Başlamadan önce <ol><li> Bütün kültürler, 25 ° C&#39;de yetiştirilebilir. </li><li> HL3.1 diseksiyonu tampon önceden hazırlanmış olabilir. HL3.1 50 ml&#39;lik bir kısım alın ve buz üzerinde tutmak. </li><li> HL3.1 15 ml taze% 3.5 Formaldehit hazırlayın. Buz üzerinde tutun. </li></ol> Larvaların Diseksiyon <ol><li> Diseksiyon plaka HL3.1 soğuk bir damla koyun. Bu daha kolay çalışmak için hayvan kurutma ve sersemletici hayvan tutacaktır. </li><li> Uzun forseps kullanarak, dolaşıp üçüncü instar larva seçin ve HL3.1 açılan yerleştirin. </li><li> Öncelikle, bir minutien pin kavramak için kısa forseps kullanabilir. Posterior spiracles arasında pin yerleştirin. Hayvan genellikle kendini germe ve ağız kanca yakın larva başkanı kare bir pin yerleştirmek için daha kolay hale pin sürünerek çalışacağız. Hayvan boyuna uzat. Bu kesim sırasında elde edebilirsiniz maruz kalan vücut duvarının miktarını en üst düzeye çıkarmanıza yardımcı olacaktır. Not: ilk baş pin seçerseniz, pim etrafında hayvan vücudu sarmak ya da zor pin ileri ve geri vücut kırbaç. Genellikle HL3.1 kaldırılması ve yine çarpıcı yeni bir soğuk damla hayvan koyarak bu sayaç. Ambidextrous bilim adamı aynı zamanda sadece hayvan yakala ve bir yerde tutun. </li><li> Yaylı makas kullanma larva dorsal tarafta posterior pin sadece ön yatay bir kesi yapmak. Kesi içine bir bıçak, makas ve larva rostral sonuna doğru dorsal orta hat boyunca dikey bir kesim yapmak. Hayvan kürsüden, sol ve sağ pin yatay kesiler olun. Not: bitmiş sonucu rostro ekseni boyunca larva dorsal tarafında I gibi görünmelidir. </li><li> Organları çıkarın. Larva HL3.1 birkaç ek damla koyarak başlayın. Bu organlar vücudun çok daha kolay bunları kaldırmak için izin float sağlayacaktır. İlk olarak, trakeal sistemini kaldırmak. İkincisi, organların geri kalanı kapmak için forseps kullanabilir ve bunları kaldırmak. </li><li> 3. adımı sırasında vücut duvarında, bir sol flep ve sağ flep yaptı. Pin vücut duvarı hem yatay hem de dikey olarak uzatmak için emin olmak için bir saat sipariş kapakları. </li></ol> Tespit 25 dakika HL3.1% 3.5 formaldehit her hayvan sabitleyin. 5 dakika boyunca iki kez HL3.1 hayvan yıkayın. Depolama Pimleri çıkarın ve 1,5 ml tüp 1X PBS içeren bir larva transferi. Erimiş floresan etiketlerini kullanarak NMJ görüntü planlıyorsanız, iki gün içinde görüntü hayvanlar. 4 ° C&#39;de bir hafta için disseke larvaları saklayabilirsiniz Temsilcisi sonuçları Uygun bir şekilde diseke Drosophila larva birkaç anahtar bileşenleri vardır. Birincisi, özellikle kaslar, kasların 4, 6, ve 7 zarar görmemesi için ekstra dikkat etmelisiniz. Bu çalışma için en popüler kas ve zarar görmüş, fileto hazırlık atmak ve başka bir hayvan teşrih. İkincisi, bir hayvan, her bir kas ve NMJ maksimum ayırt edilmesi, böylece gergin olduğunu emin olmalısınız.

<ol>
	<li>Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+the+larval+neuromuscular+junction+in+Drosophila+Melanogaster.">Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster.</a> J. Physiol. 262, 189-214 (1976).</li><li>Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotypic+morphology+of+glutamatergic+synapses+on+identified+muscle+cells+of+Drosophila+larvae.">Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae.</a> J Neurosci. 9, 710-725 (1989).</li><li>Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+neuromuscular+junction:+a+model+system+for+studying+synaptic+development+and+function.">The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function.</a> Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).</li><li>Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+that+control+neuromuscular+specificity+in+Drosophila.">Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila.</a> Cell. , 73-1137 (1993).</li><li>Feng, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+minimal+hemolymph-like+solution,+HL3.1,+for+physiological+recordings+at+the+neuromuscular+junctions+of+normal+and+mutant+Drosophila+larvae.">A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae.</a> J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).</li></ol>

Bu videoda gösterilen diseksiyon tekniği çeşitli deneysel teknikler Drosophila larvaları hazırlamak için kullanılabilir. Flüoresan protein etiketleri varsa, larva monte ve anında görüntülü olabilir. Aksi takdirde, immün belirli sinaptik bölmeleri işaretlemek için yapılabilir. Buna ek olarak, elektrofizyoloji kolayca nörotransmisyon işleyişini değerlendirmek için disseke larvaları olabilir. Drosophila NMJ temel yapısı ve işlevi aydınlatılan ilk ...

HL3 Diseksiyon Tampon: (mM) 70 NaCl, 5 KCl, 0.2 CaCl2, 20 MgCl2, 10 NaHCO3, 5 trehaloz, sakaroz, 115 ve 5 Hepes, pH 7.3.<br /<br /&gt; Sylgard Diseksiyon Plaka: yavaşça karıştırın (kabarcıkları önlemek için) bir beherdeki 10:01. Petri kabı (herhangi bir boyutta) içine karışımı dökün. SylGard 37C inkübatör geceleme tedavisi için izin ver.

drosophila larval nmj dissection

<em&gt; Drosophila</em&gt; Nöromüsküler bileşke (NMJ), sinaptik geliştirme ve plastisite çalışma için kullanılan bir model sistem. Yaygın kullanımı<em&gt; Drosophila</em&gt; Motor sistemi, yüksek erişilebilirlik nedeniyle. Bu tek hücreli çözünürlük ile analiz edilebilir. Düzenleme periferik vücut duvarı içinde bilinen hemisegment başına 30 kas vardır. Toplam 35 motor nöronların yüksek sadakat olan bir model bu kaslara takın. Moleküler biyoloji ve genetik kullanarak, transgenik hayvanlar veya mutantlar oluşturabilirsiniz. Sonra, bir gelişimsel sonuçları NMJ morfolojisi ve fonksiyonu üzerine çalışma. Çalışma için NMJ erişmek için, her larva dikkatlice incelemek için gereklidir. Bu yazıda, düzgün bir şekilde incelemek için nasıl gösterilmektedir<em&gt; Drosophila</em&gt; Vücut duvarı olduğu gibi bırakarak, tüm iç organları kaldırarak NMJ çalışma larvaları. Bu teknik, görüntüleme, immünhistokimya, ya da elektrofizyoloji larvaları hazırlamak için uygundur.

Watch this Scientific Journal Video about Drosophila Larval NMJ Dissection at JoVE.com

Drosophila Larval NMJ Dissection

Bu protokol incelemek için nasıl gösterir<em&gt; Drosophila</em&gt; Immünhistokimya ve / veya nöromüsküler kavşak görüntüleme için hazırlık larvaları.

Drosophila Larvaların NMJ Diseksiyon

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Research

JoVE Journal

Biology

34.6K Görüntüleme.  Columbia University College of Physicians and Surgeons. Bu protokol incelemek için nasıl gösterir Drosophila Immünhistokimya ve / veya nöromüsküler kavşak görüntüleme için hazırlık larvaları.