3D baskılı biyoreaktörü kullanarak numuneyi perfüzyon kültürü için hazırlamak. Bir laminer akış kabininde, izole edilmiş domuz karotis arter örneklerini soğuk taşıma ortamına yerleştirin. Bir neşter bıçağı kullanarak fazla bağ dokusunu çıkarın ve dokunun uçlarını kesin.
Daha sonra mendili soğuk taşıma ortamında iki kez yıkayın. Daha sonra, kapsamlı bir son yıkama için dokuyu en az 30 dakika boyunca bir orbital çalkalayıcı üzerinde taşıma ortamına yerleştirin. Bundan sonra, yıkanmış arterin dallanmayan bir bölümünü, iki dikenli yem bağlantısı kullanarak fabrikasyon biyoreaktör sistemine bağlayın.
Ve vasküler silikon bağlardan yapılmış bir damar bağı kullanarak sabitleyin. İlk yem bağlantısına bağlı küçük bir şırınga kullanarak, açıklığını sağlamak için medyayı arterden yavaşça akıtan. Arteri fabrikasyon eke sabitledikten sonra, reaksiyon alanını perfüzyon ortamı ile doldurun.
Ardından, luminal sirkülasyon döngüsünü dikkatlice medya ile doldurun ve kalan havayı sistemden çıkarın. Son olarak, reaksiyon alanını monte edilmiş perfüzyon sistemine bağlayarak dolaşımı tamamlayın. Perfüzyon kültürünü gerçekleştirmek için perfüzyon sistemini bir inkübatöre yerleştirin.
Peristaltik bir pompaya bağladıktan sonra, basınç sensörleri gibi ek toplama sistemlerini bağlayın. Sistemin dakikada yaklaşık 10 ila 15 mililitrelik düşük bir ortam akış hızıyla gece boyunca dengelenmesine izin verin. Ertesi gün, dakikada 35 mililitrelik bir nihai akış hızı elde edilene kadar akışı kademeli olarak artırın.
Her üç günde bir, kullanılmış ortamı toplamak için pompaya daha yakın olan ortam değişim portuna taze medya içeren bir şırınga ve rezervuara daha yakın porta boş bir şırınga bağlayarak ortamın% 50'sini değiştirin. Deneyden sonra, steril cerrahi makas kullanarak, biyoreaktöre bağlı doku uçlarını keserek reaksiyon odasından dokuyu alın. Endotelyal ve düz kasa özgü belirteçler kullanılarak yapılan konfokal görüntüleme, bir arterin normal yapısının, hasat zamanından başlayarak temizleme ve işlemeye ve hatta perfüzyon kültüründen sonra bile iyi korunduğunu ve korunduğunu ortaya koydu.
Bununla birlikte, işleme sırasında yanlış kullanım, kültürün önünde endotel kaybına neden oldu ve yüksek akışın aniden başlaması gibi fizyolojik olmayan kültür koşullarının uygulanması luminal hasar gösterdi. Hasat sırasında ve yedi günlük perfüzyon kültüründen sonra hematoksilen ve eozin boyaması ve immünofloresan boyama kullanılarak dokunun histolojik değerlendirmesi, damar duvarındaki hücrelerin morfolojisinin ve genel dağılımının baştan sona korunduğunu ortaya koydu.
