20Corning4072
Micropipete Lambda Plus, P200Corning4074
Microscope Camera-SetMOTICMoticam 2300
Pen-strep-amphot b/AntimBiological Industries03-029-1B
pHmeterHANNAHI2221
Phophate Buffer Saline 10X (PBS10X)Corning46-013-CM
Pippete micro tip with filter, sterile, P10JetbiofilPMT231010
Pippete micro tip with filter, sterile, P1000JetbiofilPMT252000
Pippete micro tip with filter, sterile, P200JetbiofilPMT231200
PowerPacBIO-RADE0203
RadwagTCLWTB 200
Remote water Purification SystemMilliporeDirect-Q 5 UV
RPMI 1640 Medium, powderGibco31800-022
Thermal CyclerBioer TechnologyTC-96/G/H(b)C
Thermoregulated bathThermo ScientificTSGP10
Trypsin EDTA 10XCapricorn ScientificTRY-1B10
Ultrasonic ProcessorsSONICSVCX130PB
Vacuum PumpHESROCKER 300
Vortex MixerThermo ScientificLP Vortex Mixer

Referanslar

  1. Cartwright, J. E., Fraser, R., Leslie, K., Wallace, A. E., James, J. L. Remodelling at the maternal-fetal interface: relevance to human pregnancy disorders. Reproduction. 140 (6), 803-813 (2010).
  2. Burton, G. J., Woods, A. W., Jauniaux, E., Kingdom, J. C. P. Rheological and Physiological Consequences of Conversion of the Maternal Spiral Arteries for Uteroplacental Blood Flow during Human Pregnancy. Placenta. 30 (6), 473-482 (2009).
  3. Huppertz, B. The anatomy of the normal placenta. J Clin Pathol. 61 (12), 1296-1302 (2008).
  4. Bulmer, J. N., Innes, B. A., Levey, J., Robson, S. C., Lash, G. E. The role of vascular smooth muscle cell apoptosis and migration during uterine spiral artery remodeling in normal human pregnancy. FASEB J. 26 (7), 2975-2985 (2012).
  5. Paul, M., Chakraborty, S., Islam, S., Ain, R. Trans-differentiation of trophoblast stem cells: implications in placental biology. Life Sci Alliance. 6 (3), 202201583 (2023).
  6. Pollheimer, J., Vondra, S., Baltayeva, J., Beristain, A. G., Knöfler, M. Regulation of placental extravillous trophoblasts by the maternal uterine environment. Front Immunol. 9, 1-18 (2018).
  7. Sato, Y. Endovascular trophoblast and spiral artery remodeling. Mol Cell Endocrinol. 503, 110699 (2020).
  8. Huppertz, B. The critical role of abnormal trophoblast development in the etiology of preeclampsia. Curr Pharm Biotechnol. 19 (10), 771-780 (2018).
  9. Khong, T. Y., et al. Sampling and definitions of placental lesions Amsterdam placental workshop group consensus statement. Arch Pathol Lab Med. 140 (7), 698-713 (2016).
  10. Kleinman, H. K., Martin, G. R. Matrigel: Basement membrane matrix with biological activity. Semin Can Biol. 15, 378-386 (2005).
  11. Carpentier, G., et al. Angiogenesis analyzer for ImageJ - A comparative morphometric analysis of "Endothelial Tube Formation Assay" and "Fibrin Bead Assay.". Sci Rep. 10 (1), 1-13 (2020).
  12. Arderiu, G., Peña, E., Aledo, R., Badimon, L. Tissue factor-Akt signaling triggers microvessel formation. J Thrombosis Haemostasis. 10 (9), 1895-1905 (2012).
  13. Leung, K. W., et al. Ginsenoside Rb1 inhibits tube-like structure formation of endothelial cells by regulating pigment epithelium-derived factor through the oestrogen β receptor. British J Pharmacol. 152 (2), 207-215 (2007).
  14. Xue, L., Greisler, H. P. Angiogenic effect of fibroblast growth factor-1 and vascular endothelial growth factor and their synergism in a novel in vitro quantitative fibrin-based 3-dimensional angiogenesis system. Surgery. 132 (2), 259-267 (2002).
  15. Ji, L., et al. Placental trophoblast cell differentiation: Physiological regulation and pathological relevance to preeclampsia. Mol Asp Med. 34 (5), 981-1023 (2013).
  16. Liu, C. Y., Lin, H. H., Tang, M. J., Wang, Y. K. Vimentin contributes to epithelial-mesenchymal transition ancer cell mechanics by mediating cytoskeletal organization and focal adhesion maturation. Oncotarget. 6 (18), 15966-15983 (2015).
  17. Kolesnichenko, O. A., et al. Endothelial progenitor cells derived from embryonic stem cells prevent alveolar simplification in a murine model of bronchopulmonary dysplasia. Front Cell Dev Biol. 11, 1209518 (2023).
  18. Gutiérrez, J., et al. Preeclampsia associates with RECK-dependent decrease in human trophoblasts migration and invasion. Placenta. 59, 19-29 (2017).
  19. Ucuzian, A. A., Greisler, H. P. In vitro models of angiogenesis. World J Surg. 31 (4), 654-663 (2007).
  20. Rand, M. D., et al. Calcium depletion dissociates and activates heterodimeric Notch receptors. Mol Cell Biol. 20 (5), 1825-1835 (2000).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Trofoblast H cre Geri Kazan mAnjiyogenezT p Olu um DeneyiEkstravil z TrofoblastEndotel Benzeri Ge iBiyokimyasal AnalizRNA EkstraksiyonuProtein EkstraksiyonuVE kaderinAlphav integrinCD31mm nofloresanWestern BlotHTR8 SVneo H creleriRECK A r fadesi

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır