Yeni pompasız çok kanallı akış kültürü sistemini kurmak için, medya rezervuar modülünü veya MRM'yi monte ettikten sonra, boru tertibatlarını içine yerleştirin ve MRM'yi ısıtıcıya yerleştirin. Isıtıcıyı yerine sabitledikten sonra, doku odası tertibatlarını veya TCA'ları perfüzyon odası modülüne veya PCM'ye yerleştirmeye devam edin. TCA yerleştirme aracını kullanarak, sekiz TCA'nın her birini birer birer PCM deliklerine yerleştirin.
Her bir bölmenin etrafındaki boru manşonunun üst kısmı PCM'deki delikleri çevreleyen yüzeye temas edene kadar aletle adaptöre sıkıca bastırdığınızdan emin olun. Kısmen monte edilmiş PCM'yi, PCM desteği ve altı vidayla birlikte bir kenara koyun. Muhafaza tertibatını takiben 30 dakika ve MRM istenen sıcaklığa ulaştıktan sonra, 50 mililitrelik bir pipet kullanarak, sıvıyı yanlardan aşağı doğru nazikçe dağıtarak önceden dengelenmiş perfüzatı önceden ısıtılmış MRM ekine aktarın.
Daha sonra, PCM'yi MRM'ye yerleştirmek için, PCM'nin altından çıkan TCA direnç tüplerini MRM bölücünün her iki tarafında dörder adet olmak üzere MRM eklerine yerleştirin. Modülü, yerleştirildikten sonra doku odaları oksijen dedektörüne dayanacak şekilde yönlendirin. Altı vida ve elektrikli tornavida kullanarak PCM'yi destek desteğine sabitleyin.
Ardından, sağlanan elastik bandı kullanarak TCA'ları PCM destek kanatçıkları içine sabitleyin ve lastik contalar seviyesinde kanatçıkların etrafına gerin. Oksijen dedektörünü, yüzünün PCM kanatçıklarına dayanmasını sağlayacak şekilde dedektör standına yerleştirin. Dedektör tutucunun yan tarafındaki vidaları gevşeterek ve gerekirse dedektörün yanal kılavuzlarını ayarlayarak LED fotodedektör çiftlerini doku odalarındaki oksijene duyarlı boya ile hizalayın.
Son olarak, kapağı muhafazanın üzerine yerleştirin. Dokuyu odalara yüklemek için, ortam seviyesi üstten 0,5 inç olana kadar bekleyin. Hasat edilen retinayı veya RPE koroid sklerasını yüklemek için, ince uçlu forseps kullanarak, retinayı her bir bölmeye katlamadan nazikçe yerleştirin.
Bu arada, doku haznesi sıvısının oksijen sensörüne damlamasını önlemek için bir mendil kullanın. Dokunun FRET'e doğru ve üzerine batmasına izin verin. RPE hücrelerini Transwell membranlarına yüklemek için, hazırlanan hücreleri% 0.25 tripsin EDTA ile geçirdikten sonra, 0.4 milimetre gözenek boyutuna sahip polietilen tereftalat paletli kazınmış filtrelere tohumlayın.
Deney gününde, zarları üç eşit genişlikte şerit halinde kesin ve forseps kullanarak doku odalarına yükleyin. Retinanın Oksijen Tüketim Oranı veya OCR, test bileşiklerinin enjekte edildiği süre boyunca sabitti, bu da dokunun stabil sağlığını ve işlevini gösterir ve yöntemin geçerliliğini destekler. Hem retina hem de RPE koroid sklera için konvansiyonel perfüzyon yöntemleri kullanılarak elde edilen verilerle tutarlı olarak, OCR oligomisin yanıtında azaldı ve FCCP'ye yanıt olarak arttı.
Laktat üretim hızındaki veya LPR'de gözlenen değişiklikler, OCR için gözlemlenenlerin tersiydi. Daha önce akım sistemleri ile analiz edilmemiş RPE hücreleri, bu yöntem kullanılarak RPE koroid skleraya benzer şekilde yanıt verdi.
